CircRNA-32011调控三氧化二砷诱导的心肌细胞凋亡

目的探究环状RNA-32011(CircRNA-32011)在三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)诱导心肌细胞凋亡中的作用。方法采用ATO(终浓度10μmol·L^(-1))孵育乳鼠原代心肌细胞24 h,应用MTT法检测心肌细胞存活率;RT-PCR检测circRNA-32011及凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax的mRNA表达水平,计算Bcl-2/Bax;Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白表达并计算Bcl-2/Bax。应用过表达质粒和siRNA分别过表达及敲减circRNA-32011验证其在ATO诱导的心肌细胞凋亡中的功能。结果ATO处理后,心肌细胞存活率明显下降,Bcl-2/Bax表达降低,CircRNA-32011表达下调;在ATO处理的心肌细胞中过表达circRNA-32011可明显提高心肌细胞存活率和Bcl-2/Bax表达;敲减circRNA-32011可进一步降低由ATO诱导的心肌细胞存活率和Bcl-2/Bax表达下调。结论CircRNA-32011抑制ATO诱导的心肌细胞凋亡,这将为ATO诱发的心肌损伤提供一种新的潜在治疗策略。

基于图神经网络和随机森林的CircRNA-疾病预测

环状RNA(CircRNA)广泛参与人类疾病的进程,其突变和失调与许多人类疾病密切相关.因此,建立一个高效准确的CircRNA与疾病之间的预测算法对于提前对疾病的发生做出预防以及发病后的治疗方案具有重要意义.提出了一种新的基于图神经网络和随机森林的算法预测CircRNA-疾病关联算法,在分层网络表示嵌入部分通过构建异构网络,根据网络图的邻近性,对网络图的节点和边缘进行分层,递归地合并原始图中的节点和边,得到若干具有相似特征的较小子网络.子网络规模随着分层的深入而递减,直至得到最小子网络后,使用node2vec网络图游走算法对其进行预处理,然后将全部节点的特征向量输入至随机森林分类器来识别潜在的CircRNA-疾病关联,从而进行预测.

CircRNA-0003340在2型糖尿病大鼠肝脏组织中的表达及意义

目的观察2型糖尿病大鼠肝脏组织中circRNA-0003340的表达,并探讨与糖尿病的关系。方法选取健康雄性SD大鼠30只,随机分为2组,正常对照组(NC组,n=10)与2型糖尿病组(T2DM组,n=20),检测FPG、FINs、HbA1c、TC、TG、HDL-C、LDL-C、AST、ALT;行腹腔注射糖耐量实验和胰岛素耐量实验,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色观察胰岛细胞形态;RT-PCR检测大鼠肝脏组织circRNA-000334的表达量。结果与NC组比较,T2DM组的AST、ALT、FPG、HAb1c、FINs、HOMA-IR、TG、TC、LDL-C均升高(P<0.05),HDL-C降低(P<0.05)。circRNA-0003340在T2DM组肝脏组织中的表达较NC组肝脏组织中的表达是下调的,差异有统计学意义(P<0.05)。Sperman相关分析示大鼠肝脏组织中circRNA-0003340表达水平与FPG、TG及TC呈负相关(P<0.05)。结论circRNA-003340的表达水平可能与T2DM大鼠的糖脂代谢密切相关,circRNA-003340在肝脏组织中的表达水平下调可能参与T2DM的发生发展。

基于MAPK通路探讨沉默CircRNA-100395对心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的:基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路探究沉默CircRNA-100395对心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法:选取36只大鼠,按照脂质体2000说明书对细胞进行转染CircRNA-100395 mimics及CircRNA-100395 inhibitor,将其分为缺血再灌注组、缺血预处理组、过表达组、沉默组。采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测各组CircRNA-100395表达量;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测MAPK蛋白、磷酸化p38蛋白(p-p38)、氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达量;比较各组心率、左心室舒张压(LVDP)、左心室收缩压(LVSP)。结果:缺血预处理组、过表达组CircRNA-100395表达量、LVSP水平明显低于缺血再灌注组,心率、LVDP水平及MAPK通路蛋白明显高于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(P<0.05);沉默组CircRNA-100395表达量、LVSP水平明显高于缺血预处理组、过表达组,LVDP、心率水平明显低于缺血预处理组、过表达组,差异均有统计学意义(P<0.05);过表达组MAPK通路蛋白表达量明显高于缺血预处理组,沉默组MAPK通路蛋白表达量明显低于过表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CircRNA-100395可能通过作用于MAPK信号通路,也可能通过沉默CircRNA-100395表达量减轻大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤。

circRNA-1565抑制CD8^(+)T细胞对宫颈癌细胞的杀伤功能研究

目的:探究circRNA-1565对CD8^(+)T细胞的作用及其对宫颈癌细胞杀伤能力的影响。方法:磁珠分选并用流式细胞术鉴定CD8^(+)T细胞。所得CD8^(+)T细胞分为Control组(转染空白质粒)和circRNA-1565组(转染circRNA-1565质粒)。CCK-8和流式细胞术检测Control组和circRNA-1565组CD8^(+)T细胞增殖能力和凋亡水平,Western blot检测Control组和circRNA-1565组CD8+T细胞Bcl-2、Bax和cleaved-caspase-3表达。将HeLa和SiHa细胞分别与Control组和circRNA-1565组CD8^(+)T细胞共孵育(HeLa+CD8^(+)T+Vector组、HeLa+CD8+T+circRNA-1565组、SiHa+CD8^(+)T+Vector组、SiHa+CD8+T+circRNA-1565组),检测各组CD8^(+)T细胞对HeLa和SiHa细胞的杀伤能力,ELISA检测共孵育后各组CD8^(+)T细胞分泌TNF-α、IFN-γ、Granzyme-B和perforin的能力。结果:磁珠分选的人PBMC CD8^(+)T细胞阳性率>88%。相比于Control组,circRNA-1565组CD8^(+)T细胞增殖能力显著下降(P<0.001),细胞凋亡显著增加(P<0.001),Bcl-2和Bax表达显著降低(P<0.001),cleaved-caspase-3表达显著增加。相比于HeLa+CD8+T+Vector组和SiHa+CD8^(+)T+Vector组,HeLa+CD8^(+)T+circRNA-1565组以及SiHa+CD8^(+)T+circRNA-1565组细胞上清中TNF-α、IFN-γ、Granzyme-B和perforin浓度均显著降低(P<0.001),对Hela和SiHa细胞杀伤能力显著降低(P<0.001)。结论:circRNA-1565调控CD8^(+)T细胞增殖和凋亡从而抑制其对宫颈癌细胞的杀伤能力。

circRNA-1565促进肿瘤相关巨噬细胞极化而诱导宫颈癌细胞的迁移和侵袭

目的研究circRNA-1565对巨噬细胞极化所介导的宫颈癌迁移和侵袭的影响及机制。方法将circRNA-1565过表达质粒以及Negative Control转染至M2型巨噬细胞(circRNA-1565组和Vector组),qRT-PCR检测circRNA-1565组和Vector组巨噬细胞CD16、TLR2、CD206和CD14表达,流式细胞术检测circRNA-1565组和Vector组巨噬细胞CD163和CD11B表达,Western blot检测各组细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活。将分别转染circRNA-1565过表达质粒以及Negative Control的M0型巨噬细胞与宫颈癌细胞HeLa共孵育(M0+Vector组和M0+circRNA-1565组),细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力,使用Transwell法检测细胞迁移和侵袭。结果相比于Vector组,circRNA-1565组巨噬细胞CD206和CD14表达显著上调(P<0.001),CD163+CD11B+细胞比例显著增加(P<0.001),PI3K/AKT/mTOR信号通路显著激活(P<0.001)。相比于M0+Vector组,M0+circRNA-1565组HeLa细胞划痕愈合率、细胞迁移和侵袭能力均显著增加(P<0.001)。结论circRNA-1565可显著诱导M2型巨噬细胞极化而促进宫颈癌细胞转移,其机制可能为激活PI3K/AKT/mTOR信号通路。

香砂六君子汤调控CircRNA-0067835对脾虚高脂血症大鼠胆固醇外排的影响

目的探讨香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠脂质沉积的影响及分子生物学机制。方法30只SD大鼠随机分成空白对照组、高脂组、脾虚高脂组、香砂六君子汤高剂量组及香砂六君子汤正常剂量组。使用不节饮食加游泳直至力竭的复合方法15 d,建立脾虚模型。随后饲喂高脂饲料10周,检测大鼠血脂水平,确定高脂血症模型复制成功后,香砂六君子汤高剂量组及正常剂量组分别给予香砂六君子汤11.34、5.67 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,其余3组给予相应体积的生理盐水灌胃,4周后取材。检测5组大鼠血脂水平。HE染色观察肝脏病理变化。qPCR法检测CircRNA-0067835、miR-155基因水平。qPCR及Western blot法检测PPARγ、LXR、ABCA1、ABCG1 mRNA及蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,高脂组和脾虚高脂组HE染色可见明显肿胀的肝脏细胞以及清晰的脂肪空泡,血清TC、TG、LDL-C水平以及miR-155基因表达升高(P<0.01),HDL-C水平,CircRNA-0067835基因表达,PPARγ、LXR、ABCA1、ABCG1 mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。相较于脾虚高脂组,香砂六君子汤高剂量组及正常剂量组TC、TG和LDL-C水平显著降低(P<0.01),HDL-C水平显著升高(P<0.01),肿胀的肝脏细胞得到明显改善、脂肪空泡减少,miR-155表达降低(P<0.01),CircRNA-0067835表达升高(P<0.01),PPARγ、LXR、ABCA1、ABCG1 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01)。香砂六君子汤高剂量组与正常剂量组之间部分存在统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论香砂六君子汤可能通过影响CircRNA-0067835调节PPARγ介导的胆固醇外排过程改善高脂血症大鼠胆固醇代谢异常,进而起到防治血脂异常的作用。

CircRNA-79530与TWIST形成正反馈回路调控滋养细胞EMT的机制

目的探究CircRNA-79530与TWIST形成正反馈回路调控滋养细胞EMT的机制。方法筛选20例严重早发先兆子痫的患者和20例非严重早发先兆子痫的患者的胎盘样本。重组荧光素酶实验检测TWIST与CircRNA-79530靶标关系;RT-PCR检测TWIST和CircRNA-79530mRNA表达;Ed U染色法和CCK-8法测定细胞增殖;Annexin V-FITC检测细胞凋亡;蛋白印迹检测EMT蛋白表达;Transwell细胞迁移和侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测凋亡蛋白表达。结果重度先兆子痫组较非重度先兆子痫组TWIST、CircRNA-79530mRNA表达降低(P<0.05)。对照组较TWIST转染组细胞凋亡率升高,细胞活力降低,E-钙粘着蛋白、波形蛋白、β-连环蛋白、MMP9表达降低,细胞迁移和侵袭减少,caspase-3、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论TWIST直接与CircRNA-79530结合形成正反馈,促进滋养细胞的增殖、迁移侵袭。