CircRNA_000121在伴有颈部淋巴结转移的甲状腺微小乳头状癌中的表达

目的 研究伴有颈部淋巴结转移的甲状腺微小乳头状癌(Papillary thyroid microcarcinoma, PTMC)中circRNA_000121表达情况。方法 以2022年1-4月在新疆医科大学第一附属医院血管甲状腺外科住院的60例患者作为研究对象。其中,PTMC伴有颈部淋巴结转移(中央区)[PTMC(L)组]患者30例,PTMC不伴有淋巴结转移(PTMC组)患者30例。收集所有患者术前外周血标本、术中甲状腺癌组织及一般资料。通过qRT-PCR检测2组患者血液和组织标本circRNA_000121、miR-146b-3p和MMP2的表达量。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析circRNA_000121对甲状腺微小乳头状癌是否伴有颈部淋巴结转移的诊断价值。采用二分类Logistic回归分析circRNA-000121与miR-146b-3p、miR-146b-3p与MMP2在PTMC外周血标本、组织标本中的表达水平与淋巴结转移的相关性。结果 qRT-PCR结果显示,与PTMC组患者比较,PTMC(L)组患者的外周血和组织标本中circRNA_000121、MMP2呈高表达,miRNA-146b-3p呈低表达,差异有统计学意义(P均<0.05)。经ROC分析结果显示,外周血曲线下面积(AUC)为0.964,置信区间(95%CI)0.915~1.000,灵敏度0.933,特异度1.000;组织标本AUC为0.943,置信区间(95%CI)0.874~1.000,灵敏度0.900,特异度0.967。二分类Logistic回归分析结果显示,circRNA_000121、miRNA-146b-3p、MMP2在外周血和癌组织中的表达均与淋巴结转移相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CircRNA_000121在PTMC(L)患者甲状腺癌组织标本中呈高表达,与外周血表达一致,circRNA_000121在PTMC发生淋巴结转移预测方面有一定作用,其有望成为PTMC发生颈部淋巴结转移的生物学标记物。

黄芩清热除痹胶囊对强直性脊柱炎湿热证患者感受、炎症因子及circRNA_0003307的影响

目的:观察黄芩清热除痹胶囊(HQC)对强直性脊柱炎湿热证患者感受、炎症因子及circRNA_0003307的影响。方法:将60例强直性脊柱炎湿热证患者随机分为治疗组和对照组,每组30例。对照组采用基础治疗,治疗组在对照组基础上联合HQC治疗。观察2组临床疗效(ASAS20、BASDAI50),以及治疗前后疾病活动[视觉模拟评分法(VAS)评分、Bath强直性脊柱炎疾病活动指数(BASDAI)、Bath强直性脊柱炎功能指数(BASFI)、C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)]、患者感受评分[生活质量简表(SF-36)、中医证候积分]、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-17、IL-23]、circRNA_0003307的变化。结果:治疗后,治疗组ASAS20、BASDAI50达标率明显高于对照组(P<0.05)。与治疗前比较,2组VAS评分、BASDAI、BASFAI、CRP、ESR、SF-36各维度评分、中医证候积分、TNF-α、IL-1β、IL-17、IL-23、circRNA_0003307明显改善(P<0.05)。与对照组治疗后比较,治疗组BASDAI、情感职能、社会功能、身体疼痛、精力、CRP、IL-23、circRNA_0003307明显改善(P<0.05)。结论:HQC可能通过调控circRNA_0003307,下调炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-17、IL-23表达,抑制免疫炎症反应,改善强直性脊柱炎患者关节功能和患者感受。

CircRNA_0001445在老年性骨质疏松症中的表达及临床意义

目的探究血浆circRNA_0001445在老年性骨质疏松症(senile osteoporosis,SOP)中的表达情况及其临床意义。方法选取2020年11月至2022年5月于常州市第一人民医院老年科住院的患者为研究对象,应用双能X射线吸收检测法(DXA)测量骨密度(bone mineral density,BMD)根据BMD结果分为SOP组、骨量减少组及骨量正常组,比较各组间临床资料及circRNA_0001445表达量,采用Pearson相关分析circRNA_0001445与骨密度的的相关性;采用二元Logistic回归分析SOP的危险因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析circRNA_0001445对SOP的诊断价值;采用配对t检验或配对秩和检验比较SOP治疗前后circRNA_0001445表达量变化。结果共纳入150例患者,每组各50例。SOP组circRNA_0001445表达量(0.58±0.30)明显低于骨量减少组(0.88±0.35)及骨量正常组(1.15±0.62),P<0.001;Pearson相关分析示circRNA_0001445表达量与腰椎BMD(r=0.427,P<0.001)、股骨颈BMD(r=0.363,P<0.001)及髋部BMD(r=0.435,P<0.001)存在正相关;二元Logistic回归示高TC(OR=2.740,95%CI:1.473-5.099)、低BMI(OR=0.674,95%CI:0.543-0.837)及circRNA_0001445(OR=0.019,95%CI:0.002~0.144)是SOP发生的危险因素,P<0.05。ROC曲线分析显示,circRNA_0001445可将SOP组与骨量正常组(AUC=0.810,95%CI:0.728~0.892)、骨量减少组(AUC=0.756,95%CI:0.662~0.849)及非SOP组(AUC=0.783,95%CI:0.706~0.860)区分开来。SOP治疗1年后circRNA_0001445表达量较前升高(1.13±0.61 vs 2.14±0.61),P<0.001。结论circRNA_0001445在SOP中低表达,对SOP的诊断及治疗监测具有一定临床价值。

CircRNA_0025039及CircRNA_0084043在恶性黑素瘤中的表达及其预测淋巴结转移的价值

目的:探讨环状RNA(circular RNA,CircRNA)_0025039及CircRNA_0084043在恶性黑素瘤组织中的表达及其预测淋巴结转移的价值。方法:选取59例恶性黑素瘤患者和35例色素痣患者,采用实时荧光定量PCR法检测恶性黑素瘤及色素痣CircRNA_0025039和CircRNA_0084043的表达水平,分析CircRNA_0025039和CircRNA_0084043表达水平与恶性黑素瘤患者临床特征的关系。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析CircRNA_0025039和CircRNA_0084043预测恶性黑素瘤淋巴结转移的价值。Pearson相关进行相关性分析。结果:恶性黑素瘤组织中CircRNA_0025039(5.06±2.42 vs.1.47±0.58)和CircRNA_0084043(2.60±1.15 vs.0.87±0.31)表达水平均高于色素痣组织(P<0.001)。恶性黑素瘤患者CircRNA_0025039和CircRNA_0084043表达水平升高与组织分级Ⅲ~Ⅳ级、肿瘤部位、低分化及淋巴结转移有关(P<0.001)。ROC曲线显示,CircRNA_0025039和CircRNA_0084043二项联合预测恶性黑素瘤淋巴结转移的曲线下面积为0.961(95%CI:0.902~0.997),其敏感度为97.4%,特异度为85.2%。相关分析显示,恶性黑素瘤组织CircRNA_0025039水平与CircRNA_0084043呈正相关(r=0.825,P<0.001)。结论:恶性黑素瘤组织中CircRNA_0025039和CircRNA_0084043水平明显升高,二项联合对预测恶性黑素瘤淋巴结转移具有一定的价值。

circRNA_0016418及circRNA_0017247异常表达对恶性黑色素瘤诊断及其预测淋巴结转移的价值

目的:探讨circRNA_0016418及circRNA_0017247异常表达对恶性黑色素瘤诊断及其预测淋巴结转移的价值。方法:选取2018年01月至2021年10月我院收治的68例恶性黑色素瘤患者,将其分为淋巴结转移组26例和无淋巴结转移组42例。采用实时荧光定量PCR法检测恶性黑色素瘤组织及正常组织中circRNA_0016418及circRNA_0017247的水平。应用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线分析circRNA_0016418及circRNA_0017247异常表达对恶性黑色素瘤诊断及其预测淋巴结转移的价值。Pearson相关分析检测恶性黑色素瘤患者中circRNA_0016418水平与circRNA_0017247水平的相关性。结果:恶性黑色素瘤组织中circRNA_0016418水平(2.64±1.17 vs 0.95±0.36)及circRNA_0017247水平(5.18±2.50 vs 1.52±0.63)均明显高于正常组织(P<0.001)。淋巴结转移组circRNA_0016418水平(3.85±1.72 vs 1.66±0.74)及circRNA_0017247水平(7.16±3.82 vs 3.38±1.54)均明显高于无淋巴结转移组(P<0.001)。ROC曲线显示,circRNA_0016418及circRNA_0017247二者联合诊断恶性黑色素瘤的曲线下面积为0.905(95%CI:0.847~0.964),其灵敏度为92.8%,特异度为83.5%;二者联合预测淋巴结转移的曲线下面积为0.957(95%CI:0.895~0.993),其灵敏度为98.0%,特异度为84.6%。相关分析显示,恶性黑色素瘤患者circRNA_0016418水平与circRNA_0017247水平呈正相关(r=0.802,P<0.001)。结论:恶性黑色素瘤组织中circRNA_0016418及circRNA_0017247水平明显升高,与淋巴结转移有关,二者联合检测对恶性黑色素瘤诊断及其预测淋巴结转移有很好的价值。

circRNA_079813调控ROR2和ERK1/2-MAPK信号通路对牙髓损伤大鼠成骨分化的影响

目的:探讨circRNA_079813对牙髓损伤模型大鼠成骨分化的作用及其机制。方法:将70只SD大鼠随机分为7组,即假手术组、牙髓损伤组、pcDNA3.1空载体(pcDNA-null)+牙髓损伤组、过表达circRNA_079813(pcDNA-circ)+牙髓损伤组、pcDNA-circ+siRNA-NC+牙髓损伤组、pcDNA-circ+siRNA-ROR2+牙髓损伤组、pcDNA-circ+PD98059(ERK1/2抑制剂)+牙髓损伤组,每组10只。术后3 d采用苏木精—伊红(HE)染色观察牙髓组织病理变化。检测各组碱性磷酸酶(ALP)活性,RTqPCR法检测circRNA_079813表达,western blotting法检测ROR2、磷酸化(p-)ERK1/2、骨涎蛋白(BSP)、骨钙蛋白(OCN)、ALP、牙本质涎磷蛋白(DSPP)和牙本质基质蛋白-1(DMP-1)蛋白表达。结果:与假手术组比较,牙髓损伤组牙髓组织有明显炎症浸润和损伤特征,circRNA_079813表达下调(P<0.05)。与pcDNA-null+牙髓损伤组比较,pcDNA-circ+牙髓损伤组circRNA_079813、ROR2、p-ERK1/2、BSP、ALP、OCN、DSPP、DMP-1表达水平及ALP活性均升高(均P<0.05)。沉默ROR2表达后,与pcDNA-circ+siRNA-NC+牙髓损伤组比较,pcDNA-circ+siRNA-ROR2+牙髓损伤组ROR2、p-ERK1/2、BSP、ALP、OCN、DSPP、DMP-1表达及ALP活性均下降(均P<0.05)。与pcDNA-circ+牙髓损伤组比较,pcDNA-circ+PD98059+牙髓损伤组pERK1/2、ALP、BSP、OCN、DSPP、DMP-1表达及ALP活性均下降(均P<0.05)。结论:circRNA_079813通过促进ROR2表达激活牙髓损伤大鼠ERK1/2-MAPK信号通路促进成骨分化。

circRNA_079813抑制牙髓细胞损伤的机制研究

目的探讨circRNA_079813对脂多糖(LPS)诱导的人牙髓细胞(hDPCs)损伤的作用和机制。方法原代分离培养脱落乳牙牙髓细胞,用免疫荧光化学法鉴定原代分离培养的hDPCs。将培养的hDPCs分为vector组、过表达circRNA_079813的重组载体组(circRNA_079813组)、腺相关病毒(AAV)空载体组(AAV-Null组)、Smad1过表达重组AAV载体组(AAV-Smad1组)、小干扰RNA(siRNA)沉默Smad1的重组载体组(si-Smad1组)以及siRNA阴性对照组(si-NC组)。另外,将hDPCs分为空白对照组(Control组)、LPS组、LPS+vector组、LPS+circRNA_079813组、LPS+circRNA_079813+si-NC组、LPS+circRNA_079813+si-Smad1组。采用CCK-8法和流式细胞术分别检测hDPCs的增殖活力和凋亡水平。ELISA法检测白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。检测碱性磷酸酶(ALP)活性、ALP蛋白表达水平以及茜素红S(ARS)染色程度以评估成骨分化能力。Western blot检测runt相关转录因子2(RUNX2)以及Smad1的蛋白水平。结果在LPS诱导的hDPCs中过表达circRNA_079813可增加hDPCs的增殖活性,提高成骨分化能力,抑制hDPCs的凋亡和炎症反应,提高Smad1和RUNX2的蛋白表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。在LPS基础上过表达Smad1与过表达circRNA_079813对hDPCs的影响一致(P<0.05),而沉默Smad1逆转了过表达circRNA_079813的上述效果(P<0.05)。结论过表达circRNA_079813通过Smad/RUNX2信号通路改善LPS诱导的hDPCs损伤。

针刺调控脑缺血再灌注损伤大鼠海马circRNA_011989和circRNA_009775表达

目的:观察针刺对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠缺血侧海马组织circRNA_011989和circRNA_009775表达的影响。方法:以SD大鼠为受试对象,通过线栓法制备CIRI模型,通过针刺(AC)手段进行治疗。采用Garcia评分法对大鼠神经功能进行评定,TTC染色法检测脑梗死体积比,运用靶点预测网站预测circRNA_011989、circRNA_009775结合的miRNAs及对应mRNAs,并采用Cytoscape构建circRNA-miRNA-mRNA共表达网络,通过qRT-PCR法检测缺血侧海马区circRNA_011989、circRNA_009775、miR-466b-5p、miR-3065-3p、Rims1、Slc30a3的表达。结果:与CIRI组相比,CIRI+AC处理组大鼠Garcia评分明显增加(P<0.01),梗死区体积缩小,患侧海马区circRNA_011989、circRNA_009775、Rims1、Slc30a3表达上调(P<0.05,P<0.01),miR-466b-5p、miR-3065-3p表达下降(P<0.05)。结论:针刺可能通过上调circRNA_011989和circRNA_009775的表达明显改善CIRI大鼠神经功能缺损症状,其具体机制可能与激活circRNA_011989/miR-466b-5p/Rims1和circRNA_009775/miR-3065-3p/Slc30a3轴有关。

外泌体和circRNA_101093在抑制肺腺癌铁死亡敏感性中的重要作用

背景与目的铁死亡是一种以铁依赖方式由脂质过氧化物过度积累引起的调节性细胞死亡,近年来发现铁死亡抵抗与肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)发生发展有关。细胞内抗氧化系统是抗铁死亡所必需的。本研究旨在探讨细胞外系统是否以及如何使LUAD细胞对铁死亡失去敏感性。方法在本研究中,使用已建立的人肺成纤维细胞(MRC-5、WI38)、人肺腺癌细胞(H1650、PC9、H1975、H358、A549和H1299细胞系)、LUAD肿瘤及相匹配的癌旁正常组织、健康个体及LUAD患者的血浆,应用免疫组化和免疫印迹方法分析蛋白表达,实时荧光定量PCR(quantitative reverse transcription-PCR,qPCR)法分析mRNA表达。通过测定细胞活力、细胞死亡和脂质活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成评估细胞对铁死亡的反应。通过透射电镜观察外泌体,用点击化学法配合共聚焦显微镜检测花生四烯酸(arachidonic acid,AA)的定位。采用RNA pull down、RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)、光激活核糖核酸苷增强交联和免疫沉淀(photoactivatable ribonucleoside-enhanced crosslinking and immunoprecipitation,CAR-CLIP)等方法检测RNA和蛋白质之间的相互作用。用蛋白质组学方法来分析RNA调控蛋白,用代谢组学方法分析代谢物。细胞源性异种移植物(cell derived xenograft,CDX)模型、患者源性异种移植物(patient-derived xenograft,PDX)模型、细胞植入肺内LUAD小鼠模型和来自LUAD患者的血浆/组织标本被用于分子机制的验证。结果LUAD患者血浆外泌体特异地降低了脂质过氧化,使LUAD细胞对铁死亡敏感性下降。可能的机制是在LUAD中,外泌体circRNA_101093(cir93)中维持了细胞内cir93的升高,调节AA,一种对铁死亡相关的质膜过氧化增加至关重要的多不饱和脂肪酸。对具体机制而言,cir93与脂肪酸结合蛋白3(acid-binding protein 3,FABP3)相互作用增加其表达,后者转运AA并促进其与牛磺酸的反应。因此,总体AA被降低,而N-花生四烯酰基牛磺酸(N-arachidonoyl taurine,NAT;AA和牛磺酸的产物)被诱导产生。值得注意的是,NAT在抑制AA合并到质膜中的作用也被揭示。在临床前的体内模型中,减少外泌体提高了以铁死亡为基础疗法的疗效。结论外泌体和cir93是抑制LUAD细胞铁死亡敏感性的关键,阻断外泌体可能有助于未来LUAD的治疗。

CircRNA_0001795及CircRNA_0048211在老年骨质疏松症中的表达

目的 探讨血清CircRNA_0001795及CircRNA_0048211表达水平对老年骨质疏松症(osteoporosis, OP)的诊断价值及其与骨密度(bone mineral density, BMD)的关系。方法 对2019年1月至2021年12月在海南西部中心医院体检的350名老年人进行BMD测量,分为OP组(n=145)、骨量减少组(n=156)和正常骨量组(n=49),比较各组血清CircRNA_0001795及CircRNA_0048211表达水平。应用多因素Logistic回归分析老年OP发生的影响因素,绘制ROC曲线分析CircRNA_0001795及CircRNA_0048211对老年OP的诊断价值。采用Pearson相关分析血清CircRNA_0001795及CircRNA_0048211表达水平与BMD的相关性。结果 OP组血清CircRNA_0001795(0.31±0.08 vs 1.24±0.51,2.28±0.96)及CircRNA_0048211(0.26±0.05 vs 0.91±0.40,1.63±0.58)表达水平均明显低于骨量减少组和正常组(P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,年龄(OR=1.684,95%CI:1.163~2.995)、PTH(OR=2.416,95%CI:1.702~5.883)、CircRNA_0001795(OR=3.108,95%CI:2.493~9.428)及CircRNA_0048211(OR=1.942,95%CI:1.335~4.117)是老年OP发生的影响因素(P<0.05)。CircRNA_0001795及CircRNA_0048211最佳截断值分别为0.85、0.68,二者联合诊断老年OP的AUC最大(0.918,95%CI:0.857~0.977),其准确性为91.2%。相关分析显示,老年OP患者血清CircRNA_0001795(r=0.804,P<0.001)及CircRNA_0048211(r=0.775,P<0.001)表达水平与BMD均呈正相关。结论 CircRNA_0001795及CircRNA_0048211在老年OP患者中呈低表达,其与BMD密切相关,二者联合检测对老年OP诊断具有很好的价值。

circRNA_09505介导M2型巨噬细胞极化失衡在强直性脊柱炎模型中的作用

目的:探讨circRNA_09505(circ09505)是否通过介导M2型巨噬细胞极化失衡参与强直性脊柱炎(AS)的发病机制。方法:采用高通量circRNA测序分析确定AS患者和健康对照者外周血单个核细胞(PBMC)中差异表达的circRNA。将SKG小鼠随机分为对照组、sh-NC组和sh-circ09505组,每组10只。各组小鼠通过腹腔注射3 mg可德胶以建立AS模型。对sh-circ09505组小鼠尾静脉注射circ09505敲减慢病毒,以检查circ09505敲减对AS进展的影响。体外考察circ09505过表达或敲减对巨噬细胞极化影响,并通过流式细胞术分析M1和M2型巨噬细胞比例。结果:circ09505是AS患者PBMC中上调最显著的circRNA。sh-circ09505组小鼠脊柱免疫细胞浸润和软骨破坏较sh-NC组减轻,脊柱炎评分显著降低(P<0.01)。与sh-NC组相比,sh-circ09505组中炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达显著降低(P<0.01),并且脊柱组织中CD11b+CD40+细胞数目显著降低(P<0.01),CD11b+CD206+细胞数目显著增加(P<0.01)。流式细胞术分析表明,circ09505过表达降低了M2巨噬细胞比例(P<0.01),而circ09505敲减则增加了M2巨噬细胞比例(P<0.01)。circ09505过表达增加了LPS+IFN-γ处理组的M1巨噬细胞比例(P<0.01),而circ09505敲减则降低了M1巨噬细胞比例(P<0.01)。结论:circ09505通过促进M1巨噬细胞极化和抑制M2巨噬细胞极化来加重AS小鼠的脊柱炎症损伤。

外泌体hsa_circRNA_042882在急性呼吸窘迫综合征中的诊断价值及与预后的关系

目的探讨外泌体hsa_circRNA_042882在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)中的诊断价值及与预后的关系。方法回顾性选取2020年1月至2021年12月南京中医药大学附属医院重症监护室收治的ARDS患者113例,设为ARDS组。另选同院体检健康者53名作为正常组。按照氧合指数的水平不同分为轻度组(氧合指数200~300 mmHg,n=37)、中度组(氧合指数>100~200 mmHg,n=51)和重度组(氧合指数≤100 mmHg,n=25)。按照入院28 d内是否死亡将患者分为生存组(n=92)和死亡组(n=21)。收集患者的临床资料,观察血清外泌体的形态,qRT-PCR检测血清外泌体中circRNA_042882的表达,对不同程度、不同预后的ARDS患者临床资料及血清外泌体circRNA_042882表达水平进行对比,采用Logistic回归分析分析ARDS预后的影响因素,Person相关分析circRNA_042882表达水平与氧合指数及急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析circRNA_042882表达水平、氧合指数APACHEⅡ评分对ARDS患者预后的诊断价值。结果透射电镜下观察ARDS组和正常组血清中外泌体呈茶盘状结构。ARDS组患者血清外泌体circRNA_042882表达水平为0.27±0.04,明显低于正常组(1.59±0.17),差异有统计学意义(P<0.05)。重度组、中度组的ARDS患者氧合指数和circRNA_042882水平显著低于轻度组,APACHEⅡ评分明显高于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组ARDS患者氧合指数和circRNA_042882表达水平分别为(151.98±22.89)mmHg、0.15±0.02,均显著低于生存组[(229.26±32.64)mmHg、0.73±0.07],APACHEⅡ评分为(24.18±6.95)分,明显高于生存组[(14.69±4.98)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。氧合指数升高和circRNA_042882升高为ARDS患者预后的保护因素(P<0.05),APACHEⅡ评分为ARDS患者预后独立危险因素(P<0.05)。血清外泌体circRNA_042882表达水平与氧合指数呈正相关(r=0.295,P<0.001),血清外泌体circRNA_042882表达水平与APACHEⅡ评分呈负相关(r=-0.519,P<0.001);血清外泌体circRNA_042882表达水平、氧合指数及APACHEⅡ评分及三者联合预测ARDS预后的曲线下面积分别为0.892、0.838、0.797及0.859,以血清外泌体circRNA_042882表达水平预测价值为最高(P<0.001)。结论ARDS患者血清外泌体中circRNA_042882表达水平表达降低,与ARDS患者病情进展和预后相关,对ARDS患者预后具有一定的诊断价值。

circRNA_0031269调控miR-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移

目的 探讨circRNA_0031269调控mi R-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移。方法 选取深圳市南山区前海蛇口自贸区医院2020年3月—2021年4月妇科肿瘤专科收治的40例宫颈癌患者,经手术治疗切除的癌组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶联反应(quantitativereal-time PCR,q RT-PCR)检测不同组织中circ RNA_0031269和mi R-127-3p的相对表达;双荧光素酶报告基因检测观察circRNA_0031269和miR-127-3p的靶向关系。采用MTT、Transwell细胞实验检测宫颈癌细胞增殖、迁移能力。结果 癌组织中circ RNA_0031269表达高于癌旁组织,mi R-127-3p表达低于癌旁组织(P<0.05);miR-127-3p过表达可降低WT-circ RNA0031269的荧光酶活性,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);anti-miR-127-3p过表达可抑制He La细胞增殖、迁移,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);抑制circ RNA_0031269表达可抑制He La细胞增殖、迁移,上调miR-127-3p表达,与si-NC组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 circ RNA0031269可通过上调miR-127-3p表达降低宫颈癌He La细胞的增殖和迁移。

敲除hsa_circRNA_102958调节胰腺癌PANC-1细胞增殖、氧化应激和线粒体功能

目的探讨敲除hsa_circRNA_102958对胰腺癌PANC-1细胞增殖、氧化应激和线粒体功能的影响。方法胰腺癌PANC-1细胞转染shRNA-NC和3种不同的circ_102958shRNA序列,RT-PCR检测circRNA_102958表达,选取干扰效果最好的circ_102958 shRNA1进行后续实验,CCK8检测细胞增殖倍数;Hoechst染色观察细胞形态变化;总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒、丙二醛(MDA)检测试剂盒和DCFH-DA试剂盒分别测定SOD、MDA、活性氧(ROS)含量;流式检测JC-1红/绿荧光比值;Western blot检测Bax/Bcl-2、cleaved cas9/cas9、cleaved cas3/cas3、c-Myc蛋白表达。结果与Control组相比,干扰circRNA_102958表达抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖能力(P<0.05),细胞形态趋于紊乱,凋亡细胞增多,MDA和ROS含量上调(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),JC-1红/绿荧光比值下调(P<0.05),Bax/Bcl-2、cleaved cas9/cas9和cleaved cas3/cas3蛋白表达增高(P<0.05)。结论干扰circRNA_102958表达抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖能力和线粒体功能,促进细胞凋亡和氧化应激水平。

CHOP疗法对T细胞淋巴瘤Hut 78和HH细胞环状RNA circ＿001569及其下游蛋白表达的影响

目的探索CHOP疗法对T细胞淋巴瘤细胞中环状RNA circ_001569及其下游功能蛋白的影响。方法分别采用CHOP疗法中的4种化疗药物[环磷酰胺(1μmol/L)、羟基柔红霉素(0.2μmol/L)、长春新碱(1μmol/L)、泼尼松(1μmol/L)]处理T细胞淋巴瘤Hut78和HH细胞,以常规培养细胞作为对照。分组处理24 h后检测各组细胞增殖情况,采用特异性逆转录环状RNA和茎环法逆转录miRNA,实时定量PCR检测各组circRNA_001569、miR-145和BAG4 mRNA的表达水平,Western Blot检测BAG4蛋白表达。结果 4种药物均可显著抑制Hut78细胞和HH细胞增殖(P<0.05)。经过羟基柔红霉素、长春新碱处理后,Hut78和HH细胞circRNA_001569的表达水平降低,其下游分子miR-145表达上调,BAG4 mRNA和蛋白表达下调。结论 CHOP疗法治疗T细胞淋巴瘤的过程中,环状RNAcircRNA_001569可能起到了重要的调控作用。

干扰circRNA_002178抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为

目的:探讨干扰circRNA_002178对胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭、炎症反应的影响。方法:RT-qPCR检测临床样本癌组织和癌旁组织中circRNA_002178的表达;转染分组后采用RT-qPCR检测不同转染序列中circRNA_002178的表达,筛选干扰效果最佳序列组;CCK8法检测细胞增殖率;克隆形成法检测细胞形成率;流式检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平;RT-qPCR检测VEGF mRNA表达水平;Western blot检测VEGF蛋白表达水平;Transwell检测侵袭;ELISA检测血清炎症因子含量。结果:胶质瘤组织circRNA_002178表达水平明显高于癌旁组织,选用胶质瘤细胞U-251进行后续实验,选择干扰效果最为显著的circ_002178-shRNA2组为后续实验干扰组。与shRNA-NC组相比,circ_002178-shRNA2组胶质瘤细胞凋亡率与克隆形成率明显降低;胶质瘤细胞凋亡率及Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高;胶质瘤细胞VEGF及其VEGF mRNA表达明显降低,侵袭细胞数量明显减少;促炎因子IL-6、iNOS水平降低,抗炎因子IL-10水平升高。结论:干扰circRNA_002178可抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭、炎症反应,诱导其凋亡,并有效抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为,有望成为治疗胶质瘤的新靶点。

CircRNA_000809通过miR-200c-3p对子宫内膜异位症间质细胞的增殖、迁移及上皮间质转化的影响

目的:探讨circRNA_000809通过靶向miR-200c-3p调控子宫内膜异位症间质细胞增殖、迁移及上皮-间质转化(EMT)的作用。方法:收集2020年1月至2022年1月于温州医科大学附属第二医院育英儿童医院行卵巢囊肿剥除术患者的卵巢巧克力囊肿组织25例,设为子宫内膜异位症组;收集25例正常子宫内膜组织,标本来自于因早期宫颈癌行子宫切除术或者行宫腔镜检查术的育龄期非子宫内膜异位症患者,设为正常子宫内膜组。采用qRT-PCR法检测正常子宫内膜、异位内膜组织中circRNA_000809、miR-200c-3p的表达量;分别采用EdU实验和Transwell实验检测异位子宫内膜间质细胞的增殖及迁移;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测相关蛋白表达水平。结果:与正常子宫内膜组织比,异位子宫内膜中circRNA_000809表达上调(P<0.05),而miR-200c-3p的表达下调(P<0.05);且Pearson相关性分析显示在异位子宫内膜组织中circRNA_000809与miR-200c-3p的表达量呈负相关(P<0.05);分别用siNC+inhibitor NC、sicircRNA_000809+inhibitor NC和si-circRNA_000809+miR-200c-3p inhibitor共转染异位子宫内膜间质细胞,结果显示与siNC+inhibitor NC组比,si-circRNA_000809+inhibitor NC组异位子宫内膜间质细胞增殖和迁移能力减弱,ZEB1/ZEB2的蛋白水平也降低(P<0.05);而si-circRNA_000809+miR-200c-3p inhibitor组异位子宫内膜间质细胞增殖、迁移能力及ZEB1/ZEB2蛋白的表达较si-circRNA_000809+inhibitor NC组均有上升,但较siNC+inhibitor NC组下降(P<0.05)。结论:抑制circRNA_000809表达可通过上调miR-200c-3p的表达从而抑制子宫内膜异位症间质细胞的迁移及EMT。

环状RNA _005647通过结合miR-99b-5p抑制心肌细胞中肥厚相关基因的表达

目的研究环状RNA circRNA_005647抑制心肌肥厚相关基因表达的作用机制。方法建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)灌注诱导的心肌肥厚小鼠模型。原代分离获得C57BL/6乳小鼠心肌细胞(NMVC),AngⅡ处理NMVC建立心肌细胞肥大模型。利用NMVC,分别感染circRNA_005647重组腺病毒(rAd-circRNA_005647)和转染miR-99b-5p模拟物来研究对NMVC肥大的影响。通过双荧光素酶报告基因实验和RNA Pull-down实验验证circRNA_005647与miR-99b-5p的结合作用。实时荧光定量PCR和Western blot检测NMVC中心肌肥厚相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果在AngⅡ诱导的小鼠心肌肥厚模型和心肌细胞肥大模型中,circRNA_005647及其宿主基因肌球蛋白IXA(Myo9a)表达升高。过表达circRNA_005647可抑制AngⅡ诱导的NMVC中肥厚相关基因心房钠尿肽(Anp)和肌球蛋白重链7(Myh7)基因表达升高。circRNA_005647与miR-99b-5p间存在结合作用。过表达circRNA_005647可抑制miR-99b-5p促心肌细胞肥大的作用。结论circRNA_005647通过结合miR-99b-5p发挥抑制心肌细胞肥大的作用。

ox-LDL刺激的巨噬细胞中circRNAs差异表达及功能预测

目的:探究环状RNAs(circRNAs)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激的巨噬细胞中的差异表达情况及功能预测。方法:采用人单核细胞系THP-1,用佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)预处理细胞48 h,随后给予ox-LDL 50μg/mL刺激单核源巨噬细胞24 h构建巨噬细胞炎症模型。利用microarray芯片筛选出差异表达的circRNAs。通过qRT-PCR实验检测芯片中差异表达的circRNAs。利用CircInteractome、TargetScan和miRecords数据库预测circRNA_0007478潜在的靶基因。结果:芯片筛选结果提示在ox-LDL刺激的巨噬细胞中有5条circRNAs表达显著上调,2条circRNAs表达显著下调。qRT-PCR证实其中4条表达显著上调,2条表达显著下调。生物信息学分析推测,circRNA_0007478可通过结合miRNA-765进而影响下游蛋白的表达,发挥潜在的调控作用。结论:在ox-LDL刺激的巨噬细胞中存在circRNAs的差异性表达,circRNA_0007478可能通过结合miRNA-765调控下游基因参与动脉粥样硬化进程。

血清CircRNA_100367与鼻咽癌患者放疗敏感性及预后的相关性

目的探讨血清circRNA_100367与鼻咽癌(NPC)患者放疗敏感性及预后的相关性。方法收集2010年9月至2017年10月在鄂州市中心医院头颈外科耳鼻咽喉科接受根治性放疗的NPC患者(NPC组)血清样本222例,另收集同时期体检健康人(对照组)血清样本200例。根据放疗反应性将NPC患者分为放射敏感组和抵抗组。采用实时荧光定量PCR法检测2组血清circRNA_100367水平,并根据其水平将NPC患者分为高表达组和低表达组。单因素和多因素Logistic回归分析血清circRNA_100367水平与NPC患者临床病理特征、放疗反应及预后的关系。结果NPC组血清circRNA_100367水平显著高于对照组(P<0.001),且与患者年龄、TNM分期有关(均P<0.05)。放射敏感组(n=149)血清circRNA_100367水平低于抵抗组(n=73)(P<0.001)。血清circRNA_100367水平是放疗反应的独立预测因子(P<0.05)。血清circRNA_100367用于NPC诊断和放疗反应预测的ROC曲线下面积分别为0.857(95%CI:0.821~0.892)、0.860(95%CI:0.807~0.913)。低表达组(n=148)和高表达组(n=74)患者随访期间无病生存率分别为77.0%、47.3%(χ^(2)=22.647,P<0.001),总生存率分别为81.8%、59.5%(χ^(2)=11.978,P=0.001),无远处转移生存率分别为90.5%、68.9%(χ^(2)=18.694,P<0.001)。结论NPC患者血清中circRNA_100367表达显著上调,且与患者放射抵抗性及预后有关,提示其可能是评估NPC放疗效果和预后的标志物。