CircSERPINE2靶向miR-23a-3p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的:探讨CircSERPINE2对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:选取于武汉市第四医院就诊的44例RA患者和健康体检者的外周血,培养滑膜成纤维细胞(FLSs)和RA滑膜成纤维细胞(RA-FLSs),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CircSERPINE2和miR-23a-3p表达水平;将RA-FLSs随机分为NC组、pcDNACircSERPINE2组、pcDNA组、anti-miR-23a-3p组、anti-miR-NC组、miR-23a-3p+pcDNA-CircSERPINE2组、miR-NC+pcDNA-CircSERPINE2组;CCK-8检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移数和侵袭数;双荧光素酶报告实验检测CircSERPINE2和miR-23a-3p的靶向关系。结果:RA患者外周血中CircSERPINE2表达水平低于健康体检者,而miR-23a-3p表达水平高于健康体检者(P<0.05)。与FLSs比较,RA-FLSs中CircSERPINE2表达水平降低,而miR-23a-3p表达水平升高(P<0.05)。过表达CircSERPINE2或抑制miR-23a-3p表达,细胞活性降低,迁移和侵袭细胞数减少(P<0.05)。CircSERPINE2靶向调控miR-23a-3p。miR-23a-3p过表达可逆转CircSERPINE2过表达对RA-FLSs的影响。结论:CircSERPINE2过表达可通过靶向调控miR-23a-3p抑制RA滑膜成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭。

circSERPINE2靶向miR-34a-5p调控肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤

目的探讨circSERPINE2对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎症反应、细胞凋亡的影响及其对miR-34a-5p的调控作用。方法体外培养肺泡上皮细胞A549,随机分为对照组、感染组、感染+pcDNA组、感染+pcDNA-circSERPINE2组、感染+anti-miR-NC组、感染+anti-miR-34a-5p组、感染+pcDNA-circSERPINE2+miR-NC组、感染+pcDNA-circSERPINE2+miR-34a-5p组;采用qRT-PCR法检测circSERPINE2与miR-34a-5p的表达量;采用ELISA法检测IL-10、IL-6的水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测circSERPINE2与miR-34a-5p的靶向关系。采用Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果与对照组比较,感染组circSERPINE2的表达水平降低(P<0.05),miR-34a-5p的表达水平升高(P<0.05),IL-10的水平和Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),IL-6的水平、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高(P<0.05);转染pcDNA-circSERPINE2或转染anti-miR-34a-5p后,IL-10的水平和Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05),IL-6的水平、细胞凋亡率和Bax蛋白水平降低(P<0.05);circSERPINE2可靶向负调控miR-34a-5p的表达;共转染pcDNA-circSERPINE2与miR-34a-5p mimics可恢复转染pcDNA-circSERPINE2对细胞炎症及细胞的作用。结论circSERPINE2过表达可通过下调miR-34a-5p的表达抑制炎症反应及细胞凋亡从而减轻肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤。

基于CircSERPINE2-miR-1271-5P-ERG轴探讨针刀对膝关节骨关节炎兔膝关节软骨细胞凋亡的影响

目的:基于CircSERPINE2-miR-1271-5P-E26特异性转化相关基因(ERG)轴,观察针刀对膝关节骨关节炎(KOA)兔膝关节软骨细胞凋亡的影响,探讨针刀治疗KOA的作用机制.方法:将36只新西兰大白兔随机分成正常组、模型组、针刀组、假针刀组,每组9只.除正常组外,其余3组采用改良Videman法制备KOA模型.造模成功后,针刀组于患侧膝关节股四头肌肌腱、内外侧副韧带附近条索状粘连、结节行针刀干预,假针刀组于针刀组进针点旁侧仅刺入针刀,不做任何操作.均每周1次,共3次.采用Lequesne MG行为学评分于干预前后评估各组兔膝关节损害程度.干预后,采用HE染色法和透射电镜观察各组兔膝关节软骨组织形态和软骨细胞超微结构;TUNEL法检测各组兔膝关节软骨细胞凋亡水平;实时荧光定量PCR法检测各组兔膝关节软骨组织CircSERPINE2、miR-1271-5P、ERG mRNA表达.结果:干预后,与正常组比较,模型组Lequesne MG行为学评分升高(P<0.01);与模型组和假针刀组比较,针刀组Lequesne MG行为学评分降低(P<0.01).模型组、假针刀组软骨细胞数量及细胞器数量减少,细胞核固缩,线粒体肿胀或消失;针刀组软骨细胞数量及细胞器数量增加,未见细胞核明显固缩,线粒体无明显肿胀.与正常组比较,模型组软骨细胞凋亡数量增多(P<0.01);与模型组和假针刀组比较,针刀组软骨细胞凋亡数量减少(P<0.01,P<0.05).与正常组比较,模型组CircSERPINE2、ERG mRNA表达降低(P<0.01),miR-1271-5P mRNA表达增加(P<0.01);与模型组和假针刀组比较,针刀组CircSERPINE2、ERG mRNA表达增加(P<0.01),miR-1271-5P mRNA表达降低(P<0.01).结论:针刀可以减轻KOA兔膝关节损害,减少软骨细胞凋亡,可能与上调CircSERPINE2和ERG mRNA表达、抑制miR-1271-5P mRNA表达有关.

敲减circSERPINE2通过靶向调控miR-34a-5p表达抑制滋养层细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨circSERPINE2对滋养层细胞HTR8/SVneo增殖、迁移和侵袭的影响和可能机制。方法收集37例子痫前期患者胎盘组织和37例正常妊娠孕妇胎盘组织。体外培养滋养层细胞HTR8/Svneo,转染circSERPINE2小干扰RNA(si-circSERPINE2)或miR-34a-5p模拟物、或共转染circSERPINE2小干扰RNA与miR-34a-5p抑制剂至HTR8/Svneo细胞。qRT-PCR法检测circSERPINE2和miR-34a-5p表达;CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖;划痕实验、Transwell和Western blot法分别检测细胞迁移、侵袭及细胞中E-cadherin和N-cadherin表达。双荧光素酶报告基因实验证实circSERPINE2和miR-34a-5p的靶向关系。两组间比较采用配对样本t检验或独立样本t检验;多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果与正常胎盘组织比较,子痫前期患者胎盘组织中circSERPINE2的表达(0.37±0.04比1.00±0.11)降低,miR-34a-5p的表达(3.50±0.28比1.00±0.08)升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。与si-NC比较,si-circSERPINE2的HTR8/Svneo细胞中circSERPINE2表达水平(0.31±0.03比1.01±0.06)、细胞活力、克隆形成数、侵袭数、划痕愈合率及N-cadherin表达下降,E-cadherin表达增高(P均<0.05);与miR-NC比较,转染miR-34a-5p的HTR8/Svneo细胞活力、克隆形成数、侵袭数、划痕愈合率及N-cadherin表达下降,miR-34a-5p(3.48±0.32比1.00±0.00)、E-cadherin表达增高(P均<0.05)。circSERPINE2靶向负调控miR-34a-5p。下调miR-34a-5p可逆转敲减circSERPINE2对HTR8/Svneo细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论circSERPINE2在子痫前期患者胎盘组织中表达下调,敲减circSERPINE2可能通过靶向负调控miR-34a-5p表达抑制滋养层细胞增殖、迁移和侵袭。

连翘酯苷A对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的影响

目的探讨连翘酯苷A对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及其可能的作用机制。方法采用50 mg/L IL-1β诱导人关节软骨细胞建立细胞损伤模型,记为模型组;另取未处理细胞为对照组。采用1.25、2.5、5.0μmol/L不同浓度的连翘酯苷A处理软骨细胞,依次记为连翘酯苷A低、中、高剂量组。ELISA法检测炎症因子[IL-1β、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率,qRT-PCR检测circSERPINE2表达量。pcDNA、pcDNA-circSERPINE2转染至软骨细胞后用IL-1β处理,si-NC、si-circSERPINE2分别转染至软骨细胞后用连翘酯苷A与IL-1β共同处理24 h,采用ELISA法检测IL-1β、IL-6、TNF-α的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果连翘酯苷A作用于IL-1β诱导的软骨细胞后,炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平、细胞凋亡率、Bax蛋白水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白、circSERPINE2表达水平升高(P<0.05);转染pcDNA-circSERPINE2后炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)表达水平及细胞凋亡率、Bax蛋白水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05);转染si-circSERPINE2后,炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平、细胞凋亡率、Bax蛋白水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05)。结论连翘酯苷A可通过上调circSERPINE2表达而抑制细胞炎症因子表达及细胞凋亡,从而减轻IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤。