circSHKBP1通过靶向miR-125a-5p调控结肠癌细胞增殖和凋亡

背景 结肠癌是临床上常见的一种恶性肿瘤,有研究报道,环状RNA(circular RNA,circR NA)参与结肠癌的发生发展.其中,circSHKBP1作为癌基因促进癌症进展,因此我们假设circSHKBP1也参与结肠癌的发展.目的 探讨circSHKBP1对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响及其可能作用机制.方法 选取本院2020-03/2020-07的69例结肠癌组织及癌旁组织标本,qRT-PCR检测circSHKBP1、miR-125a-5p的表达量;体外培养人结肠癌细胞HT29,随机分组:sh-NC组、sh-circSHKBP1组、miR-NC组、miR-125a-5p组、sh-circSHKBP1+anti-miR-NC组、shcircSHKBP1+anti-miR-125a-5p组;采用MTT法、平板克隆形成、和流式细胞术检测细胞增殖、克隆形成及凋亡;采用双荧光素酶报告验证miR-125a-5p过表达对野生型(wild-type,WT)载体wt-circSHKBP1的荧光素酶活性;采用Western blot检测b细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(BCL-2-associated X protein,Bax)蛋白表达.结果 在结肠癌组织中circSHKBP1的表达上调(P<0.05),miR-125a-5p的表达下降(P <0.05);相对sh-NC组,沉默circSHKBP1显著降低结肠癌细胞的增殖率、提高凋亡率和Bax的表达,降低了细胞克隆形成数,减少Bcl-2的表达(P<0.05);miR-125a-5p过表达可降低wt-circSHKBP1的荧光素酶活性(P <0.05);与miR-NC组对照,miR-125a-5p组降低增殖率、提高凋亡率和Bax的表达,减少细胞克隆形成数,降低Bcl-2的表达(P<0.05);相对sh-circSHKBP1+anti-miR-NC组,shcircSHKBP1+anti-miR-125a-5p组提高了肿瘤细胞增殖率、降低了凋亡率和Bax的表达,增加了细胞克隆形成数,提高了Bcl-2的表达(P<0.05).结论 敲低circSHKBP1可通过靶向miR-125a-5p表达抑制结肠癌细胞增殖并促进细胞凋亡.

CircSHKBP1通过miR-1294调控胃癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的机制研究

目的探究环状RNA SH3结构域激酶结合蛋白1(circular RNA SH3 binding protein 1,CircSHKBP1)对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及作用机制。方法应用回访调查法跟踪CircSHKBP1高表达和低表达的90例胃癌患者的生存期。荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)实验检测40例胃癌组织和正常胃上皮细胞GES1、胃癌细胞MGC803、HGC27、BGC823及不同方式处理的BGC823细胞中CircSHKBP1、miR-1294的信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达。用细胞计数试剂盒(Cell counting kit,CCK-8)法检测细胞增殖率、迁移侵袭小室法(Transwell)检测细胞迁移侵袭率和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-fluorescein isothiocyanate,Annexin V-FITC)法检测细胞凋亡率。双荧光素酶报告基因检测实验检测CircSHKBP1与miR-1294的结合能力。结果CircSHKBP1高表达的患者的生存期显著低于CircSHKBP1高表达的患者(P<0.05)。CircSHKBP1mRNA在胃癌组织中的表达较正常胃组织明显上调(P<0.05)。CircSHKBP1mRNA在胃癌细胞中的表达显著高于GES1细胞(P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-CircSHKBP1组细胞中CircSHKBP1 mRNA表达显著升高(P<0.05),细胞增殖率、迁移率和侵袭率均明显升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。荧光素酶检测显示,miR-1294组细胞的荧光活性显著低于miR-NC组(P<0.05),与anti-miR-NC组比较,anti-miR-1294组荧光活性变化不明显(P>0.05)。胃癌组织中miR-1294与CircSHKBP1的mRNA的表达水平成负相关。与正常胃组织组比较,T1-T2组、T3-T4组胃癌组织中的miR-1294 mRNA的表达水平均显著降低(P<0.05)。与GES1组比较,MGC803、HGC27、BGC823细胞中的miR-1294 mRNA的表达水平也均显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-1294组细胞中miR-1294表达显著升高(P<0.05),细胞增殖率、迁移率和侵袭率均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与pcDNA-SHKBP1+miR-NC组比较,pcDNA-SHKBP1+miR-1294组细胞的增殖率、迁移率和侵袭率均显著降低(P<0.05),细胞的凋亡率显著升高(P<0.05)。结论CircSHKBP1能够增强胃癌细胞的增殖、迁移侵袭能力,抑制凋亡能力,其机制与靶向miR-1294相关联,这将为CircSHKBP1用于胃癌的诊断、治疗提供依据。