circUCK2靶向miR-483-5p调控oxLDL诱导的血管内皮细胞氧化应激和细胞凋亡机制研究

目的探讨circUCK2对oxLDL诱导的血管内皮细胞氧化应激和细胞凋亡的影响及分子机制。方法人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)分为对照(Con)组、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)组、oxLDL+pcDNA组、oxLDL+pcDNA-circUCK2组、oxLDL+anti-miR-NC组、oxLDL+anti-miR-483-5p组、oxLDL+pcDNA-circUCK2+miR-NC组、oxLDL+pcDNA-circUCK2+miR-483-5p组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circUCK2和miR-483-5p的表达水平;试剂盒检测细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测circUCK2和miR-483-5p的靶向关系。结果oxLDL诱导的血管内皮细胞中circUCK2表达水平降低,miR-483-5p表达水平升高,MDA含量升高,SOD、GSH-Px活性降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白表达水平升高(P<0.05)。过表达circUCK2或抑制miR-483-5p表达,oxLDL诱导的血管内皮细胞中MDA含量降低,SOD、GSH-Px活性升高,细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达水平升高,Bax蛋白表达水平降低(P<0.05)。StarBase预测发现circUCK2的序列中含有与miR-483-5p互补的核苷酸序列;WT-circUCK2与miR-483-5p共转染后的血管内皮细胞荧光素酶活性降低,而MUT-circUCK2与miR-483-5p共转染后的血管内皮细胞荧光素酶活性无显著变化(P>0.05)。过表达circUCK2后miR-483-5p表达水平降低;抑制circUCK2表达后miR-483-5p表达水平升高(P<0.05)。与oxLDL+anti-miR-NC组比较,oxLDL+anti-miR-483-5p组血管内皮细胞中miR-483-5p表达水平降低,MDA含量降低,SOD、GSH-Px活性升高,细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达水平升高,Bax蛋白表达水平降低(P<0.05)。与oxLDL+pcDNA-circUCK2+miR-NC组比较,oxLDL+pcDNA-circUCK2+miR-483-5p组血管内皮细胞中miR-483-5p表达水平升高,MDA含量升高,SOD、GSH-Px活性降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论过表达circUCK2可通过靶向下调miR-483-5p抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞氧化应激和细胞凋亡。