肺腺癌患者组织中circ_0000620的表达和患者化疗耐药的相关性

目的检测circ_0000620在肺腺癌患者组织中的表达并且分析其与患者化疗耐药的相关性。方法选取2018年1月至2020年1月在郑州大学第一附属医院确诊的120例肺腺癌患者的癌组织及癌旁组织,其中男73例,女47例,年龄≥55岁者71例,<55岁者49例,化疗耐药者28例,化疗敏感者92例。采用环状RNA(circRNA)高通量测序技术筛选出差异性表达的circRNA;使用divergent primer和测序技术证明circ_0000620在肺腺癌组织中是否存在且为环状;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人肺腺癌组织、癌旁组织、肺腺癌细胞株(A549、PC-9、SPC-A-1、NCI-H1299、NCI-H1395)和正常人支气管上皮细胞(NHBE)中circ_0000620的表达情况。结果circ_0000620在肺腺癌组织中存在且为环状;肺腺癌组织中circ_0000620的表达水平高于其配对癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);与化疗敏感组相比,化疗耐药组circ_0000620的表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),而比较不同性别、不同年龄组中circ_0000620的表达水平,差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺腺癌患者组织中circ_0000620高表达,且在患者化疗耐药组中水平更高。

敲低circ_0000620表达对肺腺癌A549细胞凋亡和顺铂敏感性的影响

目的:探讨敲低circ_0000620表达对肺腺癌A549和顺铂耐药A549(A549/DDP)细胞凋亡和顺铂敏感性的影响。方法:设计针对circ_0000620的siRNA靶序列,分别构建敲低circ_0000620表达的A549和A549/DDP细胞株(实验组),并构建感染sh-NC(阴性对照)的细胞株(对照组),qRT-PCR检测circ_0000620表达量,验证敲低效果。敲低circ_0000620后,利用CCK-8方法检测顺铂对各组细胞活力的影响,并计算顺铂药物半数抑制浓度(IC_(50));利用Caspase-3/7活性和Tunel方法检测敲低circ_0000620表达后A549和A549/DDP细胞的凋亡率。利用敲低circ_0000620表达后A549和对照A549细胞接种BALB/c裸鼠,7 d成瘤后,腹腔注射顺铂(2 mg/kg)进行药物干预,观察肿瘤的生长曲线,28 d后处死裸鼠,称量瘤重。结果:qRT-PCR筛选得到有效抑制circ_0000620表达的siRNA靶序列(siRNA-2 5’-GAAGAATGATATCCTTGGAAC-3’),并用于后续实验。顺铂敏感性实验结果显示实验组IC_(50)降低,顺铂敏感性增加(P<0.05)。细胞凋亡实验结果显示,敲低细胞circ_0000620表达,实验组细胞Caspase-3/7活性升高,凋亡率升高,顺铂敏感性增加(P<0.05)。顺铂干预裸鼠荷瘤实验结果显示,与对照组相比,实验组瘤体体积和瘤重明显降低(P<0.05)。结论:筛选得到有效抑制circ_0000620表达的siRNA靶序列;敲低circ_0000620的表达可提高细胞对顺铂的敏感性。

败酱草水提物通过调控circ_0000936/miR-665抑制胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨败酱草水提物对胶质瘤细胞生物行为的影响及其可能作用机制。方法:收集2019年2月至2020年1月期间于本院接受手术切除并经病理证实的31例胶质瘤组织,qRT-PCR法检测正常脑组织与胶质瘤组织中circ_0000936、miR-665的表达量;Pearson法分析胶质瘤组织中circ_0000936和miR-665表达量的相关性;体外培养人胶质瘤细胞LN229,不同浓度的败酱草(0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL)处理LN229细胞,si-NC、si-circ_0000936分别转染至LN229细胞,pcDNA-circ_0000936转染至LN229细胞后加入2.0 mg/mL败酱草处理细胞;CCK-8、平板克隆形成实验、Transwell小室实验与流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭及凋亡能力;双荧光素酶报告基因实验检测circ_0000936与miR-665的靶向关系;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果:胶质瘤组织中circ_0000936的表达量高于正常脑组织(P<0.05),而miR-665的表达量低于正常脑组织(P<0.05);circ_0000936和miR-665呈负相关(r=-0.980,P<0.001);败酱草能够以浓度依赖性方式降低细胞活力、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白水平和circ_0000936的表达量(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),而凋亡率、Bax蛋白水平和miR-665的表达量升高(P<0.05);转染si-circ_0000936后miR-665的表达量升高(P<0.05),细胞活力、细胞克隆形成率和Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),凋亡率和Bax蛋白水平升高(P<0.05);转染pcDNA-circ_0000936能够逆转败酱草对LN229细胞生物学行为的作用。结论:败酱草水提物可通过调控circ_0000936/miR-665诱导胶质瘤细胞凋亡,并阻碍增殖、迁移及侵袭。

circ_0000592/miR-515-5p轴调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨circ_0000592/miR-515-5p轴对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:收集57例乳腺癌病人的癌组织和癌旁组织,qRT-PCR法检测组织中circ_0000592和miR-515-5p表达;体外培养人乳腺上皮细胞HMEpiC和乳腺癌MCF-7细胞,qRT-PCR法检测细胞中circ_0000592和miR-515-5p表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000592和miR-515-5p的调控关系。转染circ_0000592小干扰RNA、或共转染circ_0000592小干扰RNA与miR-515-5p抑制剂至MCF-7细胞,CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell分别检测细胞存活率、克隆数、迁移数和侵袭数,蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果:乳腺癌组织中circ_0000592表达升高(P<0.05),miR-515-5p表达降低(P<0.05)。乳腺癌MCF-7细胞中circ_0000592表达较HMEpiC细胞升高(P<0.05),miR-515-5p表达较HMEpiC细胞降低(P<0.05)。circ_0000592在MCF-7细胞中靶向结合并负调控miR-515-5p。下调circ_0000592后,MCF-7细胞存活率、克隆数、迁移数、侵袭数及细胞中N-cadherin蛋白表达均降低(P<0.01),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.01)。下调miR-515-5p部分减弱下调circ_0000592对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的作用。结论:circ_0000592在乳腺癌组织及细胞中表达升高,其通过靶向负调控miR-515-5p促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

circ_0114427靶向微小RNA-330-5p调控脂多糖诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症反应

目的探讨circ_0114427对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症的影响及其机制。方法体外培养人肺泡上皮细胞,分别转染si-circ_0114427、微小RNA(miR)-330-5p mimics或共转染si-circ_0114427与anti-miR-330-5p后,用10 mg/L LPS处理24 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中circ_0114427和miR-330-5p表达量;采用蛋白免疫印迹评估活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase3)和活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(Cleaved-caspase9)蛋白水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达;采用流式细胞术分析细胞凋亡。采用双荧光素酶报告实验验证circ_0114427和miR-330-5p的互作关系。结果肺泡上皮细胞经LPS处理后,细胞中circ_0114427表达升高,miR-330-5p表达降低(P<0.05)。敲减circ_0114427或上调miR-330-5p可以抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡、Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9表达以及IL-6和TNF-α水平(P<0.05)。circ_0114427靶向结合并负调控miR-330-5p。miR-330-5p下调可以逆转circ_0114427敲低对LPS诱导的细胞凋亡和炎症的抑制作用。结论敲减circ_0114427可抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症,这可能与miR-330-5p上调有关。

山羊环状RNA circ_0008219 SNPs位点与生产性能的关联分析

实验旨在分析山羊环状RNA circ_0008219序列中单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)位点与产羔、生长性状之间的关联性,为山羊分子育种提供新的遗传标记。选取波尔山羊、黑头羊和麻城黑山羊作为实验对象,利用SNaPshot分型技术分析候选SNPs位点的遗传多样性,并对circ_0008219的SNPs位点与3个品种山羊的产羔性状和黑头羊的周岁生长性状进行关联分析。结果表明山羊circ_0008219中存在3个SNPs位点均具有多态性。卡方适应性检测结果表明,g.1082G>T、g.1310A>G在3个山羊群体中均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),g.651G>A在波尔山羊和麻城黑山羊群体均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。黑头羊群体中,g.651G>A位点与山羊周岁体高存在相关;g.1082G>T与周岁体重、周岁体斜长、周岁胸围和管围性状存在相关。关联分析结果显示,g.651G>A位点与黑头羊总体产羔数显著关联,g.1082G>T位点与波尔山羊头胎产羔数极显著关联。连锁不平衡分析表明,在波尔山羊群体中,g.1082G>T和g.1310A>G位点之间处于强连锁平衡状态(D’=1,r^(2)=1);在黑头羊群体中,g.651G>A和g.1310A>G位点之间处于强连锁平衡状态(D’=1,r^(2)=1);在麻城黑山羊群体中,g.651G>A和g.1310A>G位点之间处于强连锁平衡状态(D’=0.917,r^(2)=1)。本研究筛选出3个SNPs位点即g.651G>A、g.1082G>T和g.1310A>G,可以作为山羊育种的潜在遗传标记,该研究结果为山羊品种培育提供了理论依据。

儿童难治性肺炎支原体肺炎的危险因素及其预测效能

目的分析儿童难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)的危险因素,并探讨其预测价值。方法选择肺炎支原体肺炎(MPP)患儿244例,根据是否发展为RMPP,将其分为RMPP组47例及普通肺炎支原体肺炎(GMPP)组197例。比较两组的人口统计学信息(性别、年龄),临床表现及体征(热峰、热程、低氧血症、呼吸音减低、合并肺外并发症及塑形性支气管炎),入院24 h内首次实验室指标[血清circ_0054633、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数(NE)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板计数(PLT)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白细胞介素6(IL-6)、乳酸脱氢酶(LDH)、铁蛋白(FER)、红细胞沉降速率(ESR)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、D-二聚体(D-D)],影像学特征(肺不张、胸腔积液)。将两组比较差异有统计学意义的因素进行多因素Logistic回归分析,绘制危险因素预测MPP进展为RMPP的受试者工作特征(ROC)曲线,分析其预测价值。结果两组性别、年龄、热峰及WBC、NE、PLT、CRP、PCT、ESR、ALT、CK-MB水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05);RMPP组热程长于GMPP组,低氧血症、呼吸音减低、合并肺外并发症、塑形性支气管炎及肺不张、胸腔积液的比例均高于GMPP组,血清circ_0054633、NLR、IL-6、LDH、FER、D-D水平均高于GMPP组(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,热程(OR=1.499,95%CI:1.243~1.808)、低氧血症(OR=10.638,95%CI:2.747~41.203)、合并肺外并发症(OR=2.948,95%CI:1.174~7.404)、血清circ_0054633(OR=6.283,95%CI:2.729~14.465)、血清IL-6(OR=1.018,95%CI:1.004~1.032)、肺不张(OR=3.157,95%CI:1.246~8.000)均是MPP进展为RMPP的独立影响因素(P均<0.05)。ROC曲线分析结果显示,热程、血清circ_0054633、血清IL-6预测RMPP的临界值分别为9.50 d、3.12、25.98 pg/mL,此时预测RMPP的敏感度分别为76.6%、80.9%、66.0%,特异度分别为73.0%、69.4%、63.8%,曲线下面积分别为0.768、0.802、0.678(P均<0.05)。结论热程>9.50 d、低氧血症、合并肺外并发症、血清circ_0054633>3.12、血清IL-6>25.98 pg/mL及影像学特征存在肺不张均是MPP患儿进展为RMPP的危险因素,其中血清circ_0054633对于MPP进展为RMPP具有较好的预测价值。

circ_1764的鉴定及其在鸡脂肪细胞分化中的功能预测

为探究环状RNA circ_1764在鸡脂肪细胞分化中的重要作用,试验通过PCR扩增和RNase酶消化鉴定鸡circ_1764的存在特性,采用qRT-PCR技术检测circ_1764在鸡组织中的表达情况,利用Miranda、miRDB和Target Scan Human等网站预测鸡circ_1764的调控网络,使用DAVID软件可视化预测靶基因的GO和KEGG富集通路,最后通过转染过表达circ_1764载体,验证生物信息学筛选出的调控网络的准确性。结果显示:鸡体内存在circ_1764,并主要在细胞质中表达,在鸡心脏、肝脏、胸腺和脂肪组织中高表达;circ_1764的预测靶miRNA主要为miR-7441-3p、miR-1656、miR-6578-3p、miR-7452-5p、miR-6645-5p、miR-6563-3p、miR-6607-5p和miR-6581-5p,并且circ_1764在DF-1细胞中过表达可以显著降低上述miRNA的表达;circ_1764靶基因主要集中在代谢、泛素介导的蛋白水解以及MAPK通路中。本研究验证了鸡circ_1764的存在,通过生物信息学预测了鸡circ_1764的调控网络,初步探究circ_1764通过吸附miR-1656、miR-6645-5p等miRNA调控靶基因进而影响鸡脂肪细胞分化的分子机制,为进一步阐明circ_1764调控鸡脂肪细胞分化的机理奠定了基础。

Circ_0103552靶向miR-1200调控肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭

目的探讨circ_0103552对人肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制。方法qRT-PCR法检测circ_0103552、miR-1200在肺癌组织、癌旁组织表达;A549细胞分为si-NC、si-circ_0103552、miR-NC、miR-1200、si-circ_0103552+anti-miR-NC、si-circ_0103552+anti-miR-1200组;检测细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭;采用双荧光素酶报告实验验证circ_0103552与miR-1200的靶向调控关系。Western blot检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中circ_0103552的表达量升高(P<0.05),miR-1200的表达量降低(P<0.05);Circ_0103552下调或者过表达miR-1200削弱细胞活力、N-cadherin、克隆、侵袭和促进E-cadherin蛋白(P<0.05);circ_0103552可靶向miR-1200;下调miR-1200可逆转circ_0103552敲低对A549细胞增殖,迁移,侵袭的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05)。结论Circ_0103552通过靶向miR-1200促进肺癌细胞的进展。

circ_0000502靶向miR-1231调控甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和凋亡

目的探讨circ_0000502对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法选取26例甲状腺乳头状癌组织及相应癌旁组织。将TPC-1细胞分为NC组、si-NC组、si-circ_0000502组、miR-NC组、miR-1231组、si-circ_0000502+anti-miR-NC组、si-circ_0000502+anti-miR-1231组。qRT-PCR检测circ_0000502和miR-1231的表达水平;MTT检测细胞活性;Transwell、流式细胞术检测细胞的迁移、侵袭和细胞凋亡情况;Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测circ_0000502和miR-1231的靶向关系。结果甲状腺乳头状癌组织和细胞中circ_0000502呈高表达,miR-1231呈低表达。沉默circ_0000502或过表达miR-1231降低了TPC-1细胞增殖活力、迁移、侵袭细胞数,抑制PCNA、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡和Bax蛋白表达(P<0.05)。circ_0000502靶向调控miR-1231表达(P<0.05),下调miR-1231表达逆转了沉默circ_0000502对TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响(P<0.05)。结论沉默circ_0000502通过靶向上调miR-1231调控TPC-1细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡。

circ_0068655通过吸附miR-498促进心肌细胞HCM凋亡

目的探讨环状RNA(circRNA)_0068655对心肌细胞HCM凋亡的影响。方法12只雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)和心肌梗死组(MI组),qRT-PCR检测两组心肌组织中circ_0068655和miR-498表达水平,Western blotting检测两组心肌组织中凋亡相关蛋白的表达。将HCM分为空白对照组、circ_0068655敲低组(sh-circ_0068655组),circ_0068655过表达组、低氧刺激组(Hypoxia组)、敲低对照+低氧刺激组(sh-ctrl+hypoxia组)、circ_0068655敲低+低氧刺激组(sh-circ_0068655+hypoxia组),缺氧的HCM分为敲低对照+miR-498-inhibitor-NC组(sh-ctrl+miR-498-inhibitor-NC组)、circ_0068655敲低+miR-498-inhibitor-NC组(sh-circ_0068655+miR-498-inhibitor-NC组)及circ_0068655敲低+miR-498-inhibitor组(sh-circ_0068655+miR-498-inhibitor组),qRT-PCR检测各组HCM中circ_0068655和miR-498表达量,CCK-8、ELISA及Transwell检测细胞活性、凋亡、迁移及侵袭能力。RNA pull-down及双荧光素酶实验分析circ_0068655和miR-498结合关系。结果MI大鼠心肌组织中circ_0068655的表达高于Sham组,miR-498表达低于Sham组,敲低circ_0068655可以改善缺氧诱导的HCM心肌细胞活力,提高心肌细胞迁移及侵袭能力,降低细胞凋亡率及凋亡相关蛋白表达。circ_0068655可结合并负向调节miR-498的表达。miR-498抑制剂可抑制敲低circ_0068655对缺氧心肌细胞保护作用。结论circ_0068655能通过吸附miR-498促进心肌梗死及心肌细胞凋亡。

环状RNA circ_0120051通过miR-144-3p/IDH2轴抑制心肌成纤维细胞的纤维化表型研究

【目的】研究环形RNA circ_0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制。【方法】通过实时萤光定量PCR(RT-qPCR)检测健康器官捐献者(n=24)与心力衰竭(HF)病人(n=21)心肌标本中circ_0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平。核糖核酸外切酶(RNase R)消化实验鉴定circ_0120051的RNA稳定性。RT-qPCR检测circ_0120051在人心肌细胞AC16中的核质分布情况。利用腺病毒在C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circ_0120051,通过RT-qPCR和Western blot检测过表达circ_0120051对mCFs中纤维化相关基因表达的影响,利用细胞划痕实验检测对mCFs迁移能力的影响。通过RNA免疫共沉淀技术(RIP)验证circ_0120051与miR-144-3p间的结合作用,利用双萤光素酶报告基因实验鉴定miR-144-3p与靶基因异柠檬酸脱氢酶2(Idh2)3’-UTR的结合位点。【结果】Circ_0120051在心衰病人心肌中表达显著增加,而其宿主基因SLC8A1表达无显著差异。Circ_0120051主要定位于人心肌细胞的胞质中。RNase R消化实验证实circ_0120051相对于线性SLC8A1 mRNA具有典型的环状RNA稳定性。过表达circ_0120051可抑制mCFs中纤维化相关基因表达和mCFs的迁移能力。RIP实验证实circ_0120051与miR-144-3p之间具有明显结合作用。在mCFs中转染miR-144-3p可促进纤维化相关基因的表达,并有效逆转circ_0120051对mCFs纤维化表型的抑制作用。双萤光素酶报告基因实验证实miR-144-3p与Idh2的3’-UTR存在结合作用。miR-144-3p可在转录水平抑制mCFs中Idh2表达,而过表达circ_0120051可增加mCFs中IDH2表达。在mCFs中转染miR-144-3p和Idh2的小干扰RNA(siRNA),可一致性地逆转circ_0120051对纤维化相关基因表达和mCFs迁移的抑制作用。【结论】Circ_0120051通过特异结合miR-144-3p并增加其靶基因IDH2表达来发挥抑制mCFs纤维化表型的作用。

白头翁皂苷D通过调控circ_0001178/miR-885-5p对甲状腺癌细胞的生物学行为的影响

目的探讨白头翁皂苷D对甲状腺癌细胞生物学行为的影响及其对circ_0001178/miR-885-5p分子轴的调控作用。方法不同浓度的白头翁皂苷D处理人甲状腺癌细胞SW579,si-NC、si-circ_0001178、miR-NC、miR-885-5p mimics转染至SW579细胞,pcDNA-circ_0001178、anti-miR-885-5p转染至SW579细胞后加入白头翁皂苷D处理;qRT-PCR检测circ_0001178与miR-885-5p的表达量;MTT、平板克隆形成实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测circ_0001178与miR-885-5p的靶向关系。结果白头翁皂苷D可降低circ_0001178的表达量、细胞活力及N-cadherin蛋白水平(P<0.05),可抑制克隆形成数、迁移及侵袭,还可促进miR-885-5p表达及E-cadherin的表达(P<0.05),且呈剂量依赖性;转染si-circ_0001178或转染miR-885-5p mimics可抑制细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;circ_0001178能够靶向调控miR-885-5p;转染pcDNA-circ_0001178或转染anti-miR-885-5p均可逆转白头翁皂苷D对细胞生物学行为的作用。结论白头翁皂苷D可通过调控circ_0001178/miR-885-5p分子轴而抑制甲状腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。

circ_0073585在急性髓系白血病中的表达及功能研究

目的:研究环状RNA(circular RNA,circRNA)circ_0073585在急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达水平、临床意义及其在白血病细胞中的功能。方法:采用实时定量PCR(RQ-PCR)检测106例初诊AML患者及38例对照者骨髓标本中circ_0073585的表达水平,比较两组的表达差异并分析其临床意义。根据受试者工作特征(ROC)曲线来评估circ_0073585的表达对AML的诊断价值。将过表达circ_0073585载体及空载体的慢病毒感染的THP-1细胞分为circ_0073585-THP-1和NC-THP-1两组,通过CCK-8法、流式细胞术分析circ_0073585对THP-1细胞增殖、生存、凋亡及药物敏感性的影响。结果:与对照组相比,circ_0073585在AML患者骨髓中的表达水平显著降低(P<0.001)。circ_0073585高、低表达组在白细胞计数(P<0.05)、血小板计数(P<0.01)及染色体危险程度(P<0.05)方面差异有统计意义。与NC-THP-1细胞相比,circ_0073585-THP-1细胞增殖及生存能力减弱(P<0.01)、凋亡率增加(P<0.01),对高三尖杉酯碱(P<0.05)及柔红霉素(P<0.001)的敏感性增加。结论:circ_0073585在AML患者中表达水平下降,过表达circ_0073585可抑制白血病细胞的增殖能力、生存能力,促进凋亡,并提高白血病细胞对化疗药物的敏感性。

circ_0008043通过miR-198/SLC2A1轴促进肝癌糖酵解及肝癌发展

目的探究circ_0008043调控肝癌细胞糖酵解的机制。方法采用qPCR检测临床样本和肝癌细胞系中circ_0008043、miR-198和SLC2A1的表达,并用双荧光素酶报告实验验证circ_0008043与miR-198及miR-198与SLC2A1的靶向结合;通过向肝癌细胞系转染sh-circ_0008043/sh-NC、miR-198 inhibitor/miR-198 inhibitor-NC、miR-198 mimic/mimic NC或pcDNA3.1-SLC2A1/pcDNA3.1-NC检测circ_0008043、miR-198和SLC2A1对肝癌细胞糖酵解的影响;通过裸鼠移植瘤模型验证circ_0008043对肝癌肿瘤生长的影响。结果circ_0008043在肝癌组织与细胞系中均高表达(P<0.01),沉默circ_0008043可抑制肝癌细胞糖酵解;miR-198在肝癌组织与细胞系中表达降低(P<0.001)且与circ_0008043表达呈负相关(r=-0.550,P<0.001),沉默circ_0008043对糖酵解造成的抑制可通过抑制miR-198的表达被部分恢复;SLC2A1在肝癌组织与肝癌细胞系中表达水平高(P<0.001),过表达SLC2A1可逆转由过表达miR-198对肝癌细胞糖酵解产生的抑制作用。裸鼠移植瘤实验表明,沉默circ_0008043可抑制肝癌肿瘤的生长(P<0.001)。结论circ_0008043通过miR-198/SLC2A1轴促进肝癌细胞糖酵解及肝癌的生长。

circ_100284通过miR-217/MAPK1调控食管鳞状细胞癌侵袭及其对5-FU化疗敏感性的影响

目的 探究环状RNA(circ_100284)作为竞争性内源RNA(ceRNA)通过调控miR-217/丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)影响食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭及其对5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗的敏感性。方法 生物信息学分析ESCC中差异表达的circRNAs。qRT-PCR检测ESCC组织和细胞中circ_100284的表达。使用浓度逐渐增加的5-FU处理ESCC细胞KYSE450以建立5-FU耐药KYSE450细胞系(KYSE450-R),MTT实验检测KYSE450和KYSE450-R细胞的IC_(50)。qRT-PCR检测KYSE450和KYSE450-R细胞中circ_100284、miR-217和MAPK1 mRNA的表达,Western blotting检测MAPK1蛋白的表达。取KYSE450-R细胞,设置:(1)空白对照组(不做处理)、si-NC组(转染si-NC)、si-circ_100284组(转染si-circ_100284)、pc-Control组(转染pc-Control)、pc-circ_100284组(转染pc-circ_100284)、pc-circ_100284+mimic NC组(转染pc-circ_100284和mimicNC)与pc-circ_100284+miR-217mimic组(转染pc-circ_100284和miR-217mimic),采用MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。(2)空白对照组(不做处理)、si-NC组(转染si-MAPK1的阴性对照)、si-MAPK1组(转染si-MAPK1)、si-MAPK1+inhibitor NC组(转染si-MAPK1和inhibitor NC)与si-MAPK1+miR-217inhibitor组(转染si-MAPK1和miR-217 inhibitor),采用qRT-PCR和Western blotting检测MAPK1 mRNA和蛋白的表达,MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。将circ_100284-WT或circ_100284-MUT报告质粒、MAPK1-WT或MAPK1-MUT报告质粒分别与miR-NC或miR-217 mimic共转染KYSE450-R细胞48 h,采用双荧光素酶报告实验测定荧光素酶相对活性。结果 生物信息学分析显示circ_100284在ESCC中呈高表达。与癌旁正常组织比较,ESCC组织中circ_100284表达明显增加(P<0.05);与健康人食管上皮细胞HEEC比较,ESCC细胞系TE-11、ECA09和KYSE450中circ_100284表达明显增加(P<0.05)。与KYSE450细胞比较,KYSE450-R细胞的IC_(50)增加,circ_100284、MAPK1表达增加但miR-217表达被抑制(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circ_100284组细胞活力被抑制,细胞侵袭数减少,细胞凋亡率增高(P<0.05)。与pc-Control组比较,pc-circ_100284组细胞活力和细胞侵袭数增加,细胞凋亡率降低(P<0.05),而pc-circ_100284对ESCC细胞恶性生物学行为的影响被miR-217过表达逆转(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MAPK1组细胞活力被抑制,细胞侵袭数减少,细胞凋亡率增高(P<0.05),而si-MAPK1对ESCC细胞生物学行为的影响被miR-217 inhibitor逆转(P<0.05)。circ_100284与miR-217、miR-217与MAPK1具有靶向关系。结论 circ_100284通过调控miR-217/MAPK1进而增强ESCC细胞的侵袭能力,抑制ESCC细胞对5-FU化疗的敏感性,在ESCC中发挥促癌因子的作用。

circ_0001649抑制卵巢癌SKOV3细胞糖酵解、增殖、迁移及侵袭的机制研究

目的探讨circ_0001649对卵巢癌SKOV3细胞糖酵解、增殖、迁移、侵袭的影响及其可能作用机制。方法选取2018年2月—2019年12月我院收治经病理诊断为卵巢癌的患者39例,采用qRT-PCR法检测卵巢癌组织与癌旁组织中circ_0001649、miR-223的表达水平;体外培养人卵巢癌细胞SKOV3,分别将pcDNA、pcDNA-circ_0001649、anti-miR-NC、anti-miR-223、pcDNA-circ_0001649与miR-NC、pcDNA-circ_0001649与miR-223 mimics转染至SKOV3细胞;观察SKOV3细胞中circ_0001649、miR-223的表达水平;检测葡萄糖消耗与乳酸、细胞增殖、迁移及侵袭能力。结果circ_0001649在卵巢癌组织表达水平低于癌旁组织表达,且miR-223的表达水平高于癌旁组织表达(P<0.05);转染pcDNA-circ_0001649或转染anti-miR-223可降低葡萄糖消耗及乳酸水平(P<0.05),明显降低OD值及Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白水平(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实circ_0001649可靶向结合miR-223;pcDNA-circ_0001649与miR-223 mimics共转染后可明显提高OD值及Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白水平(P<0.05),增加迁移及侵袭细胞数(P<0.05),提高葡萄糖消耗及乳酸水平(P<0.05)。结论circ_0001649过表达可对miR-223表达起到下调的作用,进而达到卵巢癌SKOV3细胞发生发展起到抑制作用。

木香烃内酯通过调控circ_0000285/miR-409-3p影响胃癌细胞恶性表型

目的探讨木香烃内酯对胃癌细胞恶性表型的影响及可能机制。方法体外培养胃癌细胞HGC-27,采用不同剂量(2.5、10、40μmol·L^(-1))木香烃内酯干预HGC-27细胞24 h,或转染circ_0000285小干扰RNA至HGC-27细胞后培养24 h。采用40μmol·L^(-1)木香烃内酯干预转染circ_0000285过表达载体的HGC-27细胞24 h。CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blotting检测细胞中Bcl-2、Bax、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,RT-qPCR检测circ_0000285和miR-409-3p表达,双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000285和miR-409-3p的调控关系。结果木香烃内酯可降低HGC-27细胞的OD值、集落形成数、迁移距离、侵袭数,以及Bcl-2、N-cadherin蛋白表达水平,提高细胞凋亡率及Bax、E-cadherin蛋白表达水平,并呈剂量依赖性。木香烃内酯可抑制HGC-27细胞中circ_0000285的表达,促进miR-409-3p表达。干扰circ_0000285表达可降低HGC-27细胞的增殖、迁移能力,并促进细胞凋亡。circ_0000285可靶向结合并负调控miR-409-3p。过表达circ_0000285可逆转木香烃内酯对HGC-27细胞恶性表型的影响。结论木香烃内酯可能通过调控circ_0000285/miR-409-3p轴抑制胃癌细胞的恶性生物学行为。

外泌体来源的circ_0003759在肝细胞癌的表达及其诱导巨噬细胞M2型极化的临床意义

目的探讨外泌体来源的circ_0003759在肝细胞癌(HCC)中的表达情况,及其诱导巨噬细胞M2极化对HCC预后的影响。方法基于GSE97332联合HCC患者血清外泌体环状RNA(cirRNAs)测序数据筛选出circ_0003759。透射电镜及蛋白质免疫印迹法鉴定及检测外泌体,荧光定量PCR检测外泌体circ_0003759表达水平。PKH26标记HCC外泌体与人巨噬细胞共培养,流式细胞术检测巨噬细胞M2型极化标记物CD206和CD209。构建sh_circ_0003759慢病毒并转染至肝癌HCCLM3细胞,抽提外泌体与人巨噬细胞共培养,检测巨噬细胞M2型极化情况。CIBERSORT分析HCC微环境免疫细胞浸润丰度,Kaplan-Meier法和Cox比例风险回归模型分析M2型巨噬细胞对HCC预后的影响。基因集富集分析(GSEA)巨噬细胞M2型极化的相关信号通路。结果circ_0003759在HCC组织和HCC血清外泌体中表达显著增加(P<0.05)。将HCC外泌体与人巨噬细胞共同培养后,巨噬细胞CD206和CD209阳性细胞比率显著上升(P<0.05)。肝癌HCCLM3细胞转染sh_circ_0003759,将其外泌体与人巨噬细胞共同培养后,巨噬细胞CD206和CD209阳性细胞比率显著下降(P<0.05)。此外,HCC组织中M2型巨噬细胞的浸润相对丰度明显高于对照组(P<0.001),生存分析结果表明M2型巨噬细胞相对丰度高的HCC患者预后较差(P<0.05)。GSEA分析显示巨噬细胞M2型极化与补体、炎性反应、干扰素γ及抗肿瘤坏死因子α/细胞核因子κB免疫信号通路的抑制相关。结论HCC外泌体高表达circ_0003759并诱导巨噬细胞M2型极化,与HCC预后差、免疫抑制状态相关。

卵巢癌中circ_0025033的表达及临床意义

目的探讨血浆环状RNA 0025033(circ_0025033)在卵巢癌诊断及治疗反应预测中的价值。方法收集2020年9月至2022年6月165例卵巢肿瘤患者作为研究对象,包括卵巢上皮性癌(EOC)100例、卵巢良性肿瘤30例、卵巢交界性肿瘤35例。另选取同期30例健康体检者作为对照组。采集静脉血检测circ_0025033的表达水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估circ_0025033表达诊断EOC的效能。58例行单纯化疗的EOC患者根据治疗反应分为化疗敏感组(n=32)和化疗耐药组(n=26)。分析治疗前血浆circ_0025033水平预测EOC治疗反应的价值。结果EOC患者血浆circ_0025033水平显著高于健康体检者、卵巢交界性肿瘤患者和卵巢良性肿瘤患者(P<0.05);以健康志愿者、良性肿瘤、交界性肿瘤分别作为对照时,血浆circ_0025033诊断EOC的曲线下面积(AUC)分别为0.781(95%CI:0.698~0.864)、0.679(95%CI:0.579~0.779)和0.731(95%CI:0.636~0.826)。化疗前患者circ_0025033水平与FIGO分期和淋巴结转移有关(P<0.05);化疗后患者circ_0025033水平与FIGO分期和腹水有关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,最佳截断值为2.685时,治疗前血浆circ_0025033预测EOC患者化疗敏感性的AUC为0.941(95%CI:0.884~0.998,P<0.001),灵敏度和特异度分别为0.846和0.937。结论治疗前血浆circ_0025033可能成为诊断EOC和预测EOC化疗疗效的生物标志物。