CircPVT1在子痫前期中的表达意义及其对胎盘绒毛外滋养层细胞的功能影响和作用机制

目的探究环状RNA PVT1(circPVT1)在子痫前期(preeclampsia,PE)患者胎盘组织中的表达及临床意义,并探究circPVT1对胎盘绒毛外滋养层(extravillous trophoblasts,EVTs)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响以及其可能的分子机制。方法选取子痫前期(PE组)和健康孕妇(Con组)各30例作为研究对象,qRT-PCR检测2组胎盘组织中circPVT1的表达;CCK-8增殖实验、细胞划痕实验和transwell实验检测circPVT1对EVTs细胞功能的影响;利用生物信息学分析、双荧光素酶报告实验和挽救实验等确定circPVT1在EVTs细胞中潜在的作用机制。结果胎盘组织中circPVT1表达与孕妇收缩压、舒张压和尿蛋白呈负相关(r=-0.630、r=-0.608、r=-0.679,均P<0.01),与孕妇分娩孕周和新生儿出生体重呈正相关(r=0.449、r=0.435,均P<0.01);与Con组胎盘组织相比,circPVT1在PE组胎盘组织中表达量显著下降(P<0.05);过表达circPVT1可促进EVTs的增殖、侵袭和迁移,反之,干扰circPVT1表达后EVTs的增殖、侵袭和迁移能力均降低(均P<0.05);circPVT1可直接与miR-145-5p结合,通过Wnt/β-catenin通路促进EVTs细胞增殖和侵袭。结论circPVT1与子痫前期发生及妊娠结局相关,可能通过调控miR-145-5p/Wnt/β-catenin信号通路促进EVTs细胞增殖、迁移和侵袭,参与子痫前期发生。

circPVT1对鼻咽癌细胞增殖、转移和凋亡的影响及作用机制研究

目的研究环状非编码RNA基因PVT1(circPVT1)在鼻咽癌组织中的表达及对鼻咽癌细胞增殖、转移和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qRCR)检测circPVT1在鼻咽癌组织和鼻窦炎组织(对照组)中的表达,将鼻咽癌细胞系HNE1体外培养并分成阴性对照组(转染阴性对照载体)、circPVT1过表达试验组(转染circPVT1 mimic)和circPVT1干扰试验组(转染circPVT1 inhibitor)。采用RT-qRCR检测circPVT1 mimic和circPVT1 inhibitor转染效果;采用MTT试验分析circPVT1对鼻咽癌细胞增殖的影响;采用Transwell chamber试验分析circPVT1对鼻咽癌细胞转移的影响;流式细胞术分析circPVT1对鼻咽癌细胞凋亡的影响;采用Western blot分析circPVT1对PTEN-PI3K/AKT信号通路表达的影响。结果与对照组相比,鼻咽癌组织中circPVT1表达明显上调(P<0.05)。转染circPVT1 mimic后,circPVT1过表达试验组细胞中circPVT1的表达增加(P<0.05),转染circPVT1 inhibitor后,circPVT1干扰试验组细胞中circPVT1的表达降低(P<0.05)。转染circPVT1 mimic显著促进鼻咽癌细胞的增殖和转移能力,抑制细胞凋亡,同时降低PTEN表达和增加PI3K/AKT磷酸化(P<0.05)。转染circPVT1 inhibitor显著抑制鼻咽癌细胞的增殖和转移能力,促进细胞凋亡,同时增加PTEN的表达和降低PI3K/AKT磷酸化(P<0.05)。结论circPVT1在鼻咽癌中表达增加,可通过靶向调节PTEN-PI3K/AKT信号途径促进鼻咽癌细胞增殖和转移能力,并抑制细胞凋亡,进而参与鼻咽癌的发展,circPVT1可能是治疗鼻咽癌的潜在新靶点。

环状RNA PVT1促进结直肠癌细胞的增殖并抑制凋亡

环状RNA(circular RNAs,circRNAs)是一类新型的长非编码RNA,已有研究表明circRNAs可调控肿瘤的发生发展。本研究首先通过高通量测序技术检测5对结直肠癌组织及其配对的癌旁正常组织中的circRNAs差异表达谱,鉴定出477种差异表达的circRNAs,其中252种表达上调,225种表达下调,选取表达上调最为显著的circRNA——circPVT1(circRNA plasmacytoma variant translocation 1,circPVT1),利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测150对结直肠癌组织及癌旁正常组织样本中circPVT1的表达水平,获得与高通量测序一致性结果,进一步证实circPVT1在结直肠癌中高表达。同时,在多种结直肠癌细胞系中证实circPVT1的表达较正常结直肠黏膜细胞高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。在功能上,通过在结直肠癌细胞中沉默或过表达circPVT1,分析其对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,借以阐明circPVT1在结直肠癌中的生物学功能。结果表明,circPVT1在体外可显著抑制结直肠癌细胞的凋亡、加快细胞周期进程以促进结直肠癌细胞增殖。综上所述,circPVT1在结直肠癌的生长过程中发挥促癌作用,有望作为治疗结直肠癌的潜在靶点。

沉默circPVT1对5-氟尿嘧啶耐药胃癌细胞化疗增敏作用及机制研究

目的:研究circPVT1对胃癌细胞5-氟尿嘧啶(FU)敏感性的作用及分子机制。方法:采用RT-PCR检测胃癌组织、胃癌细胞BGC823和5-FU抵抗胃癌细胞BGC823/5-FU中circPVT1的相对表达水平。沉默circPVT1,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性,观察其对细胞活性的影响。采用克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。采用TUNEL试剂盒和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用RT-PCR和Western印迹检测Bcl-2、Bax和caspase-3基因mRNA和蛋白的表达水平。沉默circPVT1观察裸鼠皮下移植瘤生长。结果:在5-FU抵抗患者胃癌组织中circPVT1的表达水平明显高于5-FU敏感患者(P<0.01)。与BGC823细胞相比,circPVT1在BGC823/5-FU细胞中的表达水平明显升高(P<0.001)。下调circPVT1表达可增强5-FU的细胞毒性(P<0.05)。与5-FU+si-NC组相比,5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞的克隆形成能力明显降低(P<0.05)。5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞的凋亡数目明显高于5-FU+si-NC组(P<0.01)。沉默circPVT1,与5-FU+si-NC组相比,5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞中Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平明显降低,Bax和caspase-3的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。裸鼠移植瘤实验结果显示,5-FU+si-circPVT1组移植瘤体积和重量明显低于5-FU+si-NC组(P<0.05)。结论:沉默circPVT1可以通过调控Bcl-2、Bax和caspase-3的表达,增强BGC823/5-FU细胞对5-FU的敏感性。