急性缺血性脑卒中患者血浆CircOGDH、CircHECTD1表达及临床意义

目的 探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血浆环状RNA(Circ)OGDH、CircHECTD1表达及临床意义。方法 选取2020年12月至2022年12月该院收治的112例AIS患者为AIS组,以同期参加体检的60例健康者为对照组。根据随访出院3个月时AIS患者是否存在血管性认知功能障碍(VCI)分为VCI组(60例)和非VCI组(52例);根据随访出院3个月时AIS患者的预后情况分为预后良好组(87例)和预后不良组(25例)。采用实时荧光定量PCR检测各组血浆CircOGDH、CircHECTD1表达。采用简易智能精神量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)及美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分评估AIS患者VCI及神经功能障碍程度。采用Pearson相关分析血浆CircOGDH、CircHECTD1与临床参数的相关性。采用多因素Logistic回归分析影响AIS患者预后不良的因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析CircOGDH、CircHECTD1单独及联合对AIS患者预后不良的评估价值。结果 AIS组血浆CircOGDH、CircHECTD1相对表达水平高于对照组(t=23.616、29.181,P<0.001)。VCI组血浆CircOGDH、CircHECTD1相对表达水平高于非VCI组(t=12.657、27.667,P<0.001)。相比于预后良好组,预后不良组梗死面积、入院24 h NIHSS评分、CircOGDH、CircHECTD1相对表达水平较高,出院3个月时MMSE评分及MoCA评分较低(均P<0.05)。AIS患者血浆CircOGDH、CircHECTD1与梗死面积、入院24 h NIHSS评分呈正相关,与出院3个月MMSE评分、MoCA评分呈负相关(均P<0.05)。CircOGDH、CircHECTD1相对表达水平升高及梗死面积较大、入院24 h NIHSS评分较高是影响AIS患者预后不良的独立危险因素(均P<0.05)。血浆CircOGDH、CircHECTD1联合预测AIS预后不良的曲线下面积为0.903(95%CI:0.852~0.955),明显大于单一指标的0.831(95%CI:0.781~0.866)和0.836(95%CI:0.794~0.870)(Z=2.258、2.119,P=0.021、0.031)。结论 AIS患者血浆CircOGDH、CircHECTD1表达上调,二者与患者VCI及神经功能障碍程度有关,两项联合对AIS患者预后不良具有较高的预测价值。

circ-HECTD1通过调控miR-98-5p/EPHA4表达参与OGD诱导的神经元损伤

目的探讨环状RNA HECTD1(circ-HECTD1)是否通过调控miR-98-5p/酪氨酸蛋白激酶A4(EPHA4)的表达参与氧糖剥夺(OGD)诱导的神经元损伤。方法体外分离培养小鼠原代皮层神经元,采用双荧光素酶报告基因实验、RNA结合蛋白免疫沉淀实验检测神经元中circ-HECTD1、miR-98-5p和EPHA4之间的靶向关系,并将神经元随机分为对照组(正常条件下培养24 h)与OGD 6 h、12 h、24 h组(予OGD处理6 h、12 h、24 h)以及OGD+Vector组与OGD+circ-HECTD1组、OGD+小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)组与OGD+siRNA circ-HECTD1(si-circ-HECTD1)组、OGD+微小RNA(miRNA)模拟物阴性对照(miR-NC)组与OGD+miR-98-5p模拟物(miR-98-5p mimic)组、OGD+miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组与OGD+miR-98-5p抑制物(anti-miR-98-5p)组、OGD+miR-98-5p mimic+pcDNA组与OGD+miR-98-5p mimic+EPHA4组、OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-NC组与OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-98-5p组,分别转染pCD5-ciR空载体、pCD5-ciR-circ-HECTD1过表达载体、si-NC、si-circ-HECTD1、miR-NC、miR-98-5p mimic、anti-miR-NC、anti-miR-98-5p至神经元,以及共转染miR-98-5p mimic和pcDNA3.1空载体、miR-98-5p mimic和pcDNA3.1-EPHA4过表达载体、si-circ-HECTD1和anti-miR-NC、si-circ-HECTD1和anti-miR-98-5p至神经元,OGD处理24 h后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测circ-HECTD1、miR-98-5p和EPHA4 mRNA表达,采用Western blotting实验检测EPHA4蛋白表达,采用MTT法检测细胞增殖活性,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,采用试剂盒法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性。结果(1)circ-HECTD1能够与miR-98-5p靶向结合,miR-98-5p能够与EPHA43’’翻译区靶向结合。(2)与对照组比较,OGD 6 h、12 h、24 h组神经元中circ-HECTD1表达均明显升高,miR-98-5p表达均明显降低,EPHA4蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与OGD+Vector组比较,OGD+circ-HECTD1组神经元中circ-HECTD1的表达明显升高,miR-98-5p的表达明显降低;与OGD+si-NC组比较,OGD+si-circ-HECTD1组神经元中miR-98-5p的表达明显升高,EPHA4 mRNA和蛋白的表达均明显降低;与OGD+miR-NC组比较,OGD+miR-98-5p mimic组神经元中miR-98-5p的表达明显升高,EPHA4蛋白的表达明显降低;与OGD+anti-miR-NC组比较,OGD+anti-miR-98-5p组神经元中miR-98-5p的表达明显降低,EPHA4蛋白的表达明显升高;与OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-NC组比较,OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-98-5p组神经元中EPHA4 mRNA和蛋白的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)与对照组比较,OGD组神经元的细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,IL-1β、TNF-α含量明显升高,SOD活性明显降低,MDA活性明显升高;与OGD+si-NC组比较,OGD+si-circ-HECTD1组神经元的细胞活力明显升高,细胞凋亡率明显降低,IL-1β、TNF-α含量明显降低,SOD活性明显升高,MDA活性明显降低;与OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-NC组比较,OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-98-5p组神经元的细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,IL-1β、TNF-α含量明显升高,SOD活性明显降低,MDA活性明显升高;与OGD+miR-NC组比较,OGD+miR-98-5p mimic组神经元的细胞活力明显升高,细胞凋亡率明显降低,IL-1β、TNF-α含量明显降低,SOD活性明显升高,MDA活性明显降低;与OGD+miR-98-5p mimic+pcDNA组比较,OGD+miR-98-5p mimic+EPHA4组神经元的细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,IL-1β、TNF-α含量明显升高,SOD活性明显降低,MDA活性明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论敲低circ-HECTD1后可通过靶向调控miR-98-5p/EPHA4的表达,从而改善OGD诱导的神经元损伤。