四维超声联合血清circHIPK3、circ0003416诊断胎儿先天性心脏病价值

目的:探索四维超声联合血清环状RNA同源域相互作用激酶3(circHIPK3)、环状RNA0003416(circ0003416)诊断胎儿先天性心脏病(CHD)价值。方法:收集2021年11月-2023年11月本院接诊的胎儿均疑似CHD孕妇324例临床资料,以产后随访或引产病理解剖结果为金标准,分为CHD组(43例)、非CHD的对照组(281例)。收集两组一般资料,采用实时荧光定量PCR法检测血清circHIPK3、circ0003416水平;记录四维超声检测结果,Kappa行一致性检验;受试者工作特征(ROC)曲线分析四维超声联合血清circHIPK3、circ0003416对CHD的诊断价值。结果:CHD组血清circHIPK3(1.41±0.18)高于对照组(1.19±0.13),血清circ0003416(0.82±0.11)低于对照组(1.03±0.14)(均P<0.05);四维超声诊断CHD与最终确诊结果的一致性较好(Kappa=0.809,P<0.001);四维超声、血清circHIPK3、circ0003416诊断CHD的曲线下面积(AUC)均较高,但联合诊断AUC(0.976)及敏感度(97.7%)最高(P<0.001)。结论:CHD母体血清circHIPK3升高、血清circ0003416水平降低,四维超声联合血清circHIPK3、circ0003416水平对CHD的诊断价值较高,可为CHD临床筛查提供参考。

老年急性心肌梗死患者PCI术后血清CircHipk3、miR-29b-3p表达水平及其对MACE的预测价值

目的探讨老年急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后血清环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(CircHipk3)、微小RNA(miR)-29b-3p表达水平及其对主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法选取2019年8月至2021年8月在开滦总医院赵各庄医院进行PCI术的225例AMI患者作为研究对象,对患者随访,根据是否发生MACE分为MACE组和非MACE组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测PCI术后血清CircHipk3、miR-29b-3p表达水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CircHipk3、miR-29b-3p对AMI患者PCI术后发生MACE的预测价值。采用Pearson相关分析发生MACE的AMI患者血清CircHipk3表达水平与miR-29b-3p表达水平的相关性。采用多因素Logistic回归分析AMI患者PCI术后发生MACE的危险因素。采用Starbase在线软件预测CircHipk3与miR-29b-3p的结合位点。结果225例AMI患者共有58例患者发生MACE,发生率为25.78%。MACE组冠状动脉多支病变患者比例高于非MACE组,肌钙蛋白(cTn)T、CircHipk3表达水平高于非MACE组,左心室射血分数(LVEF)、miR-29b-3p表达水平低于非MACE组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,发生MACE的AMI患者血清CircHipk3表达水平与miR-29b-3p表达水平呈负相关(r=-0.597,P<0.05)。血清CircHipk3联合miR-29b-3p预测AMI患者PCI术后发生MACE的曲线下面积(AUC)显著大于CircHipk3、miR-29b-3p单独预测的AUC(Z_(联合-CircHipk3)=2.276,P=0.021;Z_(联合-miR-29b-3p)=2.113,P=0.039)。多因素Logistic回归分析结果显示,冠状动脉多支病变、CircHipk3>1.32、miR-29b-3p≤0.84是AMI患者PCI术后发生MACE的危险因素(P<0.05)。Starbase软件预测结果显示,CircHipk3的3′-UTR有miR-29b-3p的结合位点。结论AMI患者血清CircHipk3表达水平升高,miR-29b-3p表达水平降低,二者联合检测对AMI患者PCI术后发生MACE有一定预测价值。

环状RNA HIPK3在急性胰腺炎患者中的表达及与病情严重程度和预后的相关性分析

目的探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)在急性胰腺炎(AP)患者中的表达及与病情严重程度和预后的相关性。方法选取2020年11月至2021年11月我院126例AP患者为AP组,其中轻度38例,中度43例,重度45例;90例正常健康体检者为对照组。根据AP患者入院后28 d的生存情况分为生存组(n=86)和死亡组(n=40)。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测circHIPK3的表达水平。Pearson法分析circHIPK3表达水平与APACHEⅡ评分及Ranson评分的相关性;Logistic回归分析影响AP患者预后的危险因素。结果AP组的circHIPK3、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平显著高于对照组(P<0.05);重度组circHIPK3、IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平、APACHEⅡ评分及Ranson评分显著高于中度组及轻度组,中度组显著高于轻度组(P<0.05);circHIPK3的表达水平与IL-6、IL-8、TNF-α水平、APACHEⅡ评分及Ranson评分均呈正相关(P<0.05);生存组的Cr、CRP、cTn1、CK、BNP、circHIPK3水平均明显低于死亡组(P<0.05);Logistic回归分析发现CK、BNP、circHIPK3高水平是影响AP患者预后的危险因素(P<0.05)。结论AP患者血清circHIPK3表达水平异常增加,其水平与患者预后密切相关。

circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3与糖尿病视网膜病变的相关性研究

目的探讨环状RNA(circRNA)-锌指蛋白532(ZNF532)、circRNA-同源域相互作用蛋白激酶3(HIPK3)与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法纳入109例DR患者(DR组)、110例单纯糖尿病患者(DM组)和65例健康体检志愿者(对照组)。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达,酶联免疫吸附试验检测血清血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平。Pearson分析DR患者血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与血清VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平相关性。单因素和多因素Logistic回归分析DR危险因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3诊断DR的价值。结果DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达以及VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平高于DM组和对照组(P<0.05)。DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平均呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示高水平circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3及VEGF是糖尿病患者发生DR的独立危险因素(P<0.05)。三者诊断糖尿病患者发生DR的曲线下面积分别为0.736、0.740和0.864,联合诊断高于单独诊断(P<0.05)。结论糖尿病患者血清中circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达上调与DR发生有关,两者可以作为DR辅助诊断的潜在指标。

环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)通过吸附miR-124-3p促进神经胶质瘤细胞增殖及转移

目的探究环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)通过海绵吸附微小RNA-124-3p(miR-124-3p)对神经胶质瘤细胞增殖和转移的影响。方法按照LipofectamineTM 3000试剂说明书将circHIPK3短发夹RNA(sh-circHIPK3)、pcDNA3.1-circHIPK3、miR-124-3p模拟物(miR-124-3p mimics)和pcDNA3.1-WEE1转染T98G细胞;实时荧光定量PCR检测circHIPK3和miR-124-3p在神经胶质瘤组织和细胞系中的表达情况;CCK-8法检测T98G细胞增殖情况;TranswellTM法检测T98G细胞侵袭能力;双荧光素酶报告基因验证miR-124-3p与circHIPK3和丝氨酸/苏氨酸激酶WEE1的靶向关系;Western blot法检测WEE1和上皮间质转化(EMT)相关蛋白[上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)]的表达情况;此外,circHIPK3和WEE1竞争性结合miR-124-3p后,采用CCK-8法检测T98G细胞增殖,TranswellTM检测T98G细胞侵袭。结果circHIPK3在神经胶质瘤组织和细胞中高表达,敲减circHIPK3抑制T98G细胞增殖和侵袭能力,并抑制其EMT;双荧光素酶报告基因结果证实miR-124-3p是circHIPK3的靶基因,WEE1是miR-124-3p的靶基因;同时过表达miR-124-3p与circHIPK3或WEE1,或共转染sh-circHIPK3和pcDNA3.1-WEE1可恢复过表达miR-124-3p对T98G细胞增殖、侵袭和EMT的抑制作用。结论circRNA-HIPK3与WEE1海绵吸附miR-124-3p促进神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和EMT。

环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3促进三阴乳腺癌细胞增殖和迁移的作用机制研究

目的探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)促进三阴乳腺癌(TNBC)细胞增殖和迁移的作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circHIPK3在TNBC细胞系HCC1806、MDA-MB-231、HCC-70和人正常乳腺细胞系MCF-10A中的表达水平。将circHIPK3高表达的TNBC细胞系分为sh-NC组、sh-circHIPK3组,分别转染NC敲减质粒、circHIPK3敲减质粒;将circHIPK3低表达的TNBC细胞系分为oe-NC组、oe-circHIPK3组,分别转染NC过表达质粒、circHIPK3过表达质粒。采用qRT-PCR检测各组细胞中circHIPK3表达水平,通过细胞增殖实验(MTS)检测各组细胞增殖活性,采用Transwell实验检测各组细胞迁移能力,采用TOP/FOP Flash双荧光素酶报告基因检测各组细胞荧光素酶活性,并通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、c-MYC和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达。结果circHIPK3在3种TNBC细胞系中的表达水平(MDA-MB-231细胞中表达水平最高,HCC-70细胞中表达水平最低)均高于人正常乳腺细胞系MCF-10A,差异有统计学意义(F=30.110,P<0.001)。qRT-PCR结果显示,circHIPK3在sh-circHIPK3组中的相对表达量为(0.36±0.06),低于sh-NC组的(0.98±0.03),差异有统计学意义(t=16.008,P<0.001);circHIPK3在oe-circHIPK3组中的相对表达量为(6.29±0.71),高于oe-NC组的(0.99±0.05),差异有统计学意义(t=12.897,P<0.001)。sh-circHIPK3组MDA-MB-231细胞增殖活性和迁移能力均低于sh-NC组,oe-circHIPK3组HCC-70细胞增殖活性和迁移能力均高于oe-NC组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。sh-circHIPK3组MDA-MB-231细胞荧光素酶活性低于sh-NC组,oe-circHIPK3组HCC-70细胞荧光素酶活性高于oe-NC组,差异有统计学意义(P<0.001)。sh-circHIPK3组MDA-MB-231细胞Wnt3a、β-catenin、c-MYC和MMP-2蛋白表达均低于sh-NC组,oe-circHIPK3组HCC-70细胞Wnt3a、β-catenin、c-MYC和MMP-2蛋白表达均高于oe-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论circHIPK3通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进TNBC细胞的增殖和迁移。

circ-HIPK3通过调控miR-1207-5p促进结直肠癌细胞增殖和转移的作用机制

目的探究环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circ-HIPK3)通过调控微小RNA-1207-5p(miR-1207-5p)促进结直肠癌(CRC)细胞增殖和转移的作用机制。方法体外培养人CRC细胞系HCT166细胞,分别以pcDNA3.1-NC(空白组)与pcDNA3.1-circ-HIPK3(研究组)转染HCT166细胞48 h,于倒置荧光显微镜下观察转染效率,以不做任何处理的HCT166细胞作为对照组;采用荧光定量PCR检测细胞circ-HIPK3及miR-1207-5p mRNA表达,采用MTT实验及划痕实验分别检测细胞增殖及迁移能力,双荧光素酶实验检测circ-HIPK3与miR-1207-5p的靶向作用,Western blot法检测Wnt/β-catenin通路蛋白表达情况。结果研究组细胞增殖促进率、划痕愈合率、细胞中circ-HIPK3、miR-1207-5p mRNA相对表达水平及Wnt、β-catenin蛋白表达水平均高于对照组和空白组,差异有统计学意义(P<0.05),而对照组与空白组上述各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05);双荧光素酶实验结果显示circ-HIPK3上存在miR-1207-5p的结合位点。结论circ-HIPK3通过下调CRC中miR-1207-5p的相对表达,促进细胞增殖和转移,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin通路有关。

circHIPK3/miR-330-5p对人晶状体上皮细胞损伤的影响及其调控机制研究

目的探究环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)、微小RNA-330-5p(miR-330-5p)表达对人晶状体上皮细胞损伤的影响及其调控机制。方法研究对象为人晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)SRA01/04,采用过氧化氢(H_(2)0_(2))诱导构建SRA01/04细胞损伤模型,随机分为正常对照组(NC)组、模型组(A)组、过表达质粒(OE-Vector)+H,O,组(B组)、circHIPK3过表达质粒(OE-circHIPK3)+H_(2)0_(2)组(C组)、OE-circHIPK3+miR-330-5p阴性对照mimicNC序列(miR-NC)+H_(2)0_(2)组(D组)、OE-circHIPK3+miR-330-5p寡核苷酸模拟物(miR-330-5pmimics)+H_(2)0_(2)组(E组),共5组。qRT-PCR法检测各组细胞中circHIPK3、miR-330-5p水平。双荧光素酶报告法验证circHIPK3与miR-330-5p的靶向关系。分别采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞存活率、调亡率。分析细胞中氧化应激[超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)]水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(BCL2-associated X,Bax)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)]。结果A组细胞中circHIPK3水平低于NC组,miR-330-5p水平高于NC组(P<0.05);与NC组比较,A组细胞存活率、Bcl-2蛋白水平及SOD、GSH-Px水平降低,凋亡率、Bax蛋白水平及MDA水平升高(P<0.05);与A组比较,D组细胞存活率升高,凋亡率、Bax蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高,SOD、GSH-Px水平升高,MDA水平降低(P<0.05);circHIPK3可靶向调控miR-330-5p表达。与D组比较,E组miR-330-5p水平升高,细胞存活率、Bcl-2蛋白水平及SOD、GSH-Px水平降低,凋亡率、Bax蛋白水平及MDA水平升高(P<0.05)。结论circHIPK3过表达可靶向抑制miR-330-5p表达,促进LECs存活,抑制LECs调亡,增强其抗氧化应激能力,减轻LECs损伤。

circNFⅨ通过miR-34a调节MET/PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的探讨环状RNA核因子Ⅸ(circNFⅨ)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响,以及其作用机制。方法收集2019-03-16-2021-03-16延边大学附属医院75对NSCLC组织和癌旁组织(距癌周4 cm)样本,人正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞A549、H1703、PGCL3、H1299为研究对象,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测组织及细胞circNFⅨ和miR-34a表达水平。取汇合度约达80%的A549细胞,利用Lipofectamine^(TM) 2000转染试剂盒对其进行转染,并分为空白组、si-NC组、si-circNFⅨ组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-circNFⅨ组、si-circNFⅨ+inhibitor-NC组和si-circNFⅨ+miR-34a inhibitor组7组,qRT-PCR法检测转染效率,细胞计数盒8(CCK8)法检测各组细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞凋亡,蛋白质印迹法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、间质钙黏蛋白(N-cadherin)、肝细胞生长因子受体(MET)及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路相关蛋白表达,双荧光素酶报告基因检测circNFⅨ与miR-34a的靶向关系。结果circNFⅨ在癌及癌旁组织的相对表达量分别为2.27±0.25和1.02±0.09,差异有统计学意义,t=40.742,P<0.001;miR-34a在癌组织、癌旁组织的相对表达量分别为0.31±0.02和1.04±0.05,差异有统计学意义,t=117.396,P<0.001;circNFⅨ在NSCLC细胞A549、H1703、PGCL3和H1299中相对表达量分别为2.96±0.28、2.21±0.22、1.87±0.16和1.63±0.12,均高于BEAS-2B细胞(1.01±0.07),F=90.817,P<0.001;miR-34a在A549、H1703、PGCL3和H1299中相对表达量分别为0.23±0.01、0.27±0.02、0.34±0.02和0.39±0.01,均低于BEAS-2B细胞(1.02±0.03),F=1663.420,P<0.001。A549细胞中circNFⅨ表达水平最高,miR-34a表达水平最低,因此选择A549细胞为研究对象进行后续研究。qRT-PCR结果显示,沉默circNFⅨ后circNFⅨ表达量降低(F=59.619,P<0.001),miR-34a表达量升高,F=172.261,P<0.001;而加入miR-34a抑制剂后miR-34a表达量降低,F=148.375,P<0.001。CCK8法检测结果表明,沉默circNFⅨ后A549细胞在24、48 h的增殖能力低于空白组和si-NC组,P<0.001;而加入miR-34a抑制剂后,A549细胞在24、48 h的增殖能力增强,P<0.001。流式细胞术结果显示,敲低circNFⅨ后A549细胞细胞凋亡率升高,P<0.001;而加入miR-34a抑制剂后,抑制了circNFⅨ对细胞凋亡的促进作用,F=315.084,P<0.001。蛋白质印迹法结果发现,沉默circNFⅨ后,促进E-cadherin蛋白表达,抑制N-cadherin、Vimentin蛋白表达及肝癌EMT过程,而加入miR-34a抑制剂后则逆转了该过程;下调circNFⅨ后,MET、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT蛋白降低,抑制了MET/PI3K/AKT信号通路,而miR-34a抑制剂后逆转了circNFⅨ对该通路的抑制作用。双荧光素酶报告基因实验证实miR-34a为circNFⅨ的靶基因。结论沉默circNFⅨ通过上调miR-34a来抑制MET/PI3K/AKT信号通路进而抑制NSCLC细胞增殖和EMT,并促进细胞凋亡。

基于环状RNA测序探讨当归芍药散对APPswe/PS1ΔE9转基因小鼠的神经保护作用

目的:研究环状RNA(circRNA)在当归芍药散对APPswe/PS1ΔE9双转基因(APP/PS1)小鼠神经保护作用及其机制。方法:6月龄APP/PS1小鼠20只随机分为模型组和药物组,药物组予以当归芍药散水提液灌胃,10只野生C57BL/6小鼠为正常组,正常组和模型组给予等体积生理盐水,各组连续灌药8周。应用circRNA测序分析当归芍药散干预前后APP/PS1小鼠差异表达circRNA,构建circRNA-miRNA mRNA相互作用网络,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)验证cric RNA测序结果,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马区磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),磷酸化PI3K(p-PI3K),蛋白激酶B1(Akt1),p-Akt1,B淋巴细胞瘤-2和Bcl-2-相关X的蛋白质(Bax)的蛋白表达水平,应用免疫组化检测海马区的Caspase-3的蛋白表达水平,应用末端标记(TUNEL)法检测小鼠海马区神经元凋亡水平。结果:与模型组比较,当归芍药散干预后有90个差异表达的circRNA,其中46个上调,44个下调。与正常组比较,模型组circRNA1398,circRNA1399表达水平下降,miR-103-3p,miR-153-3p,miR-143-3p及miR-143-5p表达水平上调(P<0.01),与模型组比较,当归芍药散组circRNA1398,circRNA1399表达水平上调,miR-103-3p,miR-153-3p,miR-143-3p及miR-143-5p表达水平下降(P<0.01)。通过circRNA-miRNA mRNA相互作用网络分析circRNA1398和circRNA1399调控Bcl-2和Akt1基因表达。与正常组比较,模型组的p-PI3K,Akt1,p-Akt1和Bcl-2表达量下降(P<0.01),Bax和Caspase-3的蛋白表达量升高(P<0.01);与模型组比较,当归芍药散组APP/PS1小鼠海马区的p-PI3K,Akt1,p-Akt1和Bcl-2表达量增加(P<0.01),Bax和Caspase-3的蛋白表达量下降(P<0.01)。与正常组比较,模型组小鼠海马区神经元凋亡水平上升,细胞凋亡率为(43.76±2.92)%。与模型组比较,当归芍药散干预后细胞凋亡率为(24.64±3.39)%。结论:当归芍药散可以激活PI3K/Akt通路和抑制APP/PS1小鼠海马区神经元凋亡,发挥神经保护作用,具体机制可能与其上调circRNA1398和circRNA1399表达及其相应miRNA的表达相关。