上海地区献血人群cisAB和B(A)血型的研究

目的了解上海地区献血者中cisAB和B（A）血型的分布特点及其表型与基因型的关联性。方法对本中心2006年1月-2013年9月的所有献血者血样筛选,其中不重复献血者1 716 442人,对于正反定型不符的血样进一步做血清学鉴定和亚型分类;同时对ABO基因第6、7号外显子及其侧翼序列做PCR扩增,TA克隆并使用测序仪测序。收集DNA分析确定为cisAB和B（A）的标本做数据统计和表型基因型关联性分析。结果经DNA测序确定为cisAB和B（A）的有71例,通过对漏检进行估算校正后,计算求得的校正后表型频率为8.3/10万,包括6种cisAB和B（A）等位基因cis-AB01、cis-AB02、cis-AB06、B（A）02、B（A）04、B（A）06,基因频率以B（A）04最高,为1.6/10万,其次是B（A）02（0.78/10万）和cis-AB01（0.66/10万）。这些等位基因对应的表型除了典型的A2Bx和B（A）以外,还包括AxB、ABx、AintBx,A2B。结论 cisAB和B（A）血型基因型在上海地区献血者以B（A）04最为常见,其次是B（A）02和cis-ABO1;cisAB和B（A）血型涵盖的血清学表型较为复杂,不典型的表型需要通过DNA检测来确定。

中国人罕见的cisAB变异型分子机制分析

为研究中国人群ABO血型系统中罕见的cisAB变异型的分子遗传背景,用血型血清学方法鉴定12例ABO血型疑难样本和116例随机无血缘关系样本,应用聚合酶链反应和DNA序列分析等方法对样本ABO基因酶活性编码区外显子6、7和侧翼内含子进行突变筛选和检测,并对不同基因型的扩增片段进行单倍体序列分析。血清学检测发现12个样本均为(A强B弱)或(A弱B强),PCR产物直接序列分析表明这些样本均为cisAB变异型,并存在4种基因型。通过单倍体序列分析,从中发现2种cisAB等位基因,其中cisAB01不仅存在外显子7的467C>T和803G>C变异,还在第6内含子存在未经报道的163T>C和179C>T变异;另一种等位基因是在B101基础上保留了A101的803G位点,编码一条176G、235S、266M和268G组合的多肽链。经检索,未发现该组合的ABO等位基因,该等位基因已被国际血型抗原基因突变数据库命名为cisAB05等位基因。文章系统研究了中国人群cisAB变异型分子机制,发现了一种新的cisAB05等位基因,同时根据内含子序列推测cisAB01等位基因可能是通过A101和B101等位基因间的同源交换而形成的。

cisAB亚型第6、7外显子及侧翼内含子序列分析

目的 研究汉族ABO血型系统cisAB亚型的分子遗传基础。方法 在标准血清学鉴定和PCR SSP基因分型的基础上 ,对汉族cisAB亚型进行第 6、7外显子及侧翼内含子DNA扩增 ,PCR产物经割胶纯化后直接序列分析。结果 血清学鉴定表明2例标本分别为A2 B3 和A3 B ,先证者的PCR SSP基因分型肯定了其中的B和O1基因。DNA序列分析表明 ,其第 6外显子有2 6 1G缺失 /不缺失杂合 ;第 7外显子与A1基因相比 ,有T4 6 7C杂合和C80 3G杂合 ,796位为正常C ,表明其血型为罕见的cisAB亚型。结论 4 6 7T、796C和 80 3C三处核苷酸的独特性决定了cisAB亚型的分子遗传基础。

cisAB03亚型分子生物学鉴定及分子对接

目的:通过1例罕见的cisAB03亚型的研究,探讨关键氨基酸突变后糖基转移酶影响糖供体和受体结合的分子机制。方法:采用血清学方法鉴定血型表型,直接测序方法鉴定基因型,转移酶同源建模后进行UDP和H糖链的对接,分析突变后糖基转移酶结构差异对底物结合的影响,最后利用细胞体外表达实验间接验证突变后糖基转移酶合成产物的效率。结果:血清学鉴定表型为cisAB,基因测序显示患者基因型是ABO*cisAB.03/O.01.01,同源建模显示与野生型相比,cisAB03糖基转移酶p.Pro234Ser突变导致Met266结构朝向改变,分子对接后表面显示呈现催化活性中心结合凹槽结构改变,更有利于UDP-GalNAc加成到H抗原。细胞体外表达实验证实cisAB03合成的A抗原强于B抗原。结论:p.Pro234Ser突变是形成cisAB03糖基转移酶双功能活性的关键位点。

遗传性CisAB血型的血清学和基因型特征研究——附一例家系报告

目的研究1名cis AB血型患者及其家系的血型血清学及基因型特征。方法采用试管正反定型法筛查该家系3代共10例标本的血型;对于正反定型结果不一致的标本以PCR-SSP法作基因分型;采用直接测序法作DNA序列分析。结果血型血清学检测发现10名家系成员中,正反定型不相符4例:2例表型为A2B3、2例为A2B;基因型分型分别为:cis AB01/O02、CisAB01/B101。DNA序列分析:cis AB01/O02第6外显子261缺失G,第7外显子297A>G、467C>T、646T>A、681A>A、771C>T、803G>C和829G>C;CisAB01/B101第6外显子297A>G,第7外显子467C>T、803G>C、526C>G、657C>T、703G>A、796C>A、930G>A。结论确定了1个遗传性cis AB血型家系;发现具有cis AB01等位基因的标本其血清学表型检测结果不一致,考虑由cis AB杂合的等位基因差别所致。

罕见cisAB血型家族的遗传学分析

目的 cisAB是一种罕见的ABO表型,常表现为正反定型不符。文中对1例在常规血型鉴定中发现的罕见cisAB血型及其家族成员进行鉴定。方法抽取先证者及其家族成员共计7人的外周抗凝血液,采用试管法分析血型血清型;以PCR-SSP基因分型法和直接测序法分析这些样本的ABO基因。结果血清学方法证实该家系6份样本的红细胞都有接近正常的A抗原和较弱的B抗原,血清中含有弱的抗-B抗体。PCR-SSP基因分型显示该6份样本均为cisAB01型。ABO基因测序结果:6份样本的第7外显子均存在467C>T和803G>C点突变;在第6外显子,先证者出现261delG和297G>A,2例标本出现261delG和297AA,3例标本表现为只有297AA。结论该家系6名成员的表型均为cisAB01型,先证者基因型为cisAB/O02。

CisAB血型的血清学鉴定及分子遗传学研究——附1例报告

目的通过分子生物学方法鉴定1例罕见的CisAB血型,并调查其家系,以期探讨稀有血型CisAB的血清学特点,遗传学特性和输血策略。方法采用血型血清学方法筛查该家系3代共6例标本的血型,运用聚合酶链式反应序列特异性引物(PCR-SSP)法进行基因定型,采用ABO基因直接测序的方法作DNA序列的分析。结果血型血清学检测发现6名家系成员中,正反定型不相符3例:先证者表型为A_2B_x,其母亲为A_2B,其胎血为AB型;基因型分型结果分别为CisAB01/O01,CisAB01/B101,CisAB01/O01。DNA序列分析:CisAB01/O01第6外显子261缺失G,第7外显子467C>T、803G>C;CisAB01/B101第6外显子297A>G,第7外显子467C>T、796C>A、803G>C。结论对ABO血型血清学正反定型不符的标本,可以用家系调查和分子生物学方法进行辅助验证,基因测序更能准确确定患者的血型。

B(A)与cisAB血型的鉴定分析及家系调查

目的 了解本实验室检测出B(A)和cisAB血型的血清学特点及分子生物学遗传特性。方法 运用血型血清学和ABO血型测定方案,对山东地区献血者或医院病患送检的6例血液标本进行血型鉴定研究,并围绕其中2例开展家系调查。结果 6例标本经血清学初步鉴定B(A) 5例,cisAB 1例;基因检测和血清学结果非常接近,等位基因包括B(A)04等,均是和O杂合状态。对其中1例cisAB患者及其4名亲属进行血清学家系研究,先证者父亲为cisAB型,其余亲属均为O型;对另1例B(A)02/O1献血者及其3名亲属进行血清学及分子生物学家系研究,血清学结果为先证者父亲和弟弟B(A)型,母亲O型,其基因检测结果与血清学结果一致,先证者父亲基因型与先证者相同,弟弟基因型为B(A)02/O2,母亲基因型为O1/O2。结论 cisAB和B(A)血型通过血清学表型通常难以区分,需经基因检测确认。cisAB家系调查中共发现cisAB血型2例,B(A)家系调查中共发现B(A)血型3例。本地区cisAB和B(A)基因分型为cisAB01/O2、B(A)02/O1、B(A)02/O2、B(A)04/O1及B(A)04/O2。通过开展基因检测及家系调查,可准确鉴定出B(A)及cisAB亚型,为患者输血及献血者供血提供可靠依据,从而保障了临床输血的安全性。

基因测序鉴定CisAB/B血型2例

目的探讨ABO血型鉴定中正反定型不一致时,采用基因测序方法鉴定血型的意义。方法对本血液中心在ABO血型鉴定时发现的无偿献血者正反定型结果不一致样本,采用试管法进行血型血清学分析和亚型鉴定;对血清学检测为ABO亚型的样本,再采用PCR-SBT方法对6、7外显子和部分内含子进行基因序列分析。结果 2例血清学鉴定为A亚型B的样本,经ABO基因测序确定基因型为Cis AB/B,分别为Cis AB01/B101和Cis AB05/B101。结论由于B基因的作用,Cis AB血型经血清学方法难以被发现并确定,基因测序有助于更准确地鉴定血型。

CisAB与B(A)血型的鉴定分析——附报告5例

目的了解吉林地区人群中Cis AB和B(A)血型的特点及其表型与基因型的关联性。方法采用微孔板法对本血液中心无偿献血者共71 200名进行ABO血型筛查鉴定,对凝集强度减弱和正反定型结果不一致样本采用试管法进行血型血清学分析和亚型鉴定,对血清学检测为ABO亚型的样本再采用PCR-SBT方法对6、7外显子和部分内含子进行基因序列分析。结果经ABO基因测序确定Cis AB 3例、B(A)2例,等位基因有Cis AB01、Cis AB05、B(A)02、B(A)04,其中发现1例B(A)04/B(A)04纯合基因型,它们对应的血清学表型有A2B、A2Bx和Ax B。结论Cis AB和B(A)血型通过血清学表型通常难以区分,经基因测序可以明确血清学特征形成的分子基础。

cisAB基因型与表型分析2例

目的对父子(先证者1,先证者2)2例ABO疑难血型标本鉴定血清型和基因型。方法用血清学方法检测标本ABO血清型,用ABO基因亚型检测试剂盒检测基因型,测序法对ABO基因的第6、7外显子测定序列。结果血清学结果显示,先证者1红细胞上具有高凝集强度的A2抗原、H抗原和弱凝集强度的B抗原,血浆中含有弱凝集强度的抗-B,初步判定为A2Bx型;先证者2红细胞上具有高凝集强度的B抗原和弱凝集强度的A2抗原、H抗原,血浆中含有弱凝集强度的抗-A,初步判定为A2B型。基因亚型分型结果显示,先证者1为AO2型,先证者2为AB型。直接测序结果显示,先证者1第6外显子为261delG和A297G,第7外显子为C467T,T646A,G681A,C771T,G803C,G829A;先证者2第6外显子为A297G,第7外显子为C467T,C526G,C657T,G703A,C796A,C803C,G930A。克隆测序法显示2名先证者均具有CisAB01等位基因,先证者1同时具有O2等位基因,先证者2同时具有B101等位基因。结论由于与cisAB杂合的等位基因不同,造成均具有cisAB01等位基因的2名先证者在血清学上的显著差异。

12例CisAB亚型表型与基因分型分析

目的 分析和掌握所发现的CisAB亚型标本的血清学与基因特征及其家系遗传背景。方法 对本中心2018年1月~2022年1月发现的郑州市无偿献血者及医院送检的ABO正反定型不符标本,采用微柱凝胶卡和试管法等血清学试验做表型分类,并利用PCR仪做AB0基因第6、7外显子的扩增、扩增产物测序做相应分子生物学分析;对同一家系中同为CisAB亚型、血清学特征不同的个体做家系分析。结果 经血清学检测,12例标本正定型均为AB型,且11例血清中出现针对较弱抗原的意外抗体,其中A抗原强有9例,B抗原强为2例,1例正反相符。经基因测序确认:11例为CisAB01亚型,1例CisAB05亚型,其中7例基因型为CisAB01/O、血清学表型均为A2B3,2例CisAB01/B、表型均为A2B,2例CisAB01/A,表型分别为A1Bx和A1B3,1例CisAB05/O表型为AxB。在同一CisAB01家系中,检出1例表型为A2B3的CisAB01/O,1例表型为A2B的CisAB01/B。1个CisAB05的家系分析:检出2例CisAB05/O01,1例CisAB05/O02。结论 同一CisAB01家系中的不同个体在与不同ABO等位基因配对时,血清学表型可以有不同;宜结合分子生物学方法精准确定CisAB亚型基因,以确保输血安全。

自动化检测系统误判cisAB为A型1例

目的探讨将自动化检测系统与其他血清学及基因检测方法相结合,以防止亚型漏检。方法对一例自动化检测系统判读为A型的正反定型不符样本,进行试管法血型鉴定及基因测序分析。结果经试管法复检发现正定型A抗原和B抗原均出现弱凝集,且红细胞的H抗原增强。经基因检测确定该例患者血型基因型为cis-AB01/O02。结论为保证血型鉴定实验结果的准确性,应同时进行正反定型,关注自动化检测结果的凝集强度。对正反定型不符的结果,需使用不同厂家的试剂通过经典的试管法重复检测血型,必要时进行基因检测防止亚型的漏检。

对1例罕见CisAB01/B血型的基因学研究

目的探讨ABO血型系统中血型血清学定型正反定不一致的情况下,采用PCR-SSP技术与ABO基因测序技术对CisAB血型进行直接鉴定。方法采用常规血型血清学技术检测ABO血型,采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法进行CisAB血型的基因鉴定,然后经核酸测序分析其ABO基因EXON6,EXON7序列及突变位点。结果血型血清学鉴定表明患者血型为A亚B,用PCR-SSP基因分型确定为CisAB01/B,其ABO位点的第6、第7外显子序列分析发现该标本EXON6测序结果2条等位基因261没出现碱基G缺失,说明不存在O基因,出现的有:297G/A。EXON7测序结果 467C>T;803G>C结果鉴定是CisAB01;526C>G;657C>T;703G>A796C>A;803G>C,930G>A结果鉴定是B101。结论基因学鉴定可对血清学试验结果进行确认。

罕见的cisAB血型鉴定及家系调查

本站在对献血者的筛查过程中发现一例初筛血型为O型,检验科正反定型均为A型,后经血型室鉴定为A2BX,分子生物学定型为罕见的cisAB型,并对其进行家系调查,结果其父与子均为cisAB型。在对献血员的鉴定中,必须在初、复检一致和正反定型一致的情况下才可以报结果。初、复检中使用不同效价及不同厂家的试剂有利于亚型的发现,本例若在初、复检中同时使用一种正定型试剂,则有被漏检的可能。

一例cisAB血型的鉴定及家系分析

目的对一例血清学检测疑为cisAB型的样本进行基因分型和家系调查,以发现ABO亚型的分子基础及遗传规律。方法采用血型血清学方法对所有标本进行ABO血型鉴定,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增ABO基因第6和7外显子并对扩增产物进行测序分析。结果该样本的基因型为ABO^*cisAB.01/O.01.02,该家系调查中发现其它4位成员的血清学结果正反定型结果不符,但血型学特征各有差异;测序结果发现均携带有ABO^*cisAB.01基因。结论ABO^*cisAB.01基因能导致A/B抗原的弱表达,并能稳定遗传。血型血清学正反定型不符的标本,可采用分子生物学方法进行检测,辅助鉴定ABO血型。

1例易漏检的CisAB01/A血清学鉴定和基因分型

CisAB血型为ABO血型中罕见的亚型,初检时常表现为正反定型不符[1]。但在医院送检的ABO正反定型不符的标本中,作者发现1例患者血样在室温下初检时正反定型均为A型,经过进一步血清学鉴定和基因分型检测后判定为CisAB01/A型,从而避免了血型的误判,现报道如下。