cisAB亚型第6、7外显子及侧翼内含子序列分析

目的 研究汉族ABO血型系统cisAB亚型的分子遗传基础。方法 在标准血清学鉴定和PCR SSP基因分型的基础上 ,对汉族cisAB亚型进行第 6、7外显子及侧翼内含子DNA扩增 ,PCR产物经割胶纯化后直接序列分析。结果 血清学鉴定表明2例标本分别为A2 B3 和A3 B ,先证者的PCR SSP基因分型肯定了其中的B和O1基因。DNA序列分析表明 ,其第 6外显子有2 6 1G缺失 /不缺失杂合 ;第 7外显子与A1基因相比 ,有T4 6 7C杂合和C80 3G杂合 ,796位为正常C ,表明其血型为罕见的cisAB亚型。结论 4 6 7T、796C和 80 3C三处核苷酸的独特性决定了cisAB亚型的分子遗传基础。

中国人罕见的cisAB变异型分子机制分析

为研究中国人群ABO血型系统中罕见的cisAB变异型的分子遗传背景,用血型血清学方法鉴定12例ABO血型疑难样本和116例随机无血缘关系样本,应用聚合酶链反应和DNA序列分析等方法对样本ABO基因酶活性编码区外显子6、7和侧翼内含子进行突变筛选和检测,并对不同基因型的扩增片段进行单倍体序列分析。血清学检测发现12个样本均为(A强B弱)或(A弱B强),PCR产物直接序列分析表明这些样本均为cisAB变异型,并存在4种基因型。通过单倍体序列分析,从中发现2种cisAB等位基因,其中cisAB01不仅存在外显子7的467C>T和803G>C变异,还在第6内含子存在未经报道的163T>C和179C>T变异;另一种等位基因是在B101基础上保留了A101的803G位点,编码一条176G、235S、266M和268G组合的多肽链。经检索,未发现该组合的ABO等位基因,该等位基因已被国际血型抗原基因突变数据库命名为cisAB05等位基因。文章系统研究了中国人群cisAB变异型分子机制,发现了一种新的cisAB05等位基因,同时根据内含子序列推测cisAB01等位基因可能是通过A101和B101等位基因间的同源交换而形成的。

2例CisAB/B亚型的血清学和分子生物学研究

目的结合ABO血型血清学结果,采用ABO基因测序技术鉴定CisAB血型。探讨CisAB/B亚型的血清学和基因型的关系。方法对于送至青岛市中心血站ABO血型待定的献血者标本,采用经典试管法进行血清学分析。采用聚合酶链反应(PCR)直接测序的方法分析ABO基因第6,7外显子及侧翼序列、启动子和增强子序列。对于有突变的标本再进行单倍型测序确认。结果此试验中CisAB/B亚型个体的基因型为CisAB01/B101。血清学表型分别为A2B型和AxB型。这两例标本的启动子序列和增强子序列相同。结论依据血清学结果往往很难确定CisAB血型,基因测序技术结合血清学分析能够准确鉴定血型。基因型相同的个体会表现出不同的血清学特点。

中国汉族人群检出新的B(A)641T>C等位基因

目的明确稀有ABO表现型的遗传学基础。方法对ABO血清学常规定型正反不一致的样本,采用PCR-RFLP方法作初步基因分型,对8例血清学表现为AwB,而基因分型具有O基因的个体,进行ABO基因第6和7外显子PCR产物的TA克隆及核苷酸序列测定。结果8例样本除1对为母女关系外,其余无任何亲缘关系,血清学表现相似,红细胞上含有接近正常的B抗原和少量A抗原,H抗原含量较正常B细胞显著增高,血清中存在抗-A,初定为AwB,基因分型均为BO。克隆测序表明除具有正常O1或者O1V基因外,他们的B基因第7外显子在正常B等位基因的基础上,均发生单碱基突变,4例发生nt700C>G点突变,导致Pro234Ala,2例无关个体为nt640A>G点突变,导致Met214Val,1对母女均表现nt641T>C点突变,导致Met214Thr。证实所有8例样本真正血型应为B(A)表现型,其基因型均为B(A)/O型。结论在中国汉族人群中检出3种B(A)血型,除了已在我国台湾首先被发现的B(A)700C>G和笔者以前报道的B(A)640A>G之外,新发现1种B(A)641T>C等位基因。

罕见的CisAB与B(A)血型的基因型研究

目的 研究ABO血型系统中血清定型与基因型不一致的情况 ,通过核苷酸序列分析 ,最终阐明其真正血型。方法 应用吸收放散等实验 ,研究血清学实验中ABO正反定型不一致的情况 ,同时采用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性方法 ,进行ABO初步基因分型 ,对二者结果矛盾的特殊标本则通过克隆测序了解他们的ABO基因第 6和第 7外显子的核苷酸序列构成。结果 在近年来收集到的并且做过基因分型的 3 5例ABO亚型标本中 ,有 7例标本血清学与基因分型不一致 ,血清学为AB亚型但基因分型却具有O基因。4例ABx ,基因分型均为A 10 2 /O ,其A基因在A 10 1的基础上 ,均有nt467(C→T)和nt80 3位 (G→C)的点突变 ,即都属于CisAB 0 1等位基因 ,真正的基因型是CisAB/O ;另外 3例血清学疑为AxB ,基因分型为BO的个体 ,除皆具有正常O基因外 ,其B基因在正常B等位基因的基础上 ,均发生单碱基突变 ,其中 1例存在nt70 0 (C→G) ,属于已经报道的B(A) 70 0等位基因 ;另外 2例无亲缘关系标本的B基因均存在新的nt64 0 (A→G)的点突变 ,导致 2 14位甲硫氨酸被缬氨酸置换。结论 通过核苷酸序列分析 ,证实 7例血清学表现为AB亚型而具有正常O基因的个体 ,4例是罕见的CisAB ,3例为B(A )型 ;同时在中国汉族ABO亚型人群中 ,检出一种新的B(A)