羟基喜树碱和鬼臼乙叉甙联合治疗鼻咽癌的实验研究

背景与目的：许多研究表明，拓扑异构酶I和II抑制剂具有互补作用，两者合用有协同作用。本研究探讨拓扑异构酶I和II型抑制剂（羟基喜树碱（HCPT）和鬼臼乙叉甙（VP－16））联合治疗鼻咽癌实验研究。方法：MTT法测定HCPT和VP－16单独及联合应用对鼻咽癌细胞株CNE2的细胞毒作用，建立CNE2裸鼠移植瘤模型，观察HCPT和VP－16联合应用体内抑制肿瘤生长的作用。结果：HCPT和VP－16单独应用对CNE2具有明显的细胞毒作用。其IC50分别为（13．5±1．2）μmol/L及（13．5±1．0）μmol/L。在体外实验中，在HCPT与VP－16相同剂量条件下，高浓度合用具有明显的协同作用（CI＜1），体内实验也表明，1．5mg/kg每2天1次，HCPT抑瘤率为13．6％，10mg/kg每2天1次，VP－16抑瘤率为27．3％，VP－16与HCPT合同，其抑瘤率为50％，结论：HCPT＋VP－16在体内，外可协同抑制鼻咽癌细胞的生长。

顺铂与足叶乙甙对白血病细胞K562的协同杀伤作用及其机制

背景与目的:足叶乙甙(etoposide,VP鄄16)为白血病化疗最常用的化疗药之一,其临床应用日益受到天然与继发耐药的影响。对一些实体瘤的研究发现顺铂(cisplatin,DDP)与VP鄄16联合应用具有协同效应。本研究通过DDP与VP鄄16联合作用杀伤白血病细胞K562,探讨其增强VP鄄16疗效的作用机制。方法:采用VP鄄16(0,5μg/ml)与不同浓度DDP(0,0.3,3,15,30μg/ml)联合对K562细胞进行处理。应用噻唑蓝(MTT)法检测用药后细胞的存活相对数量,计算VP鄄16和DDP应用对K562细胞的抑制作用;AO/EB双荧光法定量分析细胞凋亡率。半定量RT鄄PCR法和Westernblot检测拓扑异构酶(topoisomerase,TOPO)Ⅱα、Ⅱβ、Sp1、Sp3基因的mRNA和蛋白水平。结果:VP鄄16与DDP合用具有明显的协同效应。两药合用后,细胞凋亡率明显增加。单独应用DDP可以明显上调TOPOⅡ和Sp1表达(呈浓度依赖,TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在30μg/mlDDP时比正常对照分别上调36%,25%和75%),并使Sp3的表达降低49%;单用5μg/mlVP鄄16时TOPOⅡ则下调(TOPOⅡα下降72%),TOPOⅡβ和Sp1的表达未受影响,Sp3的表达上调14%。5μg/mlVP鄄16与DDP联合应用具有协同效应,使TOPOⅡ和Sp1表达水平升高。TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在5μg/mlVP鄄16与30μg/mlDDP联合应用时比单用VP鄄16分别上升83%,11%,58%,但低于单独应用DDP的表达水平;而Sp3的表达水平与单独应用DDP比较下调61.3%。Western印迹检测结果与RT鄄PCR结果相符。结论:DDP在化疗中与VP鄄16发挥协同作用,通过上调拓扑异构酶Ⅱ的表达水平,为VP鄄16提供更多的靶酶,使VP鄄16杀伤K562细胞效果明显提高。

上调Sp1表达对小细胞肺癌耐药细胞的化疗增敏作用

探讨转录因子Sp1对人小细胞肺癌足叶乙甙耐药细胞H446/VP的化疗增敏作用。采用脂质体转染Sp1质粒进入细胞,MTT法检测细胞对足叶乙甙作用的半数抑制浓度(IC50);AO/EB双荧光染色观察细胞死亡率;RT-PCR和Western印迹检测Sp1、拓扑异构酶Ⅱα(Topo Ⅱα)和拓扑异构酶Ⅱβ(Topo Ⅱβ)mRNA和蛋白质表达。结果:细胞转染Sp1质粒后IC50明显降低,细胞死亡率明显增加。RT-PCR和Western印迹检测可见,H446/VP-Sp1细胞中Sp1、Topo Ⅱα的mRNA和蛋白质表达量均较转染前明显增加,而Topo Ⅱβ表达无显著性差别。研究表明,上调Sp1表达可提高人小细胞肺癌耐药细胞中Topo Ⅱα的表达,为Topo Ⅱ抑制剂类药物提供了更多的作用靶点,使细胞对Topo Ⅱ抑制剂类药物的敏感度提高。

鬼臼乙叉苷对人鼻咽癌细胞CNE_2的细胞毒作用和对DNA的断裂作用

作者用噻唑蓝还原(MTT)法测定了鬼臼乙叉苷(鬼臼乙叉甙,VP-16)对人体鼻咽癌细胞CNE2的毒性作用,在药物浓度为2.5,5.0,10.0,20.0,40.0,80.0和160.0 ug/ml的条件下,连续4次实验,VP-16对CNE2细胞的生长抑制率分别为3.3±3.7％,15.2±3％,36.l±l0％,54±17％,68.4％士13％,76.7士9％和84.2±8％,其半数抑制浓度(IC_(50))为17.0 ug/ml。CNE2细胞分别在含有20.0,100.0和200.0ug/ml VP-16的培养液中孵育24h,细胞的DNA发生了断裂。DNA断裂量随药物浓度的增加而增加。将CNE2细胞放入含200.0ug/ml VP-16的培养液中孵育6h,12h和24 h,发现各时间点的DNA均发生了断裂。断裂程度随时间的增长而增加,未经药物处理的对照细胞的DNA未见断裂现象。经用50.0,100.0,200.0和400.Oug/VP-16处理的CNE_2细胞的拓扑异构酶Ⅱ能诱导超螺旋pBR322质粒DNA断裂成线状DNA,断裂程度与药物的浓度相平行。