外源基因导入贡柑体胚及其人工种子构建的初步研究

用小细胞团和分散细胞混合物与两种带不同质粒的农杆菌共培养的方法,将质粒PGV3850:1103neo T-DNA上的km抗性基因和Nos/Npt基因、质粒PGV517的Km抗性基因、NPTⅡ基因和毒蛋白基因转入贡柑细胞,在含有卡那霉素的选择培养基上选择出抗性愈伤组织和幼胚。通过Nopalim和NPTⅡ酶性检测、DNA/DNA分子杂交鉴定,证明了Nos基因、NPTⅡ基因已整合到贡柑体胚的细胞基因组中并表达,苏云金杆菌的毒蛋白基因整合到贡柑细胞基因组中,第一次在柑桔类果树实现了外源基因转移。用3％海藻酸钠包埋转化体胚制备人工种子,2粒转基因人工种子已萌发。

海藻酸钠作为苜蓿种胚和贡柑体胚包裹胶囊的特性

在琼脂培养基中加3％海藻酸钠,可延迟苜蓿种子的萌发,抑制幼苗的生长。海藻酸钠溶液滴入CaCl_2溶液(60mmol),即形成胶囊状颗粒。经这种胶囊包裹的苜蓿种胚,其萌发及幼苗生长不受影响,而贡柑体胚在MT培养上的发芽率,几乎与未包裹的相同,即使在湿润的滤纸层上萌发,其萌发率可达32％。在海藻酸钠溶液中加入1％活性炭,能减少营养成分在胶囊制备过程中的漏出,而且有益于被包裹苜蓿种胚成苗后的发育。用国产海藻酸钠制成的包裹胶囊不发粘。虽然在室温下容易脱水干燥,但在某一含水量下,仍可重新吸水复原。