空肠弯曲菌cj0069蛋白的克隆表达及抗原性分析

目的构建空肠弯曲菌cj0069基因原核表达系统,克隆表达cj0069蛋白,根据cj0069的氨基酸序列进行抗原性结构预测分析,并验证其抗原性特征。方法利用在线软件对cj0069蛋白进行抗原性结构预测分析;用PCR方法从中国分离菌株ICDCCJ07001的基因组DNA中扩增cj0069基因,连接入pMD18-T载体,将重组质粒pMD18-T/cj0069和表达载体pGEX-4T-1双酶切,回收cj0069和pGEX-4T-1酶切产物后连接,连接产物转化入大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),对重组质粒pGEX-4T-1/cj0069进行测序及酶切鉴定,IPTG诱导其表达,表达产物进行SDS-PAGE分析及飞行质谱鉴定;利用空肠弯曲菌兔免疫血清,采用Western blot分析cj0069蛋白的抗原反应性。结果 PCR扩增、DNA测序及酶切鉴定证实重组质粒pGEX-4T-1/cj0069构建成功,重组表达蛋白rGST-cj0069经飞行质谱鉴定为保守空肠弯曲菌蛋白。结构预测获得cj0069蛋白的抗原性肽段及线性表位等抗原性结构特征。Western blot检测显示该蛋白不能被空肠弯曲菌免疫兔血清识别。结论成功构建cj0069基因重组表达载体pGEX-4T-1/cj0069,并在大肠埃希菌中高效表达,获得的空肠弯曲菌cj0069蛋白具有抗原性结构特征,但针对免疫血清不具有抗原反应性。