cklfsf 2a在小鼠睾丸发育中的基因表达和蛋白定位

目的研究趋化素样因子2a(cklfsf2a)在小鼠睾丸中的基因调控和蛋白定位。方法采用RT-PCR方法检测cklfsf2a基因在不同周龄小鼠睾丸组织中的表达情况,制备cklfsf2a多克隆抗体,分别采用免疫组织化学和原位杂交方法检测cklfsf2a蛋白和mRNA在小鼠睾丸组织中的定位。结果cklfsf 2a mRNA在出生后14d内出现,表达量逐渐增加,在成年前达到高峰并持续表达。cklfsf2a蛋白和mRNA均特异性的表达于睾丸初级精母细胞。结论cklfsf2a基因存在发育的表达调控,随着睾丸发育的日趋成熟,表达量逐渐增加,其作用可能和精母细胞的发育有关。

CKLFSF1基因与CKLFSF2基因间存在的顺式作用元件

探讨趋化素样因子超家族成员 1,2基因 (CKLFSF1基因与CKLFSF2基因 )间的短序列对其下游基因表达的调控作用 .运用PCR技术扩增CKLFSF1基因与CKLFSF2基因间的序列 ,将此片段插入含有萤光素酶 (luciferase)报告基因载体上 .以磷酸钙介导基因转染技术 ,将重组质粒以及阴性和阳性对照组质粒转染到HeLa细胞 ,进行瞬时表达分析 .在pGL3 Basic质粒中的报告基因萤光素酶无表达 ,但将CKLFSF1与CKLFSF2基因间的序列插入到启动子上游或下游后 ,显著抑制其下游基因的表达 ,萤光素酶活性明显降低 .结果提示 ,CKLFSF1与CKLFSF2基因间的序列不具有启动子活性 。