34株鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及部分耐药基因调查分析

为更好的指导养殖场鸭疫里默氏杆菌病临床用药以及探究该菌多重耐药机制,本研究对安徽地区患病鸭采样、细菌分离鉴定后,进行生化鉴定、药敏试验,再根据药敏结果进行氨基糖苷类耐药基因以及Ⅰ类整合子鉴定。药敏试验结果表明该地区34株鸭疫里默氏杆菌分离株对头孢拉定、头孢曲松、氟苯尼考、大观霉素、磺胺异恶唑等抗生素较敏感,对卡那霉素、庆大霉素、丁胺卡那、链霉素、阿奇霉素等抗生素均有较强的耐药性;其中有97%的菌株存在多重耐药现象,最高可耐19种抗生素。15种氨基糖苷类耐药基因鉴定结果表明aac(6')Ⅰb基因、aac(6')Ⅱ基因、rmtC基因、aph(3')Ⅱa基因检出率分别为94.1%(32/34)、82.4%(28/34)、73.5%(25/34)、70.6%(24/34),其余基因均未检测到;同时34株分离株均携带Ⅰ类整合子,大小为1 kb,其基因盒种类为aadA1(链霉素耐药基因);其氨基糖苷类耐药表型和耐药基因符合率大于69%。因此,安徽地区鸭疫里默氏杆菌分离株多重耐药性严重,需加强对抗生素的用药规范性,特别要注意氨基糖苷类药物使用。

霍乱弧菌O_1和O_(139)血清型I类整合子的扩增与分布研究

目的 扩增霍乱弧菌不同血清型I类整合子基因片段 ,并分析I类整合子在霍乱弧菌O1和O13 9血清型中的分布。 方法 收集霍乱弧菌O1和O13 9血清型 40株 ,根据GenBank资料设计PCR引物 ,扩增霍乱弧菌I类整合子基因片段 ,并用限制性酶切分析法进行鉴定 ,分析I类整合子在不同血清型的分布情况。 结果 从霍乱弧菌O1和O13 9血清型中均能扩增约 80 0bp的基因片段 ,扩增片段经PstI酶切后可获得 671和 12 7bp的片段 ,经HindIII酶切后可获得 5 80、160和 5 8bp的片段 ,经HindIII和PstI酶切后可获得 45 3、160、12 7和 5 8bp的片段 ,I类整合子在O13 9血清型霍乱弧菌中分布多于O1血清型。 结论 I类整合子与霍乱散发菌株耐药性的传递、血清型的分布有密切的联系。

产ESBLs大肠埃希菌I类整合子与耐药性关系分析

目的了解I类整合子在产ESBLs和非产ESBLs大肠埃希菌中分布流行状况,分析I类整合子在细菌多重耐药中的作用。方法根据NCCLS推荐的琼脂稀释法进行药敏试验,用双纸片协同试验检测产ESBLs菌,PCR扩增Ⅰ类整合酶基因。结果大肠埃希菌ESBLs和I类整合子的检出率分别为57.4%和45.4%,I类整合子在产ESBLs菌的分布明显高于非产ESBLs菌。结论I类整合子的存在与细菌产生ESBLs相关,影响着临床分离株多重耐药率的高低。

铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子相关基因的解析和定位

目的对4株铜绿假单胞菌临床菌株携带的Ⅰ类整合子相关基因进行解析和定位,探讨Ⅰ类整合子相关基因在细菌耐药性形成和耐药基因播散中的作用。方法采用PCR扩增、DNA测序、DNA序列比对的方法对4株铜绿假单胞菌临床菌株携带的Ⅰ类整合子相关基因进行解析,采用接合试验对该类整合子进行定位分析。结果4株铜绿假单胞菌I类整合子都含有耐药基因,该耐药基因在相应菌株中发挥耐药作用;该菌整合子位于质粒上。结论Ⅰ类整合子耐药基因在铜绿假单胞菌耐药性形成和耐药基因的播散中发挥作用。

猪场大肠杆菌Ⅰ型整合子及其基因盒的分子流行病学研究

对某猪场大肠杆菌Ⅰ型整合子及其基因盒的分子流行病学进行了研究。结果表明:猪场大肠杆菌Ⅰ型整合子流行普遍,192株分离菌中105株携带Ⅰ型整合子,检出率达54.7%。共检出6种Ⅰ型整合子,它们以8种组合形式在猪场大肠杆菌中流行。猪群、饲养员及饲养环境分离菌株Ⅰ型整合子检出种类、检出率相近,但同耐药谱菌株Ⅰ型整合子携带无一致性。各种Ⅰ型整合子整合不同种类、不同数目的耐药基因盒,其中100%整合有氨基糖腺苷转移酶基因(aadA),77%整合有二氢叶酸还原酶基因(dhfr),仅少数整合有链丝菌素乙酰转移酶基因(sat)、β-内酰胺酶基因(bla)及红霉素酯酶基因(ereA)。Ⅰ型整合子携带菌株均表现多重耐药,其中100%耐受复方新诺明,90%耐受链霉素,75%耐受大观霉素。该猪场长期使用磺胺类、氨基糖苷类抗菌药物,尤其是将它们用作抗菌促长剂,造成了携带dhfr及aadA两种基因盒的Ⅰ型整合子在猪场大肠杆菌中广泛流行。

牛源大肠杆菌Ⅰ类整合子分子特征及其与耐药性关系的研究

本试验旨在了解牛源大肠杆菌中Ⅰ类整合子的流行情况和分子特性,并分析其与细菌耐药性的关系。本研究选取92株从肉牛非重复分离的大肠杆菌,经全自动药敏分析仪对11种常用抗生素进行了药敏检测分析,并利用PCR技术和直接测序法对牛源大肠杆菌中Ⅰ类整合酶基因及Ⅰ类整合子阳性菌株中可变区基因盒进行了调查、分析及鉴定。结果显示,92株牛源大肠杆菌中有29株检测到Ⅰ类整合酶基因,检出率为31.5%;2种可变区基因盒排列最为流行,分别为aadA1和dfrA17+aadA5;92株大肠杆菌对氨苄西林、链霉素、磺胺异恶唑和四环素的耐药率均大于45.0%,Ⅰ类整合子阳性菌株对氨苄西林、氯霉素、链霉素、磺胺异恶唑和甲氧苄啶/磺胺甲恶唑的耐药率均显著高于Ⅰ类整合子阴性菌株(P<0.05)。结果表明本试验分离的牛源大肠杆菌耐药现象非常严重,整合子/基因盒分布广泛,已成为耐药基因储库,对耐药基因传播起重要作用,提示应严格控制动物饲料中抗生素添加剂的滥用。

猪源大肠杆菌耐药性与Ⅰ型整合子关系研究

目的为了解猪源大肠杆菌中Ⅰ型整合子的流行情况,探讨Ⅰ型整合子与大肠杆菌耐药表型的相关性。方法采用微量肉汤稀释法测定119株猪源大肠杆菌对8类14种抗菌药物的耐药性,并采用PCR法检测猪源大肠杆菌Ⅰ型整合酶基因(int I1)并扩增其可变区,对PCR产物进行酶切分析,测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒。结果 119株大肠杆菌耐药现象十分严重,对四环素、磺胺异恶唑、新诺明全部耐药,所有菌株均呈多重耐药。119株猪源大肠杆菌中有92株含Ⅰ型整合子,检出率77.31%。扩增出7类大小不同的基因盒插入区片段,范围为1008bp～3149bp。7类Ⅰ型整合子在119株猪源大肠杆菌中存在13种流行组合。78.15%大肠杆菌菌株的Ⅰ型整合子携带2种或2种以上的基因盒,其中以携带编码氨基糖苷类药物耐药基因(aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB)最多,其次为编码磺胺类药物耐药基因(dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27),此外还携带编码利福平、林可霉素和氯霉素的基因lnuF、cmlA6、aar-3、orf。结论Ⅰ型整合子普遍存在于大肠杆菌中,且呈流行上升趋势;Ⅰ型整合子参与耐药及多重耐药,但单株细菌携带的耐药基因盒与其耐药表型无对应关系。

耐复方新诺明香港海鸥型菌中Ⅰ类整合子、磺胺类耐药基因(sul1、sul2)的检测

目的了解香港海鸥型菌淡水鱼与蛙来源分离株磺胺类耐药性以及Ⅰ类整合子介导耐药的情况。方法采用K-B纸片扩散法检测香港海鸥菌耐复方新诺明药物菌株,PCR方法扩增耐药菌株sul1、sul2和Ⅰ类整合子基因。结果 128株香港海鸥菌中共有20株耐复方新诺明药物,耐药率15.6%;20株耐药菌株中sul1阳性率90%,sul2阳性率50%,Ⅰ类整合子携带率80%。结论淡水鱼与蛙来源香港海鸥型菌菌耐磺胺的机制可能与Ⅰ类整合子、sul1、sul2基因有关。

鲍曼不动杆菌医院感染流行特征、危险因素与Ⅰ型整合子关系的研究

目的了解鲍曼不动杆菌医院感染现状及相关危险因素;探讨鲍曼不动杆菌的耐药性和Ⅰ型整合子的关系。方法对2007年我院由鲍曼不动杆菌导致的医院感染89例患者的危险因素进行1∶1病例对照研究;应用PCR技术对鲍曼不动杆菌进行Ⅰ型整合子测定。结果研究显示鲍曼不动杆菌医院感染相关的危险因素依次为病情(OR=18.86)、人工气道(OR=8.47)、机械通气(OR=6.16)和抗菌药物使用天数(OR=5.41)。鲍曼不动杆菌Ⅰ型整合子分布特征明显,多重耐药菌株阳性率明显高于非多重耐药菌株。结论病情、人工气道、机械通气和抗菌药物使用天数是鲍曼不动杆菌医院感染危险因素;I型整合子作为鲍曼不动杆菌耐药性监测的工具,值得开展。

鸡源大肠杆菌Ⅰ型整合子-基因盒与多重耐药的关系

从安徽省合肥地区4个养鸡场分离鉴定184株大肠杆菌,用PCR方法对Ⅰ型整合子及其基因盒的流行分布进行研究,用微量肉汤稀释法测定分离菌株对16种抗菌药物的最小抑菌浓度。PCR结果显示,184株鸡源大肠杆菌中49.45%（91/184）检出Ⅰ型整合子。91株整合子阳性大肠杆菌中,70株携带耐氨基糖苷和磺胺类药物的基因盒,分别是dfrA1＋tnpAIS26＋aadA1（45/70）基因盒、dfrA12＋aadA2（16/70）基因盒和dfrA1＋aadA1（9/70）基因盒,21株不携带基因盒。药敏实验结果显示,184株大肠杆菌对16种抗菌药物的耐药率为2.17%-97.83%,91株整合子阳性大肠杆菌对3种及3种以上药物的耐药率为97.8%;与整合子阴性菌株相比耐药率有显著差异,表明大肠杆菌的多重耐药性与整合子阳性检出率相关。

鸡源沙门氏菌多重耐药和Ⅰ型整合子的流行调查

为了研究沙门氏菌多重耐药性与Ⅰ型整合子的流行情况,本研究从山东省鸡场分离沙门氏菌,根据Kauffmann-White方法测定其血清型,采用微量稀释法测定了沙门氏菌对19种常用抗菌药物的MIC值,并且采用PCR技术测定了Ⅰ型整合子及其携带的耐药基因盒。结果显示:本次分离得到311株沙门氏菌,包括印地安纳沙门氏菌(133株)和肠炎沙门氏菌(178株)2种血清型;药物敏感性试验表明:分离菌株对磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、萘啶酸、氨苄西林、四环素、多西环素和甲氧苄啶普遍耐药,菌株多重耐药率为91.0%(283/311),99%的分离株对阿米卡星、多黏菌素敏感;PCR测定Ⅰ型整合子结果:Ⅰ型整合子的检出率为65.0%(202/311),其中多重耐药表型菌株Ⅰ型整合子阳性率为92.6%,202株整合子阳性菌株中有6株的携带基因盒dfr17-aadA5。上述结果表明,Ⅰ型整合子普遍存在于沙门氏菌中,并且与沙门氏菌的多重耐药性密切相关。

阿奇霉素上调生物被膜阳性铜绿假单胞菌Ⅰ类整合酶基因的表达

目的探讨阿奇霉素对生物被膜(BF)阳性铜绿假单胞菌(PA)Ⅰ类整合酶基因(intI1)mRNA表达量的影响。方法对某院临床分离的10株PA进行intI1基因检测,选择其中1株BF+intI1基因阳性的PA进行培养,并设空白对照组和阿奇霉素处理组(按阿奇霉素浓度不同分为3个浓度组,分别为16、32、64 mg/L组),重复试验5次,采用荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测其intI1 mRNA的表达情况。结果16 mg/L阿奇霉素组、32 mg/L阿奇霉素组、64 mg/L阿奇霉素组和对照组intI1 mRNA相对表达量分别为(1.15±0.04)、(12.47±3.10)、(19.71±0.78)和(1.00±0.00),各组间比较,差异有统计学意义(F=163.82,P<0.001);组间两两比较,除低浓度阿奇霉素组(16 mg/L)与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)外,其他各组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05),阿奇霉素组intI1 mRNA表达量随培养液中阿奇霉素浓度升高而升高。结论在阿奇霉素压力下BF阳性的PA,intI1表达有所上调,可提高耐药基因的捕获概率,促进耐药基因重组。

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子检测

目的:了解本院临床分离的亚胺培南耐药铜绿假单胞菌(IRPA)I类整合子基因携带情况,分析其携带的基因盒与细菌耐药的相关性。方法:采用聚合酶链反应(PCR)检测86株IRPA的I类整合酶及I类整合子,测序确定整合子携带的耐药基因盒,采用PCR检测携带整合子耐药基因盒中的金属酶耐药基因、氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因、16Sr RNA甲基化酶基因和Opr D2基因;采用VITEK-2全自动微生物鉴定系统检测整合子阳性菌株的耐药特性。结果:在86株IRPA中,整合酶的检出率为23.3%(20/86),I类整合子的检出率为8.14%(7/86),共检出5种I类整合子耐药基因盒;I类整合子阳性菌株对12种抗菌药物存在不同程度耐药并携带数量众多的耐药基因。结论:I类整合子中携带的多种耐药基因盒与IRPA的多重耐药有关。

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌医院感染危险因素分析

目的了解亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌（CRAB）医院感染的危险因素，并探讨I类整合子在鲍曼不动杆菌亚胺培南耐药中的作用。方法选取确诊为CRAB医院感染患者54例作为病例组，按1：3配对选择162例亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌（CSAB）医院感染患者作为对照组。采用单因素分析及多因素logistic回归分析其危险因素。PCR检测I类整合酶基因。结果单因素分析发现，与CRAB医院感染相关的危险因素有病情危重、入住ICU时间、住院时间≥14d、机械通气／人工气道、留置尿管、中心静脉置管、免疫抑制剂的使用、抗生素使用时间≥7d、抗生素药物种类≥3种。多因素logistic回归分析发现，病情危重（OR：8．47；95％CI：1．56～46．0）、入住ICU时间（OR：9．32；95％CI：1．83～47．43）、住院天数≥14d（OR：13．89；95％CI：3．07～62．85）、机械通气／人工气道（OR：18．86；95％C1：4．38～81．31）、抗生素使用种类≥3种（OR：6．16；95％CI：1．85～20-51）、抗生素使用时间≥7d（OR：541：95％CI：136～21．58）是CRAB医院感染的独立危险因素；CRAB组中I类整合酶基因检出率（59．3％）显著高于CSAB组（34．6％），差异有统计学意义（P〈0．001）。结论病情危重、入住ICU时间、住院时间、机械通气／人工气道、抗生素使用种类≥3种、抗生素使用时间≥7d是CRAB医院感染的独立危险因素，I类整合子在CRAB中普遍存在。需加强对相关危险因素的控制及耐药机制的研究，早期防治CRAB医院感染的发生。

青岛地区产ESBLs菌株Ⅰ类整合子的分布与耐药性分析

目的研究临床分离的多重耐药产ESBLs菌株中I类整合子的分布及其与ESBLs菌株耐药性之间的关系。方法收集青岛市立医疗集团临床分离鉴定的非重复大肠埃希菌89株及肺炎克雷伯菌86株，应用双纸片增效法进行ESBLs菌株鉴定，K—B纸片扩散法测定其对16种常用抗菌药物的敏感性，PCR法检测I类整合子的整合酶基因，分析I类整合子与细菌耐药性的关系。结果105株细菌鉴定为ESBLs阳性，产ESBLs菌对16种常用抗菌药物的耐药率为1．9％～93.3％，I类整合予的检出率为66．7％，I类整合子阳性和阴性产ESBLs菌株对16种抗菌药物的耐药率差异无统计学意义（P〉0．051。结论青岛地区产ESBLs菌中I类整合子流行广泛，但仍需进一一步研究其在ESBLs菌株多重耐药性中的作用机制。

鸡源沙门氏菌多重耐药和Ⅰ型整合子的流行调查(英文)

[目的]该研究旨在研究沙门氏菌多重耐药性与Ⅰ型整合子的流行情况。[方法]该研究从山东省鸡场分离沙门氏菌,根据Kauffmann-White方法测定其血清型,采用微量稀释法测定了沙门氏菌对19种常用抗菌药物的MIC值,并且采用PCR技术测定了Ⅰ型整合子及其携带的耐药基因盒。[结果]本次分离得到311株沙门氏菌,包括印地安纳沙门氏菌(133株)和肠炎沙门氏菌(178株)2种血清型;药物敏感性试验表明:分离菌株对磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、萘啶酸、氨苄西林、四环素、多西环素和甲氧苄啶普遍耐药,菌株多重耐药率为91.0%(283/311),99%的分离株对阿米卡星、多黏菌素敏感;PCR测定Ⅰ型整合子结果:Ⅰ型整合子的检出率为65.0%(202/311),其中多重耐药表型菌株Ⅰ型整合子阳性率为92.6%,202株整合子阳性菌株中有6株的携带基因盒dfr17-aadA5。[结论]Ⅰ型整合子普遍存在于沙门氏菌中,并且与沙门氏菌的多重耐药性密切相关。

鸭疫里默氏菌Ⅰ型整合子与耐药基因盒检测

为了明确整合子结构对鸭疫里默氏菌耐药性产生和传播的影响,根据已知的Ⅰ型整合子序列,应用PCR方法对22株临床分离菌株进行检测并测序分析。结果显示,22株(100%)菌均为Ⅰ型整合酶基因阳性,1株菌(4.5%)捕获了耐药基因盒aadA5,21株菌(95.5%)顺次捕获了耐药基因盒aac6-Ⅱ、catB3和aadA 1,证明了整合子结构是该菌耐药性传播的重要机制之一。

2007-2012年临床分离鲍曼不动杆菌耐药性及Ⅰ类整合子变化分析

目的检测我院2007年1月-2012年12月临床分离鲍曼不动杆菌耐药性及Ⅰ类整合子变化。方法对2007—2012年分离的鲍曼不动杆菌分为2007—2008、2009—2010、2011—2012年3个时间阶段,采用纸片扩散法研究其对12种常用抗菌药物的耐药性;在3个时间段分离的菌株中分别随机选取100株,采用聚合酶链反应扩增检测Ⅰ类整合子。结果 3个时间段分别检测鲍曼不动杆菌为191、279、527株。鲍曼不动杆菌对12种常用抗菌药物耐药性增长明显(P<0.05)。Ⅰ类整合子阳性菌检出率逐年增加,且Ⅰ类整合子阳性菌耐药性明显高于阴性菌(P<0.01)。结论我院鲍曼不动杆菌耐药性较高,Ⅰ类整合子和多药耐药检测比例增加明显,需要加强医院感染的检测和耐药菌监控,进一步规范抗菌药物使用。

铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子及耐药基因分析

铜绿假单胞菌是临床上重要的院内感染菌,对多种抗生素耐药。整合子是能捕获并整合外源耐药基因盒,并使之表达的DNA元件。通过整合子水平转移的方式极大地加速了耐药基因在同种及不同种属之间的传播,造成细菌的耐药以至多重耐药问题日益严重。

Ⅰ类整合子与铜绿假单胞菌耐药的相关性研究

目的研究整合子在铜绿假单胞菌临床分离株中的分布及耐药性情况。方法用PCR法检测铜绿假单胞菌中I类整合子基因,对整合酶阳性菌株与铜绿假单胞菌PU21行转移接合实验,采用琼脂对倍稀释法分析整合酶阳性菌株及接合转移成功菌株的药敏情况。结果 57株铜绿假单胞菌经PCR法30株检测含有I类整合酶,药敏结果显示I类整合子阳性菌株较阴性菌株耐药率明显升高,I类整合子阳性菌株21株转接成功,转移接合子与I类整合子阳性菌株比较,对亚胺培南、复方新诺明和环丙沙星的耐药性有所降低。结论铜绿假单胞菌中有I类整合子的分布,I类整合子阳性菌株及转移接合子较阴性菌株对多种抗生素更易产生耐药。