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Molecular Cloning and NucleotideSequence of Classical SwineFever Virus Strain Shimen 被引量:1
1
作者 Huang Qianhua Zhang Chuyu +2 位作者 Wang Jiafu Wang Ning Fu Liezhen(College of Life Sciences, Wuhan University, Wuhan, 430072,China) 《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 CAS 1998年第4期504-508,共5页
According to the previously published CSFV sequences, 18 paris of partially overlapping primers which span the entire genome of CSFV strain Shimen were designed and synthesized. Each cDNA fragment of strain Shimen was... According to the previously published CSFV sequences, 18 paris of partially overlapping primers which span the entire genome of CSFV strain Shimen were designed and synthesized. Each cDNA fragment of strain Shimen was amplified by RT-PCR method from the anticoagulant blood of strain Shimen infected pig. The PCR fragments were cloned into pGEM-T vector respectively and sequenced. The results show that we have obtained the nucleotide sequence of strain Shimen. The viral RNA consists of 12 297 nucleotides including noncoding regions of 373 and 227 bases at the 5′ and 3′ end, respectively, and a single large open reading frame spanning 11 697 nucleotides in the middle, which encodes an amino acid sequence of 3 989 residues with a calculated molecular weight of 437.6×103. The precisely sequencing of 5′ and 3′ termini is undertaking. 展开更多
关键词 Key words classical swine fever virus strain Shimen CLONING SEQUENCING
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The Lapinized Chinese Strain Vaccine Against Classical Swine Fever Virus:A Retrospective Review Spanning Half A Century 被引量:6
2
作者 QIU Hua-ji SHEN Rong-xian TONG Guang-zhi 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2006年第1期1-14,共14页
Classical swine fever (CSF), a list A disease of Office International des Epizooties, is caused by classical swine fever virus (CSFV) belonging to the Flaviviridae family. The well-known lapinized Chinese strain o... Classical swine fever (CSF), a list A disease of Office International des Epizooties, is caused by classical swine fever virus (CSFV) belonging to the Flaviviridae family. The well-known lapinized Chinese strain of CSFV, also known as C-strain, was developed in China in the mid-1950s. In the past half a century, the vaccine has been proved to be safe and immunogenic in pigs of essentially any age. It is of high efficacy, providing immunized animals with broad-spectrum, sometimes lifelong, protection, which is contributed by both cell-mediated immunity and humoral immunity, against essentially all genotypes or subgenotypes of the virus. The maternal antibodies derived from immunized sows can confer solid protection of their offspring from disease; however, they have been proved to inhibit the successful active immunization of C-strain vaccine. The complete genomes of C-strain and dozens of established or field strains have been sequenced and annotated. Recently, the reverse genetics system of C-strain has been developed, resulting in several C- strain-derived candidate marker vaccines. Many countries manage to control or even eradicate CSF with the aid of mass vaccination with C-strain. in spite of these efforts, the eradication of the disease worldwide remains a big challenge and needs to go a long way, and provably still resorts to genetically modified C-strain vaccine. The authors present an overview of the characteristics of the vaccine, which has stood the test of half a century. 展开更多
关键词 classical swine fever classical swine fever virus C-strain vaccine
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Effect of Attenuated Highly Pathogenic Pig Reproductive and Respiratory Syndrome(HP-PRRS) TJM-F92 Strain Vaccine on Immune Antibody Levels against Classical Swine Fever(CSF) and Foot-and-Mouth Disease(FMD) 被引量:1
3
作者 Luo Zhizhong Fu Xiandong Wang Yan 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2016年第3期162-164,共3页
Effects of attenuated highly pathogenic pig reproductive and respiratory syndrome(HP-PRRS)TJM-F92 strain vaccine on immune antibody level against classical swine fever(CSF)and foot-and-mouth disease(FMD)were stu... Effects of attenuated highly pathogenic pig reproductive and respiratory syndrome(HP-PRRS)TJM-F92 strain vaccine on immune antibody level against classical swine fever(CSF)and foot-and-mouth disease(FMD)were studied from October 8 to November 12 in 2014,in order to optimize vaccination program of CSF,HP-PRRS and FMD and to provide scientific guidance for animal disease control and prevention work.The results showed that attenuated HP-PRRS(TJMF92 strain)vaccine had no significant effect on immune antibody level of hog cholera lapinized virus(HCLV,ST passage cell vaccine)attenuated vaccine and FMD-O inactivated vaccines(OZK/93 strain),and single or combined use of three vaccines received good immunization effects. 展开更多
关键词 Attenuated PRRS TJM-F92 strain vaccine classical swine fever Foot-and-mouth disease Antibody level ELISA
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Diagnosis and Control of Classical PRRSV Strain Infection in a Pig Farm
4
作者 Ren Sufang Guo Lihui +4 位作者 Fu Jiangong Zhang Zhaokun Li Xingguang Wu Jiaqiang Zhang Yuyu 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2019年第2期53-55,共3页
The suspected cases of PRRSV in a pig farm of Shandong Province were conducted pathologic autopsy, RT-PCR amplification, and sequencing and analysis of PRRSV N protein gene. The results showed that the homology of the... The suspected cases of PRRSV in a pig farm of Shandong Province were conducted pathologic autopsy, RT-PCR amplification, and sequencing and analysis of PRRSV N protein gene. The results showed that the homology of the nucleotide sequences of protein N was 99.7% between the isolate and the classical strains (VR2332 and SD1), and 93.4% between the isolate and the highly pathogenic strains (JXA1, HuN4, SX-1 and TJM). The results suggested that the virus was classical PRRSV in the pig farm. The research would provide a reference for the diagnosis and targeted therapy of classical PRRSV infection in swine production. 展开更多
关键词 PRRS PRRSV classicAL strain PATHOLOGICAL ANATOMY RT-PCR Sequencing
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Finite Deformation, Finite Strain Nonlinear Dynamics and Dynamic Bifurcation in TVE Solids
5
作者 Karan S. Surana Sri Sai Charan Mathi 《Applied Mathematics》 2023年第12期773-838,共66页
This paper presents the mathematical model consisting of conservation and balance laws (CBL) of classical continuum mechanics (CCM) and the constitutive theories derived using entropy inequality and representation the... This paper presents the mathematical model consisting of conservation and balance laws (CBL) of classical continuum mechanics (CCM) and the constitutive theories derived using entropy inequality and representation theorem for thermoviscoelastic solids (TVES) matter without memory. The CBL and the constitutive theories take into account finite deformation and finite strain deformation physics. This mathematical model is thermodynamically and mathematically consistent and is ideally suited to study nonlinear dynamics of TVES and dynamic bifurcation and is used in the work presented in this paper. The finite element formulations are constructed for obtaining the solution of the initial value problems (IVPs) described by the mathematical models. Both space-time coupled as well as space-time decoupled finite element methods are considered for obtaining solutions of the IVPs. Space-time coupled finite element formulations based on space-time residual functional (STRF) that yield space-time variationally consistent space-time integral forms are considered. This approach ensures unconditional stability of the computations during the entire evolution. In the space-time decoupled finite element method based on Galerkin method with weak form for spatial discretization, the solutions of nonlinear ODEs in time resulting from the decoupling of space and time are obtained using Newmark linear acceleration method. Newton’s linear method is used to obtain converged solution for the nonlinear system of algebraic equations at each time step in the Newmark method. The different aspects of the deformation physics leading to the factors that influence nonlinear dynamic response and dynamic bifurcation are established using the proposed mathematical model, the solution method and their validity is demonstrated through model problem studies presented in this paper. Energy methods and superposition techniques in any form including those used in obtaining solutions are neither advocated nor used in the present work as these are not supported by calculus of variations and mathematical classification of differential operators appearing in nonlinear dynamics. The primary focus of the paper is to address various aspects of the deformation physics in nonlinear dynamics and their influence on dynamic bifurcation phenomenon using mathematical models strictly based on CBL of CCM using reliable unconditionally stable space-time coupled solution methods, which ensure solution accuracy or errors in the calculated solution are always identified. Many model problem studies are presented to further substantiate the concepts presented and discussed in the paper. Investigations presented in this paper are also compared with published works when appropriate. 展开更多
关键词 Thermodynamic Consistency Dynamic Bifurcation Static Bifurcation Nonlinear Formulation Finite strain Finite Deformation Thermoviscoelastic classical Continuum Mechanics Conservation and Balance Laws Nonlinear Damping
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PRRSV高致病性毒株和经典毒株SYBR GreenⅠ实时荧光PCR鉴别方法的建立 被引量:10
6
作者 柴政 李曦 +6 位作者 王小武 符芳 张永欣 肖晶 蔡雪辉 周艳君 宋淑萍 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期140-144,共5页
根据猪生殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株、经典毒株Nsp2基因序列的差异,应用Oligo软件设计了2对特异引物,建立了鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法。用该方法检测JEV、CSFV、FMDV和PRCV均呈阴性,表明该方... 根据猪生殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株、经典毒株Nsp2基因序列的差异,应用Oligo软件设计了2对特异引物,建立了鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法。用该方法检测JEV、CSFV、FMDV和PRCV均呈阴性,表明该方法特异性良好;敏感性试验结果表明,该方法的最低检出量为1 TCID50/0.1 mL;批内、批间重复性试验显示,其变异系数均低于0.3%,具有良好的重复性。应用该方法对人工感染动物进行检测,自感染后第3、5、7、10、142、1 d分别采集全血,检测结果均为阳性。证实,本试验所建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可以快速、准确地鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株。 展开更多
关键词 猪生殖与呼吸综合征病毒 SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR 高致病性毒株 经典毒株
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猪流行性腹泻病毒变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株多重RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用 被引量:5
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作者 秦毅斌 卢冰霞 +8 位作者 段群棚 何颖 李斌 梁家幸 苏乾莲 周英宁 蒋冬福 卢敬专 赵武 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第11期2746-2751,共6页
为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株快速鉴别检测方法,根据Gen Bank中公布的PEDV变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株的S基因和ORF3基因,设计合成2对特异性扩增引物,用以扩增PEDV S基因和ORF3基因,通过目的片段的... 为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株快速鉴别检测方法,根据Gen Bank中公布的PEDV变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株的S基因和ORF3基因,设计合成2对特异性扩增引物,用以扩增PEDV S基因和ORF3基因,通过目的片段的数量和片段大小来判断PEDV的毒株类型;通过对退火温度等反应条件的优化,建立了检测不同PEDV毒株类型的多重RT-PCR鉴别检测方法。结果显示,所建立的多重RT-PCR鉴别检测方法能特异性区分PEDV变异毒株、经典毒株和弱毒疫苗株;PEDV变异毒株扩增出2条目的条带,分别为234 bp的ORF3基因片段和826 bp的S基因片段;PEDV经典毒株扩增出1条目的条带,片段大小为234 bp的ORF3基因片段;而弱毒疫苗株扩增出1条目的条带,片段大小为185 bp的ORF3基因片段;与猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒、猪嵴病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪乙型脑炎病毒、猪细环病毒及猪细小病毒均无交叉反应;敏感性试验显示,该方法能检测到的最低核酸浓度为2.3×10-4ng/μl;且该方法具有良好的重复性。利用该方法对采集自广西部分地区的91份临床腹泻样品进行检测,样品中PEDV阳性样品有64份,其中变异毒株占89.06%(57/64),经典毒株占4.69%(3/64),弱毒疫苗株占6.25%(4/64)。结果表明,该多重RT-PCR鉴别检测方法特异性强、灵敏度高、操作简单,为猪流行性腹泻的流行病学及病原的鉴别诊断研究提供了可供借鉴的技术手段。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 变异毒株 经典毒株 弱毒疫苗株 RT-PCR 鉴别诊断
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猪瘟强毒株与兔化弱毒疫苗株的LAMP鉴别检测 被引量:10
8
作者 张改平 何文博 +5 位作者 王德国 周景明 邓瑞广 郭军庆 祁艳华 王爱萍 《郑州大学学报(理学版)》 CAS 北大核心 2014年第3期85-90,共6页
为了鉴别猪瘟病毒(CSFV)野毒感染和疫苗接种,系统比较分析CSFV标准强毒株、疫苗株、不同基因亚型的野毒株的全基因组序列差异,设计一套分别针对猪瘟强毒与弱毒NS5B基因的环介导等温扩增(LAMP)引物,建立特异性的猪瘟强毒株与疫苗株的LAM... 为了鉴别猪瘟病毒(CSFV)野毒感染和疫苗接种,系统比较分析CSFV标准强毒株、疫苗株、不同基因亚型的野毒株的全基因组序列差异,设计一套分别针对猪瘟强毒与弱毒NS5B基因的环介导等温扩增(LAMP)引物,建立特异性的猪瘟强毒株与疫苗株的LAMP检测方法.LAMP扩增产物用罗丹明B指示剂或者琼脂糖凝胶电泳进行检测.该方法特异性好,比RT-PCR灵敏度高出1 000倍,且重复性稳定性良好,为快速准确地鉴别CSFV野毒感染和疫苗接种提供了有效的方法. 展开更多
关键词 猪瘟强毒株 兔化弱毒疫苗株 环介导等温扩增 鉴别检测
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岩石非线性细观响应中孔隙液体的影响 被引量:8
9
作者 杜赟 席道瑛 +1 位作者 徐松林 宛新林 《岩石力学与工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第1期209-216,共8页
在细观尺度上对孔隙流体对岩石力学性质的影响进行定量化研究。将孔隙流体带来的非线性应变的影响分为经典应变的影响和非经典弹性单元(NCU)对非经典应变的影响。分析低饱和度和高饱和度时微细观机制的作用,以此分别讨论流体对岩石非线... 在细观尺度上对孔隙流体对岩石力学性质的影响进行定量化研究。将孔隙流体带来的非线性应变的影响分为经典应变的影响和非经典弹性单元(NCU)对非经典应变的影响。分析低饱和度和高饱和度时微细观机制的作用,以此分别讨论流体对岩石非线性力学行为和岩石介质宏观刚度的影响。为适应不同饱和度下岩石力学行为,提出一种新的固液相互作用函数关系,对试验数据进行非线性反演,获得不同饱和度时的PM空间图像,分析孔隙流体对PM空间密度(NCU数目)的影响。首次反演杨氏模量、压缩波速度随饱和度变化完整过程。饱和度为0%~20%时,由于液体的激活作用,对于经典部分,动态杨氏模量随饱和度增加而减小;对于非经典部分,随饱和度增大PM空间NCU密度增大,NCU数目增多,非线性增强,杨氏模量下降。当饱和度为20%~80%时,动态杨氏模量不随饱和度变化,PM空间NCU密度也基本保持不变。当饱和度由80%以上增大到全饱和时,杨氏模量、弹性波速度反而随饱和度增加而增大,PM空间NCU数目有所减小,非线性程度下降。饱和岩石的经典和非经典非线性应变比干燥岩石有显著的增长,与模拟的PM空间NCU密度分布结果是一致的。这些数值分析结果与试验结果的规律性基本吻合。该项研究对于储层预测、油藏描述、斜坡附近建筑的安全性、核仓库性能及地球物理反演、资料解释都具有潜在的应用前景。 展开更多
关键词 岩石力学 孔隙液体 细观响应 经典和非经典应变 杨氏模量
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猪瘟兔化弱毒疫苗——半个世纪的回顾 被引量:84
10
作者 仇华吉 童光志 沈荣显 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1675-1685,共11页
猪瘟是一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗(即C株),随后创制了不同的疫苗制造工艺,如细胞培养苗、乳兔组织苗和牛体反应组织苗等。C株是一株非常安全的弱毒疫苗,对各种年龄和品种的... 猪瘟是一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗(即C株),随后创制了不同的疫苗制造工艺,如细胞培养苗、乳兔组织苗和牛体反应组织苗等。C株是一株非常安全的弱毒疫苗,对各种年龄和品种的猪都没有副作用,并且有良好的免疫效力,它能同时诱导体液免疫和细胞免疫应答,对不同基因型的猪瘟病毒株均能提供有效的免疫保护。免疫母猪通过母乳可对仔猪提供被动免疫保护,但过高水平的母源抗体会影响仔猪对C株疫苗的主动免疫应答。目前已经完成了包括C株及其亲本株在内的几十株猪瘟病毒的全基因组序列测定和注释,建立了猪瘟病毒的反向遗传操作系统,初步解析了猪瘟病毒主要基因的结构与功能,并构建了不同的反向遗传操作标记疫苗,赋予了C株疫苗新的生命和内涵。C株疫苗可以用于猪瘟的控制和根除,借助于C株疫苗密集接种和综合控制措施,有关国家有效地控制了猪瘟,甚至消灭了猪瘟。尽管如此,要在全球范围内根除猪瘟,今后依然有漫长的路要走,这可能有赖于对C株进行进一步改造和利用。 展开更多
关键词 猪瘟 猪瘟病毒 猪瘟兔化弱毒疫苗 20世纪50年代 综合控制措施 细胞免疫应答 被动免疫保护 反向遗传操作 回顾 免疫效力
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PRRSV经典株和变异株RT-nPCR鉴别诊断方法的建立 被引量:2
11
作者 朱小甫 吴旭锦 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2016年第1期25-30,共6页
【目的】建立一种能够区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,能够从病料组织、血清或精液中直接进行目的基因检测,达到快速诊断的目的。【方法】根据GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒基因序列,设计... 【目的】建立一种能够区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,能够从病料组织、血清或精液中直接进行目的基因检测,达到快速诊断的目的。【方法】根据GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒基因序列,设计并合成了2对引物,通过改变不同的反应体系和反应条件,建立PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,并通过灵敏性试验、特异性试验、病料组织和血清或精液样品检测,验证建立RT-nPCR方法的适用性。【结果】建立了PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,该方法检测的cDNA含量极限为1.3×10-7 pg/μL;且仅能从PRRSV毒株中扩增到目的条带,从CH-1R经典株扩增出649bp条带,从SXXY/2013变异株扩增出562bp条带,电泳后能清晰区别,而从其他参考毒株中均不能扩增出目的条带。从48份疑似病料组织和血清中能直接检测出31份阳性结果。【结论】建立了一种灵敏度高、特异性好、可直接从病料组织和血清中快速鉴别PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR方法。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 经典株 变异株 诊断方法
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苜蓿多糖对猪瘟兔化弱毒疫苗免疫应答强化作用的研究 被引量:21
12
作者 张世军 王三虎 赵坤 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2003年第10期57-60,共4页
用苜蓿多糖作为猪瘟兔化弱毒疫苗的强化剂 ,对 6 0日龄体重 1 8~ 2 0kg的仔猪进行免疫试验。结果表明 ,苜蓿多糖可使猪外周血液的B淋巴细胞增多 ,IgG水平提高 ,可显著增强猪瘟疫苗的免疫效果。
关键词 苜蓿多糖 猪瘟兔化弱毒疫苗 免疫应答 B淋巴细胞 免疫增强剂
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含绿色荧光蛋白基因和猪瘟E_2基因的伪狂犬病毒Bartha-K_(61)株TK基因缺失转移载体的构建 被引量:11
13
作者 范伟兴 张雪莲 +2 位作者 魏荣 赵宏坤 陈溥言 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期3-8,共6页
提取伪狂犬病毒 ( PRV) Bartha- K6 1 株基因组 DNA为 PCR扩增模板 ,并根据 Genbank已发表的 PRV Kaplan株 UL区 UL2 5、U L2 4、U L2 3、U L2 2基因序列 ,选择保守序列设计了两对引物 ,这两对引物分别扩增出位于 UL2 3( TK)两侧 (含部... 提取伪狂犬病毒 ( PRV) Bartha- K6 1 株基因组 DNA为 PCR扩增模板 ,并根据 Genbank已发表的 PRV Kaplan株 UL区 UL2 5、U L2 4、U L2 3、U L2 2基因序列 ,选择保守序列设计了两对引物 ,这两对引物分别扩增出位于 UL2 3( TK)两侧 (含部分TK基因 )的可用于同源重组的左臂片段 ( L )和右臂片段 ( R) ,L包括部分 UL 2 5、全部 UL 2 4、部分 TK,R包括部分 TK及部分U L2 2 ,L 和 R的拼接片段中 TK基因内部缺失 2 70个核苷酸。将 L 片段和 R片段克隆于 p Bluescript M13-载体上 ,获得p SKL R;再将绿色荧光蛋白载体 p EGFP- C1上含 GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入 p SKL R的 L 片段和 R片段之间构成转移载体 p SKL KG;又将猪瘟病毒 1.2 3 kb的 E2 ( CSFV- E2 )基因片段插入 p SKL RG的多克隆位点的 Bg1 与 Pst 之间获得转移载体 p SKL 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白基因 伪狂犬病 伪狂犬病毒Bartha-K61株 TK基因 EGFP基因 猪瘟病毒E2基因 基因缺失 转移载体 疫苗
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功能梯度经典梁损伤识别模态应变能变化率法的抗噪音性能研究 被引量:6
14
作者 黄立新 岳世燕 +1 位作者 胡中明 杨真真 《玻璃钢/复合材料》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期35-39,共5页
针对功能梯度经典梁,研究损伤识别的模态应变能变化率方法的抗噪音性能。基于有限元商用软件ABAQUS计算平台,计算功能梯度经典梁自由振动模态参数,并加入一定水平的噪音。用这些含噪音的模态参数仿真实际测量值。模态参数测量噪音模型... 针对功能梯度经典梁,研究损伤识别的模态应变能变化率方法的抗噪音性能。基于有限元商用软件ABAQUS计算平台,计算功能梯度经典梁自由振动模态参数,并加入一定水平的噪音。用这些含噪音的模态参数仿真实际测量值。模态参数测量噪音模型采用高斯分布模型,并比较了计算噪音水平的三种计算方法。通过数值算例,分析测量噪音对功能梯度经典梁损伤识别的影响。从损伤识别结果可以发现,在1%、2%和5%的噪音水平情况下,均能很好地识别出梁的损伤单元。这表明功能梯度经典梁损伤识别的模态应变能变化率方法具有良好的抗噪音性能。 展开更多
关键词 功能梯度经典梁 模态应变能变化率 损伤识别 抗噪音性能
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猪瘟病毒野毒株与疫苗株双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:10
15
作者 王伟 符芳 +3 位作者 陈欣 李雪松 李海忠 李曦 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期854-857,共4页
为建立猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与野毒株的快速鉴别检测方法,本研究根据GenBank登录的CSFV C株与野毒株的E2基因序列差异,设计2对特异性引物,建立了同时检测C株与野毒株的双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。应用该方法对CSF... 为建立猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与野毒株的快速鉴别检测方法,本研究根据GenBank登录的CSFV C株与野毒株的E2基因序列差异,设计2对特异性引物,建立了同时检测C株与野毒株的双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。应用该方法对CSFV野毒和疫苗株的最低检出量为10拷贝;检测牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型4种病毒均呈阴性;批内、批间重复试验的变异系数均低于3%。应用该方法检测从黑龙江省各地区猪场采集的600份样品,结果表明野毒株的阳性率为30.5%。该方法可应用于CSFV野毒株和C株的鉴别检测。 展开更多
关键词 SYBRGreenⅠ实时荧光PCR 猪瘟病毒野毒株 C株
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猪瘟单克隆抗体的制备及ACI-ELISA检测猪瘟病毒的研究 被引量:10
16
作者 陆芹章 罗廷荣 +2 位作者 温和心 蒋毅立 谢琪辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期368-372,共5页
本研究用猪瘟石门毒(CSFV-Shimen)免疫BALB/C小鼠,按常规单克隆抗体(McAb)技术方法制作,最终获得4株McAb,分别命名为AC9、CF8、DG5和EC9,4株McAb与基因工程CSFV E2蛋白反应结果表明:AC9、CF8和EC9是抗CSFv E2蛋白的McAb。用AC9和CF8McAb... 本研究用猪瘟石门毒(CSFV-Shimen)免疫BALB/C小鼠,按常规单克隆抗体(McAb)技术方法制作,最终获得4株McAb,分别命名为AC9、CF8、DG5和EC9,4株McAb与基因工程CSFV E2蛋白反应结果表明:AC9、CF8和EC9是抗CSFv E2蛋白的McAb。用AC9和CF8McAb对CSFV进行抗原捕获间接ELISA试验(ACI-ELISA),通过一元McAb和二元McAb CAI-ELISA试验的比较,结果表明AC9与CF8两种McAb有协同作用,其捕获CSFV的能力比一元McAb显著提高。方阵试验结果表明:McAb和血清多抗(PcAb)的最佳工作稀释度分别为1:400和1:200。特异性试验和敏感性试验结果显示本法特异性强,敏感性高。最后用ACI-ELISA与PCR对30份病料的检测结果比较,表明ACI-ELISA与PCR检测结果相符。上述结果说明本研究所获得AC9和CF8可用作猪瘟诊断试剂盒的研制,是检测CSFV的有效方法。 展开更多
关键词 猪瘟石门毒 单克隆抗体 制备 抗原捕获间接ELISA试验
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中国猪瘟C-株(脾淋毒)全长cDNA的分子克隆 被引量:8
17
作者 胡建和 刘湘涛 +4 位作者 张彦明 韩雪清 刘在新 张永国 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期490-493,共4页
应用RT PCR、NestedPCR和Half nestedPCR技术从实验感染兔脾组织的总RNA中得到了覆盖猪瘟病毒(CSFV)C 株全基因组的7个cDNA重叠片段,分别克隆于pMD18 T或pGEM TEasy载体后进行测序。运用T A克隆和多片段一步连接法,将cDNA重叠片段F1、F2... 应用RT PCR、NestedPCR和Half nestedPCR技术从实验感染兔脾组织的总RNA中得到了覆盖猪瘟病毒(CSFV)C 株全基因组的7个cDNA重叠片段,分别克隆于pMD18 T或pGEM TEasy载体后进行测序。运用T A克隆和多片段一步连接法,将cDNA重叠片段F1、F2、F3、F4与F5、F6、F7分别克隆到pGEM 5Zf(+)载体后,得到两个半长cDNA亚克隆重组质粒pGEM 5Zf(+)/F1 4和pGEM 5Zf(+)/F5 7,再将两个半长cDNA重叠片段连接并克隆到pGEM 5Zf(+)载体,构建出了CSFVC 株全长cDNA重组质粒pGEM 5Zf(+)/F1 7。全长cDNA的成功构建为进一步研究CSFV分子生物学提供了良好的工具。 展开更多
关键词 中国 猪瘟 C-株 脾淋毒 CDNA 分子克隆 兔脾组织 RNA 克隆 多片段一步连接法
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猪瘟病毒C株全长cDNA感染性克隆的构建及病毒拯救 被引量:10
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作者 邹兴启 赵启祖 +5 位作者 范运峰 朱元源 王琴 徐璐 范学政 宁宜宝 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期409-416,共8页
【目的】建立猪瘟病毒研究技术平台,为进一步研究猪瘟病毒C株在细胞中的增殖机制及猪瘟病毒标记疫苗奠定基础。【方法】本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经RT-PCR扩增获得涵盖全长的6个片段,用合适的酶切位点连接,成功构建了C株全长感染... 【目的】建立猪瘟病毒研究技术平台,为进一步研究猪瘟病毒C株在细胞中的增殖机制及猪瘟病毒标记疫苗奠定基础。【方法】本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经RT-PCR扩增获得涵盖全长的6个片段,用合适的酶切位点连接,成功构建了C株全长感染性克隆pAC-CS。体外转录得到RNA,然后将其分别转染BHK-21和SK6细胞。拯救的病毒通过上清传代(常规病毒传代)和带毒细胞传毒繁殖。【结果】通过RT-PCR、免疫过氧化酶单层细胞试验和兔体发热试验检测,表明病毒拯救成功。经比较以电转的方式转染SK6的效果较好。通过带毒细胞传代,至12代时病毒滴度稳定达104TCID50.mL-1,而上清传代至第3代时用免疫过氧化酶单层细胞试验(IPMA)不能检测出病毒。【结论】成功构建了猪瘟病毒C株感染性克隆;拯救C株时以SK6细胞电转较好;带毒细胞传代培养C株有利于获得较高滴度的病毒。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 C株 感染性克隆构建 拯救方法 传代
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猪瘟病毒低温诱变疫苗Thiverval株感染性克隆的构建及病毒拯救 被引量:5
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作者 范运峰 赵启祖 +5 位作者 赵耘 邹兴启 徐璐 张仲秋 王琴 宁宜宝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1420-1425,共6页
采用高保真DNA聚合酶,分7个片段扩增猪瘟病毒(CSFV)Thiverval株全基因组序列,克隆至pMD18-T载体并测序。经适当的连接策略将各片段连接克隆至低拷贝载体质粒pAC/F101,同时对病毒基因组5′和3′末端进行修饰,构建出含有T7启动子、榔头状(... 采用高保真DNA聚合酶,分7个片段扩增猪瘟病毒(CSFV)Thiverval株全基因组序列,克隆至pMD18-T载体并测序。经适当的连接策略将各片段连接克隆至低拷贝载体质粒pAC/F101,同时对病毒基因组5′和3′末端进行修饰,构建出含有T7启动子、榔头状(HH)核酶基因、CSFV Thiverval全基因组、丁型肝炎病毒(HDV)核酶基因和T7终止子的重组质粒pAC/F101/T1-7。利用T7 RNA聚合酶将线性化重组质粒pAC/F101/T1-7体外转录成基因组RNA,再使用脂质体转染将体外转录RNA转染PK-15细胞。通过传代、RT-PCR、免疫过氧化物酶细胞单层试验鉴定,表明成功的从感染性克隆拯救出活病毒粒子。猪瘟病毒低温诱变疫苗"Thiverval"株感染性克隆的构建及病毒的成功拯救,为进一步研究CSFV疫苗株的致弱机制提供了重要工具。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 疫苗Thiverval株 感染性克隆 病毒拯救
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陕西省猪瘟病毒流行毒株E2基因变异分析初报 被引量:2
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作者 马秋明 张建安 +3 位作者 王强 朱小甫 王文江 何维明 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第5期19-23,共5页
根据GenBank公布的猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)Shimen株全基因序列,设计并合成2对引物,用RT—PCR方法对采自陕西省部分地区的30份CSF病料中,CSFV流行毒株的E2基因进行了扩增,并将其克隆入pMD18-T载体,转化感受... 根据GenBank公布的猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)Shimen株全基因序列,设计并合成2对引物,用RT—PCR方法对采自陕西省部分地区的30份CSF病料中,CSFV流行毒株的E2基因进行了扩增,并将其克隆入pMD18-T载体,转化感受态大肠杆菌DH5α。提取pMD-18T-E2重组质粒,进行BamHⅠ、HindⅢ双酶切鉴定,并对阳性质粒进行测序,将测序结果与HCLV疫苗株和shimen株E2基因及E2蛋白进行序列分析。结果表明,从30份病料中共扩增到10株CSFV流行毒株的E2基因;扩增的10株陕西CSFV流行毒株E2基因同源性为92.3%~99.6%,与Shimen株及HCLV疫苗株的同源性为75.0%~79.4%;10株CSFV流行株E2蛋白的同源性为90.0%~100%,与Shimen株和HCLV疫苗株E2蛋白的同源性分别为78.9%~84.4%和77.8%~83.3%。说明所扩增的10株陕西CSFV流行毒株的E2基因发生了较大变异。 展开更多
关键词 猪瘟 流行毒株 E2基因 序列分析
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