基于Cleaved caspase-9研究丹酚酸B对肝纤维化细胞凋亡的影响

目的从凋亡角度,观察丹酚酸B对体内外肝纤维化细胞的影响及对凋亡蛋白cleaved caspase-9的影响。方法采用二乙基亚硝胺诱导小鼠肝纤维化模型,共造模12周;体外采用(25、50、100μmol·L^(-1))丹酚酸B作用于经TGF-β1刺激的HSC-T6细胞。HE染色检测病理学改变,并确定纤维化病变区域; Hoechst 33258荧光染色法观察纤维化区域细胞凋亡情况; Annexin V-FITC/PI检测凋亡率; Western blot法检测纤维化组织和HSC-T6细胞中cleaved caspase-9的表达。结果 HE染色结果提示12周为小鼠肝纤维化时期,丹酚酸B低、高剂量组未形成假小叶,纤维化程度均轻于模型组; Hoechst 33258染色显示,与模型组相比,丹酚酸B低、高剂量能够明显促进纤维化区域细胞凋亡; Annexin V-FITC/PI结果显示,丹酚酸B促进TGF-β1刺激的HSC-T6凋亡;Western blot结果提示,与模型组比较,丹酚酸B组cleaved caspase-9表达水平明显升高;与TGF-β1组比较,丹酚酸B50μmol·L^(-1)组cleaved caspase-9表达明显增加。结论丹酚酸B能够明显促进体内外肝纤维化细胞凋亡,其促凋亡进机制可能与上调cleaved caspase-9有关。

唾液miR-15b与口腔鳞状细胞癌cleaved caspase-3表达及临床意义

目的 分析口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者唾液miR-15b和组织cleaved caspase-3表达及与预后的关系。方法 收集2016年5月至2020年6月期间我院收治的OSCC患者154例(OSCC组),另收集103例健康志愿者作为对照组。分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)及免疫组化染色法检测唾液miR-15b水平及组织cleaved caspase-3表达。受试者工作特征(ROC)曲线分析唾液miR-15b表达诊断OSCC的效能。分析唾液miR-15b表达与口腔鳞癌临床病理特征的关系,采用多因素Cox回归分析影响OSCC预后的因素。结果 OSCC患者唾液miR-15b水平显著低于对照组(0.72±0.33 vs. 1.00±0.23,P<0.001)。ROC曲线分析唾液miR-15b水平诊断OSCC的曲线下面积为0.760(0.703~0.817)。与癌旁组织比较,OSCC组织中caspase-3、cleaved caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.001)。经Spearman相关性分析,OSCC患者的唾液miR-15b水平与OSCC组织cleaved caspase-3蛋白表达呈负相关(r=-0.321,P<0.001)。唾液miR-15b表达与肿瘤直径和预后有关(P<0.05)。miR-15b低表达组患者5年DFS率和5年OS率分别为28.57%和44.16%,高表达组患者5年DFS率和5年OS率分别为62.34%和81.82%,差异有统计学意义(P<0.001)。多因素Cox风险比例回归模型结果显示TNM分期、根治性手术、唾液miR-15b水平均是影响OSCC患者OS的独立预后因素(P<0.05)。结论 OSCC患者唾液miR-15b水平与组织cleaved caspase-3相关,可作为预测OSCC患者预后的生物标志物。

针刺调控自噬蛋白Beclin-1对脑缺血再灌注损伤大鼠海马区Caspase-9的影响

目的 探讨针刺调控细胞自噬对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠海马区细胞凋亡的影响及机制。方法 110只SD大鼠随机分为正常组22只、假手术组22只和造模组66只,造模组使用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,成功后随机均分为模型组、针刺组、药物组,每组各22只。针刺组捆绑并针刺“大椎”“百会”“人中”,药物组注射依达拉奉。Garcia神经功能评分评定大鼠神经功能,TTC染色观察脑梗死情况,透射电镜观察海马区自噬小体,TUNEL检测患侧脑组织细胞凋亡率,免疫组化检测海马区半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达,Western blot检测海马区苄氯素-1 (Beclin-1)、Caspase-9表达。结果 干预前后与正常组比较,假手术组各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。干预前,与假手术组比较,造模组神经功能评分下降(P<0.01)。针刺72 h后,与假手术组比较,模型组神经功能评分下降(P<0.01)、脑梗死面积比上升(P<0.01)、缺血侧脑组织细胞凋亡率、海马区Caspase-9、Caspase-3表达量增加(P<0.01)、Beclin-1表达量下降(P<0.05);与模型组比较,药物组、针刺组神经功能评分显著上升(P<0.01)、梗死面积比缩小(P<0.01)、患侧脑组织细胞凋亡率及海马区Caspase-9、Caspase-3下降(P<0.01)、Beclin-1表达量上升(P<0.05)。透射电镜下模型组细胞器肿胀,大多数线粒体变大,见少量溶酶体;针刺组、药物组神经细胞轻度水肿,线粒体轻度肿胀,可见初级溶酶体、自噬小体、自噬溶酶体存在。结论 针刺可调控大鼠自噬关键蛋白抑制CIRI后细胞凋亡,其机制可能与调整自噬影响Caspase-9表达相关。

针康法对脑缺血大鼠缺血半暗区细胞凋亡及X连锁凋亡抑制蛋白和cleaved-caspase-9蛋白表达的影响

目的观察针康法对脑缺血大鼠缺血半暗区细胞凋亡及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和cleaved-caspase-9蛋白表达的影响。方法选取180只雄性Sprague-Dawley大鼠,通过随机数字表法随机分为假手术组、模型组、针刺组、康复组和针康组。每组再分为3 d、7 d和14 d三个亚组(n=12)。采用改良Longa线栓法进行造模,假手术组和模型组不予治疗,针刺组进行头穴丛刺治疗,康复组进行跑台康复训练,针康组进行针康法治疗。术后各时间点对大鼠进行改良神经功能缺损评分(mNSS)后取材,采用TUNEL染色观察大鼠脑缺血半暗区细胞凋亡率,Western blotting检测脑缺血半暗区XIAP和cleaved-caspase-9蛋白表达。结果术后各时间点,与模型组比较,各治疗组mNSS评分均降低(P<0.05),细胞凋亡率均降低(P<0.05),XIAP蛋白表达上调(P<0.05),cleaved-caspase-9蛋白表达下调(P<0.05);与针刺组、康复组比较,针康组细胞凋亡率进一步降低(P<0.05),XIAP蛋白表达进一步上调(P<0.05)。术后7 d、14 d,针康组mNSS评分进一步降低(P<0.05),针康组cleaved-caspase-9蛋白表达进一步下调(P<0.05)。结论针康法能降低脑缺血大鼠神经功能缺损,优于单独的头穴丛刺和康复训练,其机制可能与促进XIAP蛋白表达,抑制caspase-9蛋白活化,从而减少细胞凋亡有关。

参芪益心方对异丙肾上腺素致心肌损伤大鼠IRE1、Cleaved Caspase-3的影响及作用机制研究

目的:探讨异丙肾上腺素诱导的心肌损伤及参芪益心方对肌醇需求酶1(IRE1)、裂解凋亡蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)的影响及作用机制研究。方法:将40只SD大鼠随机分为对照组、异丙肾上腺素组、曲美他嗪组、参芪益心方低剂量组和参芪益心方高剂量组。除对照组外,其余各组给予颈背部皮下注射异丙肾上腺素建模,实验连续2周后,对照组给予等量生理盐水,曲美他嗪组给予曲美他嗪混悬液每日5 mg/kg,参芪益心方低剂量组、高剂量组分别给予参芪益心方水煎剂每日10 g/kg、20 g/kg,对照组和异丙肾上腺素组给予等量生理盐水灌胃,实验连续2周。分别在实验给药2周末、4周末进行心电图、超声心动图检查。实验给药4周末苏木精-伊红(HE)染色观察各组心肌组织病理学改变,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组心肌组织IRE1、Cleaved Caspase-3蛋白水平。结果:实验4周末,异丙肾上腺素组q波振幅加深、ST段抬高,且较对照组心率明显增快(P<0.05);曲美他嗪组q波振幅减小,参芪益心方低剂量组ST段抬高幅度减小;参芪益心方高剂量组ST段位于等电位线上,无明显偏移,参芪益心方治疗组相比异丙肾上腺素组心率明显降低(P<0.05)。实验4周末,与对照组比较,异丙肾上腺素组大鼠左室前壁舒张末厚度(Dist A)、左室后壁舒张末厚度(Dist C)减小,舒张末心室内径(Dist B)、收缩期心室内径(Dist D)增加,左室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)明显减低;心肌组织IRE1、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.001)。与异丙肾上腺素组比较,各治疗组大鼠在药物干预后各项指标均有改善(P<0.05),且参芪益心方高剂量组优于参芪益心方低剂量组(P<0.05)。与异丙肾上腺素组比较,曲美他嗪组心肌间质少量炎性细胞浸润,心肌纤维轻度肿胀;参芪益心方低剂量组和参芪益心方高剂量组纤维排列相对规则,断裂与空泡变性减少,并且参芪益心方高剂量组优于参芪益心方低剂量组。结论:内质网应激参与异丙肾上腺素诱导的心肌损伤,参芪益心方能够明显降低内质网相关因子IRE1、Cleaved Caspase-3水平,改善心肌损伤,其机制可能与抑制内质网应激的启动和凋亡信号通路有关,且高剂量治疗效果更明显。

乙型肝炎病毒感染患者PBMC表面PD-1、Caspase-9在不同病情阶段中临床表达意义

目的探究乙型肝炎患者不同阶段的外周血单个核细胞(PBMC)表面程序性死亡受体-1(PD-1)、半胱氨酸天冬氨酸酶-9(Caspase-9)水平,寻找其临床表达意义。方法选取湘潭市中心医院感染性疾病与肝病科2020年3月至2022年9月进行治疗的224例乙型肝炎患者,根据其病情阶段将所有患者分成乙型肝炎轻度组(n=83)、乙型肝炎中度组(n=76)和乙型肝炎重度组(n=65)。另取同期肝癌患者21例作为肝癌组,同期健康体检人员70例归入健康组。比较各组乙型肝炎患者肝功能指标,PBMC表面PD-1、Caspase-9水平,统计分析不同病情阶段与PBMC表面PD-1、Caspase-9水平的关系以及其对于病情阶段的预测价值。结果乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组患者以及肝癌患者的谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乙型肝炎DNA(HBV-DNA)都显著高于健康组,乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组和肝癌组AST、ALT依次升高,并且各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组患者以及肝癌组患者PBMC表面PD-1、Caspase-9水平明显高于健康组(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组和肝癌组Caspase-9水平依次降低,各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎重度组和肝癌组PBMC表面PD-1依次升高,各组差异有统计学意义(P<0.05);中度组PD-1和轻度组差异无统计学意义(P>0.05)。PBMC表面PD-1与AST、ALT呈正相关,与HBV-DNA呈负相关,而Caspase-9水平与AST、ALT呈负相关,与HBV-DNA呈正相关,PBMC表面PD-1、Caspase-9水平联合检测重度乙型肝炎发展为肝癌的AUC值为0.911,敏感度为90.31%,特异度为89.63%。结论乙型肝炎患者不同阶段的PBMC表面PD-1、Caspase-9水平有显著差异,且两者表达水平与肝功能指标存在相关性,进行PD-1、Caspase-9的联合检测可以对重度乙型肝炎发展为肝癌进行预测。

温针灸对膝骨关节炎模型大鼠软骨组织Caspase-3、Caspase-9 mRNA转录水平的影响

目的 分析温针灸对膝骨关节炎(KOA)模型大鼠软骨组织Caspase-3、Caspase-9 mRNA转录水平的影响,探讨温针灸治疗KOA的可能作用机制。方法 将24只8周龄SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组与温针灸组,每组8只。模型组与温针灸组采用4%木瓜蛋白酶注射法建立KOA模型,空白组不做任何处理,当大鼠出现膝关节肿大,局部刺激有疼痛反应且Lequesne MG行为学评分≥3分时,提示造模成功。造模成功后温针灸组取双侧内膝眼、犊鼻穴,以毫针直刺,深度约5 mm,将艾段点燃放置于针柄末端,共灸2壮,留针20 min;空白组与模型组同等抓取固定20 min,1次/d,不做任何治疗。3组每周均干预6 d,休息1 d,共干预2周。干预后采用Lequesne MG行为学评分评估3组大鼠行为学表现,HE染色法及番红-固绿染色法观察3组大鼠膝关节软骨组织形态变化,Mankin’s评分评估3组大鼠软骨退变程度,TUNEL染色法观察3组大鼠膝关节软骨细胞凋亡率,qPCR检测3组大鼠膝关节软骨组织Caspase-3、Caspase-9 mRNA转录水平。结果 与空白组比较,模型组Lequesne MG行为学评分明显升高(P<0.05);HE染色结果显示膝关节软骨组织各层结构不清,表层出现缺损、裂隙,软骨细胞数量弥漫性增多或局部减少且软骨细胞排列紊乱;番红-固绿染色结果显示软骨基质番红染色不均,固绿染色范围增加,潮线不清;Mankin’s评分升高(P<0.05),膝关节软骨组织细胞凋亡率升高(P<0.05),Caspase-3mRNA转录水平无明显变化(P>0.05),Caspase-9 mRNA转录水平升高(P<0.05)。与模型组比较,温针灸组Lequesne MG行为学评分降低(P<0.05),HE染色结果显示膝关节软骨组织表层较为平整,软骨细胞数量弥漫性增多且排列不规则,但优于模型组;番红-固绿染色结果显示软骨基质番红染色未见明显异常,潮线清晰,Mankin’s评分下降(P<0.05),膝关节软骨细胞凋亡率下降(P<0.05),Caspase-3 mRNA转录水平降低不明显(P>0.05),Caspase-9 mRNA转录水平降低(P<0.05)。结论 温针灸能够有效保护膝关节功能,抑制膝关节软骨细胞的凋亡,延缓KOA软骨退变,其机制可能与调控凋亡因子Caspase-9 mRNA转录水平有关。

生长激素对大鼠心肌缺血/再灌注后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3 Cleaved caspase-3蛋白表达的影响

目的研究生长激素(Growth hormone,GH)对大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia reperfusion,I/R)后心肌细胞凋亡及相关基因Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达的影响。方法24只大鼠随机分为三组,假手术组(sham-operated group,n=8,仅手术24h)、心肌缺血/再灌注(I/R)组(n=8)、GH组(n=8),后两组均缺血30min,再灌注24h,GH组于建立模型前7d每天给予人重组生长激素(reconbination human growth hormone,rhGH)针剂皮下注射(1U/kg体质量),其他二组等量生理盐水注射。以TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,DAB免疫组化法检测心肌细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达并进行心肌组织病理学检查。结果大鼠心肌I/R24h后心肌细胞凋亡指数明显上升(对照于假手术组,P<0.05),心肌细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达呈阳性染色指数明显升高(P<0.05),心肌病理检查见心肌缺血区呈大小不一的坏死灶,缺血心肌间有炎症细胞浸润,心肌排列不整齐(HE染色),而GH组心肌细胞凋亡率及心肌细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达呈阳性染色指数明显好于I/R组(P<0.05),心肌细胞炎症细胞也明显减少,坏死灶也少于I/R组。结论GH可以减少心肌I/R后心肌细胞凋亡及细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3染色阳性指数,说明GH对I/R后的心肌具有保护作用。

癫痫大鼠海马硫氧还蛋白还原酶活性及cleaved caspase-3表达检测

目的研究海人酸诱导癫痫大鼠海马组织硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性及cleaved caspase-3表达变化。方法 Sprague-Dawley大鼠随机分为癫痫对照组(NS组)和癫痫组(KA组)。采用脑室注射海人酸制作大鼠癫痫模型。海人酸注射6h取海马组织匀浆,应用5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)还原法对海马TrxR活性进行测定,采用western blotting法检测cleaved caspase-3表达。结果 NS组、KA组TrxR活性分别为:(71±19)、(116±40)U/mg;KA组cleaved caspase-3的表达较NS组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论癫痫大鼠海马组织TrxR活性明显增加,引起caspase-3裂解,导致神经元凋亡。

Livin、cleaved caspase-3在尖锐湿疣中的表达

目的:确定livin和cleaved caspase-3在尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法检测livin和cleaved caspase-3在34例CA组织和15例正常皮肤组织中的表达。结果:正常皮肤中livin与cleaved caspase-3均无表达,CA组织中二者表达的阳性率分别为82.4%和38.2%;两种蛋白在CA组织中的表达呈负相关(r=-5.25,P<0.001)。结论:Livin抑制caspase-3的激活,两者共同参与CA的发病过程,可能与CA的发生、发展相关。

基于PI3K/Akt/caspase-9信号通路研究归芪白术方联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠胃癌细胞凋亡的影响

目的探讨归芪白术方联合奥沙利铂通过PI3K/Akt/caspase-9通路对荷瘤小鼠的抑瘤作用及细胞凋亡的机制。方法建立荷瘤模型,随机分模型组、奥沙利铂组(10 mg·kg^(-1))、奥沙利铂+归芪白术方高、中、低剂量组(17.68、8.84、4.42 g·kg^(-1));末次给药后切除移植瘤,计算抑制率;苏木精-伊红染色法(HE)观察瘤组织病理改变;免疫组化法(IHC)检测p-PI3K、p-Akt、caspase-9、caspase-3表达;免疫印迹法(Western blot)检测Bax、Bcl-2及PI3K/Akt/caspase-9通路表达情况。结果各用药组瘤重较模型组降低(P<0.01);与奥沙利铂组比,奥沙利铂+归芪白术方高、中剂量组瘤重降低(P<0.05,P<0.01);模型组肿瘤细胞密集,未见组织坏死区;各用药组肿瘤细胞减少,有明显的组织坏死区和广泛炎性细胞浸润;与模型组比,各给药组p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白下降,而caspase-9、cleaved-caspase-9、caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax蛋白升高;与奥沙利铂组比,奥沙利铂+归芪白术方高剂量组p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白下降(P<0.05,P<0.01),caspase-9、cleaved-caspase-9、caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax升高(P<0.05,P<0.01);奥沙利铂+归芪白术方中剂量组p-PI3K、p-Akt蛋白下降(P<0.05),cleaved-caspase-9和Bax含量升高(P<0.05)。结论归芪白术方可提高奥沙利铂抑瘤作用,促进胃癌细胞凋亡,其机制可能与PI3K/Akt/caspase-9信号通路有关。

促红细胞生成素对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及对cleaved Caspase-3蛋白表达的影响

目的观察促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌细胞的抗凋亡作用及对活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达的影响。方法将36只雄性成年SD大鼠随机分为3组,分别为假手术(Sham)组(n=12)、EPO组(n=12)和对照(Control)组(n=12);其中EPO组和Control组大鼠使用腹主动脉缩窄术建立慢性心力衰竭模型,术后第8周EPO组经腹腔注射3 000 U/kg EPO,3次/周,连续4周;Sham组、Control组经腹腔注射等量等次0.9%氯化钠溶液。术后第4周、8周、12周行超声心动图检测大鼠心功能。术后第12周末全部大鼠禁食24 h后处死,取心肌组织切片采用苏木精-伊红(HE)染色法观察心肌组织细胞形态,采用Tunel法观察心肌细胞凋亡及计算凋亡指数(apoptosis index,AI);采用Western blot法检测心肌cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果超声心动图结果显示,造模大鼠术后第4周时出现心室肥厚,术后第8周时出现左心室射血功能减退;EPO组干预4周后较Control组左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)明显升高(P<0.05),收缩末期室间隔厚度(IVSs)、收缩末期左心室后壁厚度(LVPWs)、舒张末期室间隔厚度(IVSd)、舒张末期左心室后壁厚度(LVPWd)明显降低(P<0.05)。EPO组AI相比Control组显著降低(23.87%±1.45%vs.35.58%±2.81%,P<0.01);与Sham组比较,Control组cleaved Caspase-3 OD值明显增加(0.3 145±0.0 308 vs.0.9 007±0.0 339,P<0.01);与EPO组相比,Control组减少(0.4 893±0.0 683 vs.0.9 007±0.0 339,P<0.01),差异均有统计学意义。结论 EPO可明显改善慢性心力衰竭大鼠的心功能,减少心肌细胞凋亡,对心肌具有保护作用,其机制可能与下调凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3蛋白表达相关。

Bcl-2和Caspase-9对儿童癫痫持续状态近期预后的预测价值

目的探讨血清B细胞淋巴瘤相关蛋白-2(Bcl-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)对儿童癫痫持续状态(SE)近期预后的预测价值。方法选择SE患儿62例为SE组,选择同期体检健康儿童62例为对照组;按照预后将SE患儿分为预后不良组和预后良好组。癫痫持续状态严重程度量表(STESS)评估SE患儿SE严重程度。ELISA检测各组血清Bcl-2和Caspase-9水平。结果SE组Bcl-2和Caspase-9水平高于对照组(P<0.05)。预后不良组和预后良好组STESS评分、Bcl-2和Caspase-9水平比较,差异有显著性(P<0.05)。STESS评分、Bcl-2和Caspase-9是影响SE患儿近期预后的独立影响因素(P<0.05);入院血清Bcl-2和Caspase-9联合检测对SE患者近期预后具有较好的预测效能(P<0.05)。结论血清Bcl-2和Caspase-9是SE患儿近期预后的有效预测指标。

酒精性心肌病大鼠模型中凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达与细胞凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3表达关系研究

目的:分析酒精性心肌病(ACM)大鼠模型中凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的表达情况及与细胞凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3表达量变化的相关性。方法:选用2周龄的健康雄性SD大鼠9只,随机分为三组:(1)正常对照组(Blank组);(2)酒精性心肌病组(ACM组);(3)酒精性心肌病+shRNA干预组(ACM+shRNA组),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)分别在基因及蛋白水平检测LOX-1、Bax、Cleaved caspase-3的表达量并采用Pearson检验分析其相关性。结果:与Blank组相比,ACM组心肌组织中LOX-1、Bax、Cleaved caspase-3的表达量显著增加(P<0.01);与ACM组比较,ACM+shRNA组心肌组织中LOX-1、Bax、Cleaved caspase-3的表达量明显减少(均P<0.01);相关性分析提示LOX-1的表达量与Bax、Cleaved caspase-3的表达量呈正相关(r=0.323、0.370,均P<0.05)。结论:酒精性心肌病大鼠模型心肌组织中LOX-1的表达量升高,且与Bax、Cleaved caspase-3的表达量呈正相关;LOX-1可能通过上调Bax、Cleaved caspase-3的表达参与酒精诱导心肌细胞凋亡的过程。

Caspase-9蛋白在亚慢性砷染毒大鼠睾丸间质细胞中的表达研究

[目的]探讨亚慢性砷染毒对大鼠睾丸间质细胞Caspase-9蛋白表达的影响。[方法]将40只健康成年清洁级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为对照组以及低、中、高剂量染毒组,每组10只。采用自由饮水方式进行染毒,低、中、高剂量染毒组亚砷酸钠的染毒剂量分别为2.4、12、60 mg/L,对照组给予生理盐水,染毒试验持续14周。染毒试验结束后,检测大鼠外周血白细胞数量;采用ELISA法检测大鼠血清TNF-α及IL-1的浓度;利用透射电镜观察大鼠精子的超微结构;应用免疫组化法检测大鼠睾丸间质细胞Caspase-9蛋白的表达定位及表达水平。[结果]与对照组相比,中、高剂量染毒组大鼠血清中TNF-α、IL-1浓度及白细胞计数均显著(P<0.05)升高。透射电镜下,对照组精子顶体结构完整,厚度及染色均匀;低剂量染毒组可见精子胞膜肿胀,核染色质较均匀;中剂量染毒组精子顶体与核分离,胞膜肿胀;高剂量染毒组精子尾部中断,轴丝排列紊乱。免疫组化法分析表明,Caspase-9蛋白主要表达于睾丸间质细胞的细胞质,表达信号呈棕褐色;与对照组相比,各剂量染毒组大鼠睾丸组织内Caspase-9蛋白的表达水平均显著(P<0.05)升高。[结论]睾丸间质细胞Caspase-9蛋白表达水平升高可能是亚砷酸钠致雄性大鼠慢性生殖毒性的机制之一。

线粒体细胞色素c介导的caspase-9激活通路参与大骨节病关节软骨细胞凋亡的发生机制

目的通过评价线粒体功能研究线粒体介导的caspase-9激活通路参与成人大骨节病关节软骨细胞凋亡的机制。方法关节软骨细胞培养,Hoechst 33258染色检测软骨细胞核形态,流式细胞仪检测软骨细胞凋亡率和细胞内活性氧含量,Western bloting检测细胞色素c的表达,荧光法检测caspase-9和caspase-3活性。结果大骨节病患者关节软骨细胞较正常软骨细胞凋亡百分率增加,线粒体细胞色素c释放,caspase-9和caspase-3活性增高,且活性氧含量增加。结论线粒体氧化应激参与了大骨节病软骨细胞的病理生理变化,线粒体功能障碍可能在大骨节病关节软骨细胞凋亡过程发挥了重要作用。

常压氧疗对大鼠脑缺血再灌注后脑组织Caspase-9及Caspase-3 mRNA表达的影响

目的:观察不同含量常压氧(NBO)对急性脑缺血再灌注大鼠脑组织Caspase-9及Caspase-3 mRNA表达的影响。方法:选取制作脑缺血再灌注损伤模型成功的120只SPF级雄性SD大鼠,分为低、中、高含量NBO组和空气组,在持续吸氧或空气3、6、12、24、48、72 h时,各组分别随机抽取5只大鼠处死,断头取脑,用荧光定量PCR检测Caspase-9及Caspase-3 mRNA的表达水平。结果:空气组和低、中、高含量NBO组Caspase-9及Caspase-3 mRNA的表达在48 h达到高峰,之后开始下降(P均<0.05),且各时间点NBO组均低于空气组(P均<0.05)。结论:NBO可以下调急性脑缺血再灌注后脑组织Caspase-9及Caspase-3 mRNA的表达。

失荅刺知丸对脑缺血再灌注大鼠海马神经元形态学和Caspase-3、Caspase-9表达的影响

目的:观察失荅刺知丸对脑缺血再灌注大鼠海马神经元形态学和Caspase-3、Caspase-9表达的影响。方法:130只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组(模型组)、失荅刺知丸组(实验组)和金纳多组(阳性对照组),其中后三组根据取材时间点又各分为12 h、24 h和72 h共三个亚组,每组13只。采用线栓法制成大鼠大脑中动脉再灌注模型,透射电镜下观察海马区神经元超微结构变化,免疫组织化学法和Western-blot印迹法检测大鼠海马组织凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9蛋白表达的变化。结果:与假手术组比较,再灌注组大鼠海马神经元出现胞核及线粒体损伤,并且Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与再灌注组比较,失荅刺知丸组大鼠海马神经元胞核及线粒体损伤明显减轻,而Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:失荅刺知丸可减轻脑缺血再灌注大鼠海马神经元的损伤,其作用机制可能与抑制Caspase-3、Caspase-9蛋白表达有关。

腰椎间盘突出症患者血清中Caspase-3和Caspase-9活性研究

目的探究腰椎间盘突出症与凋亡相关因子caspase-3和caspase-9的关系。方法随机选择2014年12月~2016年5月在广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科住院手术治疗的腰椎间盘突出症患者99例,其中单个节段突出的患者70例(A组)、多个节段突出(腰椎间盘突出节段数量≥2个)的患者29例(B组),同时随机选取同期健康体检者40例作为对照组。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测腰椎间盘突出症患者血清中caspase-3和caspase-9浓度。结果对照组、A组和B组血清中caspase-3浓度分别为11.24±0.41,14.31±0.67和17.43±1.86pmol/L,各组之间caspase-3浓度差异具有统计学意义(F=8.47,P<0.01)。对照组、A组、B组血清中caspase-9浓度分别为18.54±2.19,30.57±3.63和43.68±5.15pmol/L,各组之间caspase-9浓度差异具有统计学意义(F=7.85,P=0.001)。A组(q=3.08,3.29,均P<0.05)、B组(q=5.78,4.50,均P<0.05)caspase-3和caspase-9浓度均高于对照组,差异具有统计学意义,且B组高于A组,差异具有统计学意义(q=3.21,3.22,均P<0.05)。结论腰椎间盘突出症患者血清caspase-3和caspase-9表达上调促进了细胞凋亡过程,参与了腰椎间盘突出症的发生,并且与椎间盘突出节段数量相关,突出节段数量越多,caspase-3和caspase-9表达量越高。

青蒿琥酯对人肺腺癌A549细胞中caspase-9及caspase-3活性的影响

目的研究青蒿琥酯(artesunate,Art)体外诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及对半胱天冬氨酸蛋白酶9(cysteine containing aspartate9,caspase-9)和caspase-3活性的影响。方法Art处理A549细胞,流式细胞计数(Flow Cytometry,FCM)检测细胞周期和细胞凋亡,比色法检测caspase-9活性,westernblot检测caspase-3变化。结果FCM显示A549细胞经100mg/L Art作用24h,出现S期细胞减少(P<0.01),G2/M期细胞数目增多(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.0)。不同浓度(10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L)的Art作用A549细胞24h,caspase-9活性呈浓度依赖性增加,分别为对照组的9.87倍、23.33倍(P<0.01)、38.47倍(P<0.01)和60.47倍(P<0.01)。Western blot显示A549细胞经100mg/L Art作用6、12、24h后,细胞浆中caspase-3活化,分别为对照组1.2倍、1.6倍(P<0.01)、1.8倍(P<0.01)。结论青蒿琥酯可通过增加caspase-9和caspase-3的活性,诱导A549细胞凋亡,为阐明Art的抗癌机理,指导青蒿琥酯用于肿瘤治疗提供实验依据。