几种基于pCAMBIA系列多用途新型植物表达载体的改建及优化

以pCHF3,pCAMBIA1301,pCAMBIA3300和pCAMBIA3301载体为骨架,构建CaMV 35S和rd29A启动子驱动多克隆位点(MCS:SacⅠ,KpnⅠ,SmaⅠ,BamHⅠ,XbaⅠ,SalⅠ,PstⅠ)的通用型重组植物双元表达载体,得到两种启动子驱动下MCS与eGFP融合的应用型亚细胞定位双元表达载体,并建立了对大量候选基因进行高通量筛选和功能验证的通用型表达载体系统.

湖北光周期敏感核不育水稻DNA文库的构建

湖北光敏感核不育水稻具有长日照下不育,短日照下可育和不育性易于转移等特点,不仅是杂交稻的良好育种材料,同时也是研究高等植物基因结构和基因表达的好材料,基于这一认识,我们构建了湖北光周期敏感核不育水稻(HPGMR)的DNA文库,在此基础上,我们正在进行光敏核不育现象分子机制的研究。1 材料和方法1.1供试水稻种子粳型湖北光周期敏感核不育水稻5047S种子,由湖北省农科院冯云庆先生提供。

TAR载体克隆染色体目的片段的研究进展

分离染色体DNA上的目的片段 ,对其进行结构及功能的分析 ,对于发现新基因 ,研究基因功能都具有很大的意义。利用TAR克隆技术可以直接从基因组中分离所需的目的片段 ,这比传统的通过筛库获得目的片段的方法简便、快速。

应用分子伴侣共表达系统表达pfu基因及酶活性测定

将通过In-fution方法构建的pET32a-pfu质粒与可以促进可溶性表达的HG-PGRO7质粒一起转入大肠杆菌BL21(DE3)共表达,以pET32a-pfu单独在BL21(DE3)中表达作为对照。用热变性和(NH4)2SO4沉淀去除部分杂蛋白,再经Ni-NAT亲和层析柱纯化分离pfu蛋白,SDS-PAGE检测结果表明目的蛋白大小约为90kD,与预计的分子量大小一致。最后对其酶活性测定结果表明分子伴侣能够促进pfu基因表达,并能够提高酶活性。

马铃薯小热激蛋白基因sHSP-F的克隆及植物表达载体的构建

热激蛋白(heat shock proteins,HSP)是生物体在不利环境条件因素刺激下应激合成的一组在进化上高度保守的蛋白质。前期转录组测序的结果发现马铃薯Favorita的小热激蛋白(small heat shock proteins,s HSPs)基因(PGSC0003DMG400009255)在接种晚疫病菌(Phytophthora infestans)24 h后表达量显著上调。因此,以马铃薯Favorita为材料,根据PGSC0003DMG400009255基因序列设计引物,并在引物5'端加上Bam HⅠ和SalⅠ酶切位点,从接种P.infestans 24小时后的Favorita的RNA中通过RT-PCR的方法获得PGSC0003DMG400009255的基因片段,并命名为s HSP-F,该基因最大开放阅读框(ORF)为594 bp,编码197个氨基酸。通过酶切连接将s HSP-F连接至表达载体p CAMBIA1301中。通过测序和酶切验证,表明s HSP-F基因成功克隆到表达载体中,该工作为进一步研究该基因的功能提供了基础。