Dot immunogold filtration assay for rapid detection of anti-HAV IgM in Chinese

INTRODUCTION The hepatitis A virus specific immunoglobulin M(IgM)antibody is a specific serological marker forearly diagnosis of hepatitis A..At present,themethods used at home or abroad for detecting anti-HAV IgM are RIA,ELISA and SPHAI.The dotimmunogold combination assay that has beendeveloped since 1989 is a new technique with theproperty of simple and rapid immunologicaldetection,by using the red colloidal gold particles tolabel the antibodies as indicator,and the

Preliminary study of a dot immunogold filtration assay for rapid detection of anti-HCV IgG

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＨｅｐａｔｉｔｉｓＣｉｓａｗｏｒｌｄｗｉｄｅｅｐｉｄｅｍｉｃｄｉｓｅａｓｅｓｔｅｍｍｉｎｇｆｒｏｍｔｈｅｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ（ＨＣＶ）．ＨＣＶｉｓｎｏｔｏｎｌｙｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆａｃｔｏｒｏｆｈｅｐａｔｉ...

应用斑点免疫金渗滤法检测旋毛虫病患者血清IgG

目的 研究应用斑点免疫金渗滤法 (DIGFA)快速检测旋毛虫病患者血清抗旋毛虫IgG抗体。 方法 采用旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原 ,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体 ,以颜色深浅为判断阳性标准。 结果 纯化的旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原与患者血清中特异性抗旋毛虫IgG抗体通过渗滤在硝酸纤维素膜上反应 ,1 0min内即可直接观察结果。在 76份患者血清的检测中 ,阳性率为 94 .74 % ,与ELISA法的检出阳性率 86 .84 %相比差异无显著性 ( χ2 =2 .83,P >0 .0 5)。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。

滴金免疫测定法(DIGFA)检测血吸虫抗体的研究

目的建立一种简便、快速、敏感、特异的检测血吸虫抗体的新方法。方法用滴金免疫测定法（DIGFA）检测血吸虫病人血清抗体，并以ELISA作平行对照。结果DIGFA和ELISA的敏感性分别为97．1％和95．7％；特异性分别为99．1％和100％，两法无显著差异（P＞0．05）。62份其它寄生虫感染血清，除肺吸虫1例，ELISA呈阳性反应外，其余均为阴性。结论实验结果不仅显示了DIGFA的敏感性和特异性与ELISA相似，而且具有简便、快速、不需要特殊设备等优点，是一种值得推广应用的检测血吸虫抗体的新方法。

斑点金免疫渗滤法在检测囊虫抗体中的应用

目的 将斑点金免疫渗滤法用于检测囊虫抗体 ,以制备囊虫病诊断试剂盒。方法 经透析的猪囊尾蚴囊液作为检验抗原 ,对 71份囊虫病患者、90份正常人和 2 0份其他病患者血清进行了斑点金免疫渗滤法检测并与酶联免疫吸附法比较。结果 斑点金免疫渗滤法的敏感性为 90 .1% (6 4 / 71) ,特异性为 95 .6 % (86 / 90 ) ,其他病患者血清反应中仅 1例脑肿瘤患者血清阳性 ,其余为阴性。斑点金免疫渗滤法和酶联免疫吸附法的符合率为94 .4 % (15 2 / 16 1)。

斑点金免疫渗滤法检测华支睾吸虫病患者血清抗体的研究

目的 建立一种检测华支睾吸虫病血清抗体的简便、快速、敏感和特异的新方法。方法 以华支睾吸虫成虫抗原为包被抗原 ,金标记葡萄球菌A蛋白 (SPA)为显色剂 ,建立检测华支睾吸虫病患者血清抗体的斑点金免疫渗滤法 (DIGFA) ;并以dot ELISA作平行对照。结果 DIGFA和dot ELISA分别检测 119例华支睾吸虫病患者血清抗体 ,其阳性率分别为 96 6 %和 92 4% ,两法差异无显著性。DIGFA分别检测正常人血清 40例、囊虫病患者血清 2 0例、日本血吸虫病患者血清 2 5例 ,前者均为阴性 ,后两者的交叉反应率分别为 5 %和 4%。DIGFA与dot ELISA两法的符合率达 90 9%。结论 DIGFA的敏感性和特异性与dot ELISA相近 ,且具简便、快速及不需特殊设备等优点 ,是一种检测华支睾吸虫病患者血清抗体的新方法。

应用斑点金免疫渗滤法诊断日本血吸虫病

目的：探索一种便捷的血吸虫病诊断方法。方法：在原已建立的ＥＬＩＳＡ法的基础上，应用３个针对日本血吸虫抗原的不同表位的单克隆抗体标记胶体金，建立检测日本血吸虫病患者血清中血吸虫抗原的斑点金免疫渗滤法。抗原与抗体通过渗滤在硝酸纤维薄膜上进行反应，数分钟用肉眼观察结果。结果：本法检测ＳＥＡ的敏感度为１６ｎｇ／ｍｌ，在６９例慢性日本血吸虫病患者血清的检测中，阳性率为６０．８％，特异性为９５．２％；同时用ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测１３７例慢性日本血吸虫病患者，阳性率为５４．７％、特异性为９４．６％；夹心ＥＬＩＳＡ检测１１８例慢性日本血吸虫病患者，阳性率为６１．９％、特异性为９５．７％。结论：经数理统计Ｇ检验证实斑点金免疫渗滤法的敏感性和特异性同ＥＬＩＳＡ相近，且操作更简便且快速。

胶体金免疫渗滤法检测日本血吸虫病血清抗体的研究

应用建立的胶体金免疫渗滤法检测日本血吸虫病血清抗体,并以快速酶联免疫吸附试验(F-ELISA)方法检测作平行对照。现场和实验室试验表明,胶体金渗滤法与F-ELISA方法在敏感度和特异度的差异无统计学意义(P>0.05),两法具有较高的一致性。但胶体金免疫渗滤法操作简便快速,无特殊要求,在临床和现场防治工作中具有比较广泛的应用前景。

滴金免疫测定法检测抗体在血吸虫病传播阻断地区的应用

目的探讨滴金免疫测定法检测抗体在血吸虫病传播阻断地区的应用价值。方法在已建立的滴金免疫测定法的基础上，应用该法检测原血吸虫病重度流行区、中度流行区和轻度流行区而现已阻断传播地区的人群以及现血吸虫病中度流行区人群的抗血吸虫抗体。结果原血吸虫病重、中和轻度流行区人群的阳性检出率分别为６．１８％、３．３１％、１．４７％，三者间有非常显著差异（Ｐ＜０．０１）；现血吸虫病中度流行区人群的阳性检出率为 ３９．３３％，与传播阻断地区人群的检出率间也有非常显著差异（Ｐ＜０．０１）。结论摘金免疫测定法检测抗体可作为考核该类地区血吸虫病防治效果的一种方法。

金标免疫渗滤法诊断试剂盒诊断血吸虫病的价值研究

目的 评价金标免疫渗滤法诊断试剂盒 (DIGFA- kit)用于血吸虫病血清流行病学调查的价值。 方法 采用DIGFA与 EL ISA单盲平行检测各期血吸虫病病人血清、非流行区人群血清、疫区人群血清和血吸虫病已控制地区人群血清共 2 30 4份。 结果 DIGFA检测血吸虫抗体的敏感性为 96 .8% ,对非流行区健康人群的特异性为 10 0 % ;该法检测疫区居民血清 5 0 8份 ,抗体阳性检出率为 35 .6 % ,在 Kato法粪检阳性的 81人中 ,其中抗体阳性 79人 ,阳性符合率为97.5 % ;检测血吸虫病已控制地区人群血清 ,抗体阳性率为 4.6 % ;根据 DIGFA的敏感性和对非流行区人群的特异性 ,计算其 Youden s指数为 0 .92 6。上述各项结果与 EL ISA比较 ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 结论 DIGFA与 EL ISA有相似的敏感性和特异性 ,且方法简便、快速 ,胶体金标记物制备容易 ,试剂稳定 ,运送方便 。

血清旋毛虫p49抗原IgG抗体的斑点金免疫渗滤法检测

目的 建立一种快速诊断人体旋毛虫感染的新途径。方法 以基因工程表达的猪旋毛虫融合蛋白p49/GST为抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体,建立斑点金免疫渗滤法(Dot-immunogoldfiltration assay,DIGFA),检测人血清抗旋毛虫p49抗原IgG抗体。共检测76份旋毛虫患者血清并与酶联免疫吸附试验(ELISA)作对比研究。结果 抗原抗体通过渗滤在膜上反应,10min肉眼即可观察到结果,在76份患者血清的检测中,阳性率为98.68％,显著高于ELISA法的检出阳性率86.84％,(X2=7.94,P<0.01)。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。结论 以纯化的融合蛋白p49/GST为抗原建立的DIGFA可快速准确检测旋毛虫病人血清特异性旋毛虫IgG抗体,具有推广应用的价值。

快速检测抗斯氏狸殖吸虫抗体的金标免疫渗滤法的建立和应用

目的 :建立一种检测斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体的快速、敏感和特异的新方法。方法 :以斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原为上样抗原 ,胶体金标记羊抗人IgG为显色剂 ,建立检测斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体的斑点金免疫渗滤法 (DIGFA) ;并以ELISA作平行对照。结果 :DIGFA和ELISA分别检测 83例斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体 ,其阳性率分别为 95 .2 % (79/ 83)和 91 .6 % (76 / 83) ,两法差异无显著性 (P >0 .0 5 )。DIGFA分别检测正常人血清32例、华支睾吸虫病患者血清 2 3例和日本血吸虫病患者血清 36例 ,前者均为阴性 ,后两者的交叉反应率分别为 4 .3% (1 / 2 3)和 8.3% (3/ 36 ) ;DIGFA和ELISA两法的总符合率达 92 .3% (36 / 39)。结论 :DIGFA的特异性和敏感性与ELISA相近 ,但方法快速、试剂稳定 ,且不需特殊设备 。

抗日本血吸虫保护性免疫若干无损伤性量化指标的研究

为寻找能无损伤地量化提示抗日本血吸虫疫苗接种后保护作用的测定指标，试从三个方面进行了探索：①通过获取可排除活动性新感染．从而提示免疫保护性存在的高特异、高性能单抗免疫探针，测量宿主体内的循环抗原（CAg）组分，经3农杂交瘤细胞融合、筛选，制备了5株具诊断效能的（IgM）单抗，发现组合应用这些单抗为捕获兼测示抗体，明显优于单个应用．其中IE＋11H＋12G组合显示了在目前多种组合中最佳检测效能．采用Dot－ELISA及新建立的斑点金免疫渗滤法，在样本数（n）分别为184和104的两组健康人群中，分别显示了94．6％及95．2％的高特异性，而在139例及69例两批慢性血吸虫感染者，该两法也分别达到了可以接受的54．7％和60．8％的阳性检出率，也已获得了1株IgG_3同型单抗，A9．初步测试具有较好诊查效果，正在进一步作出鉴定;②为建立采用优质纯化抗原的标准系列，利于定量值测CAg的灵敏度，我们采用Mono－Q高压液相技术纯化分离了SEAj的活性组分，已初步用为测量CAg组分的定量标准参考系列；③通过方法学的改进，借助于BIO－TECH自动酶标仪，建立了测量与抗力相关的特异性IgE及疾病相关的特异性IgG_4的动态ELISA或经标化的终点列读常规，在243例慢性血吸虫病血样测读基础上，经100例健康人测试，?

Ts21重组蛋白斑点免疫金渗滤法检测旋毛虫抗体的研究

目的应用旋毛虫Ts21基因重组蛋白建立诊断人体旋毛虫病及动物旋毛虫感染的快速血清学方法。方法以胶体金标SPA、旋毛虫Ts21重组蛋白与肌幼虫排泄-分泌(excretory-secretory,ES)抗原包被硝酸纤维素膜(NCM),分别建立Ts21重组蛋白-斑点免疫金渗滤法(Ts21-dot immunogold-filtration assay,Ts21-DIGFA)与ES-DIGFA,对旋毛虫病及其他寄生虫病患者血清和感染动物血清进行检测,并与ELISA检测结果进行比较。结果Ts21-DIGFA检测旋毛虫病患者血清抗体的敏感性和特异性分别为94.73%和86.96%,ES-DIGFA的敏感性和特异性分别为89.47%和86.96%,差异无统计学意义(χ2敏感=0.368,χ2特异=0,P>0.05);Ts21-ELISA的敏感性和特异性分别为94.73%和94.20%,与Ts21-DIGFA相比差异无统计学意义(χ2敏感=0,χ2特异=1.272,P>0.05)。Ts21-DIGFA检测旋毛虫感染猪血清的敏感性和特异性分别为88.89%和100%,ES-DIGFA的敏感性和特异性分别为94.44%和95.00%,差异均无统计学意义(χ2敏感=0,χ2特异=0,P>0.05)。小鼠感染300条旋毛虫后4周Ts21-DIGFA的血清抗体检出率为100%(10/10);感染10条及5条旋毛虫后6周血清抗体检出率均为100%(10/10)。DIGFA可在3 min内肉眼观察结果,抗原包被后的NCM和金标SPA在4℃至少保存6个月。结论Ts21-DIGFA检测旋毛虫抗体具有较高的敏感性和特异性及良好的稳定性和重复性,可用于旋毛虫病的血清学诊断及血清流行病学调查。

廉江市育龄期妇女AsAb、EmAb和AcAb抗体阳性率调查

目的调查廉江市育龄期妇女抗精子抗体(As Ab)、抗子宫内膜抗体(Em Ab)和抗心磷脂抗体(Ac Ab)阳性率,并比较两种检测方法的可靠性。方法分别以斑点免疫渗滤试验法(DIGFA)与酶联免疫吸附法(ELISA)检测2013年2月至2015年2月于我院行婚前检查的500例廉江市育龄期未生育妇女的As Ab、Em Ab和Ac Ab情况,并比较两种检测方法的敏感度、特异度、符合度和重复率。结果廉江市育龄期妇女As Ab、Em Ab、Ac Ab的ELISA法检测阳性率分别为2.0%、3.8%、1.6%,而DIGFA法检测阳性率分别为2.4%、4.6%、1.8%。DIGFA法检测3种抗体相对于ELISA法的敏感度为87.5%~90.0%,特异度为98.8%~99.6%,符合度为98.4%~99.4%,差异均无统计学意义(P>0.05);DIGFA法的日间重复性为100.0%,明显高于ELISA法的94.0%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论廉江市育龄期妇女的3种抗体阳性率较低,DIGFA法检测结果与ELISA检测结果相当,但DIGFA法的稳定性要高于ELISA法,且其具有简便、快捷的特点,其在免疫性不孕的流行病学调查中具有重要的临床推广价值。

检测流行性出血热病毒抗体的滴金免疫测定法的建立及应用

应用自行制备的直径１５ｎｍ的胶体金标记ＳＰＡ，建立了检测血清流行性出血热病毒抗体的滴金免疫测定法。与同步建立的ＥＬＩＳＡ法对比检测临床标本，结果有良好的一致性，两法符合率为９６．４％。本法中抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应，数分种内即可用肉眼观察结果，操作简单，试剂稳定、安全。