柔嫩艾美耳球虫氯嗪苯乙氰抗性株与氯羟吡啶抗性株的实验室诱导

在药物浓度递增的情况下 ,经过 10次传代 ,诱导出对 1 2 5mg/kg氯嗪苯乙氰产生抗药性的E .tenella虫株 ,初始诱导浓度为 0 0 7mg/kg ;经过 6次传代 ,诱导出对 150mg/kg氯羟吡啶产生抗药性的E .tenella虫株 ,初始诱导浓度为 75mg/kg。低浓度 (0 12 5mg/kg)氯嗪苯乙氰即具有高效抗球虫作用。在诱导过程中 ,E .tenella一旦对低浓度 (0 0 7mg/kg ,0 12 5mg/kg)氯嗪苯乙氰产生了较为稳定的抗药性 ,诱导过程便进行得很快 ,一步一个台阶 ,即球虫的抗药性突破某一阈值后容易对高一级浓度的药物产生抗药性。

气相色谱-质谱法测定鸡肉组织中残留的氯羟吡啶

建立了气相色谱-质谱（GC—MS）测定鸡肉组织中氯羟吡啶残留的确证方法。采用乙腈提取鸡肉组织中的待测物，经碱性氧化铝层析柱净化，Sylon BFT衍生剂衍生后，采用选择离子监测（SIM）模式检测。对氯羟吡啶三甲基硅烷化衍生物的电子轰击（EI）质谱碎片进行解析，选择m／z 212，214，248和263等4个特征离子作为定性离子，其中m／z 248为定量离子。同时还考察了检测过程中的基质效应。氯羟吡啶衍生物的响应与其质量浓度在5．0～500μg／L范围内呈良好的线性关系，相关系数大于0．998；以3倍信噪比（S/N）计算方法的检出限达0．5μ/kg；在5，10和20μg／kg添加水平下鸡肉组织中待测物的平均回收率分别为77．0％，84．5％及89．4％，相对标准偏差小于6．9％。结果表明，该方法简单、灵敏、可靠，适用于鸡肉组织中氯羟吡啶残留的分析确证。

氯羟吡啶在鸡组织中的残留研究

本文报道用高效液相色谱法检测肉鸡肌肉和肝脏组织中氯羟吡啶的残留。肉鸡肌肉和肝脏组织经乙腈提取，用氧化铝柱和葡聚糖凝胶阴离子交换柱净化分离，洗脱液浓缩后用含内标物的甲醇溶解。以磷酸盐缓冲液／乙腈（８５／１５，ｖ／ｖ）作为流动相，苯甲酰胺作为内标物，用ＲＰ－１８柱（２２０×４．６ｍｍ）在紫外波长２７０ｎｍ处检测。将氯羟吡啶以０．０５、０．１０和０．５０μｇ／ｇ分别添加到空白肌肉组织中，测得肌肉组织回收率为８８．０％、９０．４％和９１．６％；以０．１０和０．５０μｇ／ｇ水平添加到肝脏组织中，肝脏组织回收率为８５．４％和９０．２％，变异系数均低于１０％。用该方法测定肌肉和肝脏组织中氯羟吡啶残留的最低检测限分别为０．０２５ｍｇ／ｋｇ和０．０５ｍｇ／ｋｇ。经１２５ｍｇ／ｋｇ氯羟吡啶混料饲喂ＡＡ肉鸡，停药当天（０ｄ）测得肉鸡肌肉和肝脏组织残留量为２．８５ｍｇ／ｋｇ和７．０６ｍｇ／ｋｇ。停药７ｄ时测得肌肉和停药１０ｄ时测得肝脏组织残留量分别低于０．０２５ｍｇ／ｋｇ和０．０５ｍｇ／ｋｇ。

QuEChERS-高效液相色谱法同时检测动物组织中的克球酚、地克珠利和磺胺类药物残留量

目的：建立一种动物组织中兽药残留量的QuEChERS-HPLC检测方法。方法：样品以乙腈提取,混合型分散固相萃取净化,乙腈-水为流动相,梯度洗脱,270 nm检测,流速1.0 ml/min。结果：检测限分别为：克球酚、磺胺类：0.05 mg/kg、地克珠利：0.10 mg/kg。在添加浓度为0.10-1.0 mg/kg范围内,回收率均可在65%-100%,相对标准偏差1%-10%。结论：将改良后的农药多残留检测QuEChERS样品处理技术成功应用于兽药残留的检测,对动物组织中的克球酚、地克珠利和磺胺类药物残留量进行同时分析,满意结果。

气相色谱-质谱法测定鸡蛋、牛奶中氯羟吡啶残留

建立了气相色谱-质谱（GC-MS）测定鸡蛋、牛奶中氯羟吡啶残留的检测方法.采用甲醇提取鸡蛋、牛奶中待测物,经碱性氧化铝层析柱净化,Sylon BFT衍生剂80℃衍生60 m in,对氯羟吡啶三甲基硅烷化衍生物采用选择离子监测模式（SIM）进行检测.氯羟吡啶衍生物的响应信号与其质量浓度在5.00~500.00μg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数大于0.99;在5、10和20μg/kg添加水平下,鸡蛋中待测物的平均回收率分别为68.4%、75.2%和80.1%,牛奶中待测物的平均回收率分别为79.5%、87.1%和90.0%,批内、批间相对标准偏差均小于10%;以3倍信噪比（S/N）计算方法的检出限达2.0μg/kg;以10倍信噪比（S/N）计算方法的定量限为5.0μg/kg.

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡肉中的二氯二甲吡啶酚、磺胺类和喹诺酮类药物残留

采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）在正离子模式下通过多反应监测（MRM）方式同时测定了鸡肉组织中二氯二甲吡啶酚、磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星等9种药物残留。试样经乙腈均质提取,冷冻离心脱脂,旋转蒸发浓缩,用流动相复溶后经乙腈饱和的正己烷除油,随后进行UPLC-MS/MS定性定量分析。该方法测定9种药物的检出限为0.1μg/kg,定量限为0.5μg/kg。在添加水平分别为0.5、1.0和2.0μg/kg时,9种药物的加标回收率为81.5%~97.6%,相对标准偏差（RSD）为2.1%~8.9%。该方法简便、准确,可作为鸡肉中9种药物残留检测的确证方法。

鸡肉中氯羟吡啶的高效液相色谱法测定

确定了鸡肉中氯羟吡啶残留量的高效液相色谱分析方法.样品中的氯羟吡啶经乙腈提取,碱性氧化铝SPE柱纯化后,旋转蒸干,用流动相溶解残渣,过膜后进样;色谱柱采用Waters Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),磷酸盐缓冲液(pH 7.0)-乙腈(体积比90:10)为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长为270nm,柱温为25℃,进样量50 μl;鸡肉中氯羟吡啶的定量限为0.01 mg/kg;氯羟吡啶的测定在0.025～0.500μg/ml范围内具有良好的线性关系,平均回收率在80.6%以上,变异系数小于7.5%.

五种抗球虫药防治鸡E．tenella的疗效对比试验

挑选体况相近的２１日龄伊莎公鸡２１０羽和罗斯公鸡７０羽，在人工感染Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ下，对氯嗪苯乙腈（ｄｉｃｌａｚｕｒｉｌ）、常山酮（ｈａｌｏｆｕｇｉｎｏｎｅ）、氯羟吡啶（ｃｏｌｐｉｄｏｌ）、马杜拉霉素（ｍａｄｕｒａｍｉｃｉｎ）和盐霉素（ｓａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ）５种抗球虫药，进行了３批防治鸡Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ疗效对比试验，以抗球虫指数（ＡＣＩ）作为疗效的综合评判指标。结果显示各种药物的ＡＣ互分别为，氯嗪苯乙腈９５．５２，１９５．２９，１９２．７４，常山酮２００．６０，１９９．０４，１９７．４５；氯羟吡啶１７９．６４，１７４．４２，１６７．９３；马杜拉霉素１９４．２３，１９４．２３，１９８．８９；盐霉素１６７．３２，１７０．９５，１６４．８２；用于对照的感染不用药组的ＡＣＩ为１２６．５０，１３０．７９和９３．３１。氯嗪苯乙腈、常山酮和马杜拉霉素抗该球虫的效果非常好，其ＡＣＩ均超过１９０，氯羟吡啶和盐霉素效果次之，其ＡＣＩ在１６０～１８０之间。

蛋品中氯羟吡啶残留量检测方法的研究

本方法是经过提纯、净化、浓缩后,用高效液相色谱法检测鸡蛋中氯羟吡啶的残留量。色谱条件是以磷酸盐缓冲液:乙腈(90∶10)作为流动相;C18柱作固定相;紫外检测器,检测波长:270nm;流速:1.0mL/min。线性方程为y=22147x+951,在0.5μg～100μg/mL之间呈现良好的线性关系,相关系数为0.99998;4个不同浓度平均回收率(n=5)分别为93.3%、89.9%、85.4%、84.2%,变异系数均低于5%。空白鸡蛋无氯羟吡啶,最低检测限为0.02mg/kg。本法简便、快速,准确度和精确度都较高。

禽肉中克球酚气相色谱微量快速测定法

对禽肉样品中克球酚药物残留采用微量化学法技术，以甲醇提取，氧化铝、阴离子树脂交换柱净化，乙酰化后，进行ＧＣ－ＥＣＤ毛细管色谱测定。经对肉鸡、填鸭、饲养山鸡进行添加回收率试验，方法回收率为８５．７％～９４．４％，变异系数为３．８％～７．７％，最低检出限为２．０ｎｇ／ｇ。

氯羟吡啶的特殊毒性──致畸作用

观察了国产氯羟吡啶对 Ｗ ｉｓｔａｒ 大鼠的致畸作用。氯羟吡啶以 ４、２０、１００、２００ ｍ ｇ／ｋ ｇ ４ 个剂量进行试验。结果，氯羟吡啶 １００、２００ ｍ ｇ／ｋ ｇ 组鼠妊娠率极显著低于阴性对照组 （ Ｐ ＜ ００１）， １００ ｍ ｇ／ｋｇ 的氯羟吡啶还对胎鼠平均窝重有显著不利影响，２００ ｍ ｇ／ｋｇ 组胎鼠平均身长及平均体重均显著小于阴性对照组 （ Ｐ ＜００５）。另外，２００ ｍ ｇ／ｋｇ 的氯羟吡啶可导致骨化迟缓增多和绝大部分胎鼠（１５／１６）多肋（１４ 对肋骨），还引起母鼠体重下降，且胎仔平均畸形出现率显著高于阴性对照组。由此认为，氯羟吡啶有一定的致畸作用和胚胎毒作用。

气相色谱法测定动物产品中二氯二甲吡啶酚兽药残留量的不确定度评估

分析了气相色谱法定量测定动物产品中二氯二甲吡啶酚兽药残留量的不确定度来源,求出各不确定度分量对总测量不确定度的相对贡献,对测量结果进行了表述。

氯羟吡啶人工抗原合成和鉴定

目的:将氯羟吡啶的衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)制备人工抗原。方法:采用威廉森合成法合成了氯羟吡啶的衍生物(CLOP-2C),再分别经活泼酯法和氯甲酸异丁酯法合成氯羟吡啶的人工抗原(CLOP-2C-BSA,CLOP-2C-OVA)。结果:通过TLC、质谱、红外光谱等方法鉴定表明成功制备了氯羟吡啶衍生物。紫外扫描图谱表明人工抗原偶联成功,且半抗原与载体的分子结合比率分别为8.26和4.7。结论:成功的制备了氯羟吡啶人工抗原。

2,6-二甲基-3,5-二氯-4-吡啶酚糖苷的合成

在相转移催化条件下,使α-D-乙酰基化溴代的葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸甲醋1a,1b,1C分别与2,6-二甲基-3,5-二氯-4-吡啶酚(俗称氯吡醇,氯羟吡啶)作用。

液相色谱-电喷雾串联质谱法测定禽类产品中克球酚的残留

建立了禽类产品中克球酚残留的液相色谱-电喷雾串联质谱（LC-ESI-MS/MS）检测方法。用甲醇对样品进行提取,提取液用正己烷萃取去油脂,然后用LC-18柱和阴离子交换柱净化,LC-ESI-MS/MS测定。利用基质校正曲线对克球酚准确定量。在2,5,10,20μg/kg4个添加水平下,克球酚的平均回收率稳定在55.38%~132.44%之间,日内精密度小于9.54%,日间精密度小于15.27%。在1~40μg/kg范围内色谱峰面积与克球酚含量呈良好的线性关系,检出限为0.5μg/kg,定量限为2.0μg/kg。该方法选择性好,抗干扰能力强,可作为禽类产品中克球酚残留检测的确证方法。

氯羟吡啶的特殊毒性——致突变作用的研究

用移动平均法测定了氯羟吡啶对大、小鼠的经口 LD_(50),分别为7183mg/kg 和400mg/kg。在小鼠胚胎转移微核试验中,160mg/kg 氯羟吡啶18h 采样组的孕鼠胎肝血嗜多染红细胞平均微核率极显著(P<0.01)高于吐温组(阴性对照组).50mg/kg 能引起小鼠骨髓细胞多倍体发生率和小鼠精于畸形率极显著或显著增高(P<0.01和 P<0.05).10,30和100mg/kg3剂量组的平均每个细胞姐妹染色单体交换率均极显著(P<0.01)高于吐温组。在显性致死试验中,雄鼠每天一次灌胃100mg/kg 氯羟吡啶,连续5天,第3周交配的孕鼠平均活胎数显著低于吐温组;每个孕鼠平均早期死胎数显著高于吐温组;突变指数极显著(P<0.01)高于吐温组。据此,可初步认为氯羟吡啶对小鼠的体细胞和生殖细胞有弱致突变作用.

高效液相色谱内标法测定鸡蛋中氯羟吡啶的残留量

以4-二甲氨吡啶为内标,发展了一种高效液相色谱法,用于快速测定鸡蛋中氯羟吡啶的残留量。鸡蛋样品中的氯羟吡啶经乙腈匀浆提取,然后用碱性氧化铝柱富集,甲醇洗脱液浓缩后用流动相溶解残渣,0.45μm滤膜过滤后进样分析。色谱柱采用Platisil-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为0.05mol.L-1甲酸铵-乙腈(85:15,v/v,pH 6.4),流速为0.8mL.min-1,二极管阵列定量检测波长为267nm,柱温25℃,进样量20μL。氯羟吡啶在0.5～80μg.mL-1范围内呈现良好的线性关系,线性方程为Y=0.254 4 X+0.703 9,相关系数为0.999 6。3个不同水平的标准添加平均回收率分别为85.3%,88.2%和83.7%,相对标准偏差≤2.25%(n=4)。最低检出限为1.8mg.kg-1。该方法快速、简便、准确、重现性好,适用于鸡蛋中兽药氯羟吡啶残留量的快速检测。

鸡肉组织中氯羟吡啶残留超高效液相色谱检测方法研究

对鸡肉组织中氯羟吡啶残留高效液相色谱方法进行了研究,建立了鸡肉组织中氯羟吡啶残留超高效液相色谱检测方法。取鸡肉样品,用乙腈提取,正己烷脱脂,过氧化铝B柱,用20ml甲醇洗脱,减压蒸干,残留物用甲醇溶解,紫外检测器在267nm波长下测定,流动相为乙腈:水(10:90,V/V)。氯羟吡啶浓度在10～1000μg/L范围内,呈良好的线性,相关系数>0.999,在10、50、100μg/kg三个添加水平,平均回收率60.5%～94.6%,日内变异系数在4.2%～10.2%之间,日间变异系数在6.6%～12.7%之间,方法检测限为5μg/kg,定量限为15μg/kg。

超高效液相色谱法测定鸡肉中氯羟吡啶和磺胺类药物残留的方法研究

为同时测定鸡肉中氯羟吡啶和9种磺胺类药物残留量,通过建立样品处理技术,优化目标化合物色谱条件,建立了一种超高效液相色谱(UPLC)法。样品用乙腈提取后,经RP18色谱柱分离,外标法定量,样品检测氯羟吡啶和9种磺胺类药物时间仅需3.9 min,在10~1 000 ng/m L浓度范围内呈良好线性关系,相关系数均大于0.999;在10、50、200μg/kg 3个添加水平回收率为69.0%~95.6%,相对标准偏差≤7.98%;检测限为3.0μg/kg,定量下限为10.0μg/kg。该方法简便、快速、灵敏度高,重现性好,可用于鸡肉组织中氯羟吡啶和9种磺胺类药物的快速定量检测。

氯羟吡啶人工抗原的合成及抗体特性

研究氯羟吡啶(CLOP)人工抗原合成及其多克隆抗体(pAb)制备。将CLOP进行化学修饰引入活性基团羧基,合成氯羟吡啶半抗原(CLOP-2C);分别采用活泼酯法和混合酸酐法将CLOP-2C与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,合成人工免疫原CLOP-2C-BSA和包被抗原CLOP-2C-OVA,用紫外(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;用CLOP-2C-BSA免疫Balb/c小鼠,间接ELISA测定CLOP pAb效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明:CLOP-2C-BSA偶联成功,CLOP-2C与BSA的分子结合比为34.0∶1;CLOP pAb效价达到1∶(2.56×104),对CLOP的IC50为7.76μg/L,与其他抗球虫药的交叉反应率低,获得高价、敏感、特异的CLOP pAb,为CLOP残留免疫学检测方法的建立奠定基础。