关于簇蛋白(clusterin)和前列腺干细胞功能的关系研究

目的明确簇蛋白(clusterin)和前列腺干细胞功能的关系。方法取10只实验犬,分别于去势前及去势后近期(<15d)、去势后远期(>15d)取前列腺组织制成石蜡切片。通过双标免疫组化检测前列腺组织中clusterin的表达及其表达部位。结果去势前后clusterin在前列腺基底细胞中的表达没有显著性的差异。结论Clusterin在前列腺基底细胞中不存在表达。

基底细胞在前列腺增生发生中的作用

目的 探讨基底细胞在前列腺增生 (BPH)发病中的作用。方法 胚胎期前列腺 15例 ,成人非增生前列腺 2 1例 ,增生前列腺 3 4例 ,睾丸去势前列腺 7例 ,去势时间 4～ 7个月。用单克隆 3 4βE12抗体标记基底细胞 ,用增殖细胞核抗原 (PCNA)标记细胞增殖。应用原位缺口平移法检测细胞凋亡。结果 PCNA主要标记基底细胞 ,凋亡成分主要为腺上皮细胞。成人非增生前列腺与增生前列腺上皮细胞增殖、凋亡无显著性差异 (P >0 .0 5 )。在成人非增生前列腺 ,前列腺 3个功能区的形态有一定的差异 ,移行区前列腺可见一些散在的与成熟腺体相邻的细胞团 ,与胚胎期前列腺腺体胚芽结构相似 ,3 4βE12表达阳性。移行区基底细胞的增殖指数明显高于外周区和中央区 (P <0 .0 5 ) ,腺上皮细胞的凋亡指数与中央区相当但低于外周区 (P <0 .0 5 )。结论 基底细胞是前列腺最主要的细胞增殖成分 ,基底细胞的增殖及向腺上皮细胞的分化维持前列腺上皮细胞增殖、凋亡平衡 。

ALA-PDT联合咪喹莫特治疗皮肤基底细胞癌临床观察

目的探讨5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)联合咪喹莫特治疗皮肤基底细胞癌(BCC)的疗效及对免疫功能的影响。方法选取医院2015年3月至2018年3月收治的BCC患者104例,采用随机数字表法分为对照组和观察组,各52例。两组患者均予ALA-PDT治疗,观察组患者加用咪喹莫特,两组均治疗12周。结果观察组的临床总有效率和创面美容效果优良率分别为88.46%和86.54%,显著高于对照组的76.92%和65.38%(P<0.05);与治疗前比较,两组患者治疗后的CD4^+、CD4^+/CD8^+、自然杀伤(NK)细胞和CD8^+水平显著降低,且观察组患者上述细胞改善程度显著优于对照组(P<0.05);观察组CD3^+水平显著升高(P<0.05);观察组和对照组的不良反应发生率相当(11.54%比13.46%,P>0.05)。结论ALA-PDT联合咪喹莫特治疗BCC有一定创面修复疗效和美容疗效,并可提高患者的免疫功能。

MicroRNA异常表达谱与前列腺癌的关系

前列腺癌是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,其发病率日益增长,严重威胁着男性的健康。微小RNA(miRNAs)是一类由21～25个核苷酸组成的内源性、非编码单链RNA,通过与靶基因的mRNA结合发挥作用,从而调控细胞的整个代谢过程,如转移、侵袭、炎性反应、细胞周期以及凋亡等。目前,miRNAs对前列腺癌等肿瘤疾病进程的调控及功能研究已成为生物医学最热门的研究领域之一。本文就miRNAs异常表达对前列腺癌所发挥作用的最新研究进展进行综合论述,为其进一步研究提供理论依据及思路。

经尿道2μm激光前列腺汽化切除术后前列腺部尿道创面修复机制的动物实验研究

目的建立2μm激光犬经膀胱前列腺汽化切除术模型,探讨前列腺部尿道创面再上皮化的修复机制。方法对15只成年雄性中华田园犬行2μm激光经膀胱前列腺汽化切除术,于术后3d、1、2、3及4周行膀胱镜镜检观察前列腺部尿道的修复情况。对创面进行序贯取材,HE染色,免疫组织化学检测创面细胞integrinα2β1、CD133、CD44和Sca-1的表达,电镜下观察再生细胞超微结构。结果膀胱镜检显示术后1周可见少量再生上皮,未发现膀胱颈尿路上皮与尿道创缘呈爬行生长的现象。术后2周再生上皮逐步增多,至术后3~4周创面被其覆盖。HE染色可见创面坏死组织下前列腺上皮增殖、迁移和分化,将创面覆盖。术后4周创面再上皮化完成,整个修复过程未观察到创面两端正常上皮向创面爬行生长。免疫组化提示创面下增生细胞不表达integrin α_2β_1、CD133、CD44和Sca-1。术后2、3周透视电镜下增生细胞核仁显著,胞质内见丰富的粗面内质网,未见前列腺小体及神经内分泌颗粒。结论 2μm激光犬经膀胱前列腺汽化切除术后前列腺部尿道再上皮化很可能是由创面下残余的前列腺组织完成,而其中的基底细胞可能是再上皮化的重要来源。

增韧基团-姜黄素酯协同二甲双胍对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的探讨姜黄素酯协同二甲双胍抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3增殖的影响及其机制。方法细胞免疫组织化学法初步鉴定原代与传代PC-3细胞中CD133、CD44的表达。3种浓度的叔丁氧羰基一苯丙氨酸酯姜黄素单酯（BPC）联合二甲双胍作用于人前列腺癌Pc-3细胞，与单独使用作比较。采用噻唑蓝（MTT）比色法检测上述10组细胞生长活性，流式细胞术检测细胞凋亡和比率。结果原代PC-3细胞CD44、CDl33阳性表达强度（56．5±1．0）％、（50．7±4．0）％明高显于传代Pc-3细胞（23．1±1．1）％、（18．5±2．5）％（P〈0．05）；二甲双胍（5mmol／L）组、不同浓度BPC（10、20、40μmol／L）组、二甲双胍（5mmol／L）联合不同浓度BPC组分别作用原代PC-3细胞24h后细胞生长抑制率分别为（20．3±1．7）％、（15．3±1．1）％～（49．3±2．0）％、（50．9±1．0）％-（68．4±3．2）％；二甲双胍（5mmol／L）、BPC40μmol／L、二甲双胍＋BPC（5mmol／L，40μmol／L）作用于PC-3细胞24h后的细胞凋亡率为（21．02±2．10）％、（28．04±1．40）％、（45．03±2．80）％，联合用药组与相应对照组间细胞抑制率及凋亡率差异有统计学意义（P〈0．05）。二甲双胍（5mmol／L）作用于传代前列腺癌Pc-3细胞24h后细胞增殖抑制率为（4．95±1．20）％，细胞凋亡率为（5．02±1．70）％，较原代细胞抑制率及凋亡率均降低差异有统计学意义（P〈0．05）。结论增韧基团姜黄素酯可与二甲双胍协同抑制激素非依赖性前列腺癌Pc-3细胞的增殖。其协同机制可能为：增韧基团姜黄素酯靶向杀伤前列腺癌PC-3细胞中的癌细胞，而二甲双胍靶向杀伤前列腺癌PC-3细胞中的肿瘤干细胞。

聚集素在前列腺癌细胞不同周期时相的表达

目的探讨凋亡相关基因聚集素(c lusterin)在前列腺癌不同周期时相的差异表达及意义。方法应用改良的胸腺嘧啶核苷(TdR)和高压笑气双阻断法将前列腺癌细胞系PC-3同步在不同的周期时相,应用流式细胞术检测同步化的效率。应用RT-PCR及W estern b lotting方法检测不同周期时相聚集素在mRNA和蛋白水平的表达。结果前列腺癌细胞系PC-3的M、G1、S和G2期细胞同步化效率分别为92.1%、87.0%、80.2%和75.9%;聚集素在不同周期时相均有表达且存在差异,G1和S期表达水平较低,M期和G2期表达水平较高,RNA和蛋白表达具有一致性。结论细胞周期对聚集素的表达有较大的影响,对于采用聚集素途径治疗前列腺癌具有指导意义。

^131I标记抗前列腺干细胞抗原单克隆抗体治疗裸鼠原位人前列腺癌种植瘤

目的探讨^131I标记抗前列腺干细胞抗原单克隆抗体（^131I-PSCA-McAb）对裸鼠原位人前列腺癌种植瘤的治疗效果。方法选取鼠龄及体积相近的BALB/c裸鼠36只，随机分为2组，分别建立激素依赖性前列腺癌细胞株（LNCap细胞）与激素非依赖性前列腺癌细胞株（PC3细胞）裸鼠前列腺癌原位种植模型。每组裸鼠再随机分为3组，分别静脉注射^131I-PSCA-McAb（实验组）、PSCA-McAb（单抗对照组）及^131I（碘对照组）各200txg，在给药后不同时间点应用单光子发射计算机断层成像技术（SPECT）观察药物聚集情况。给药48h后处死裸鼠，利用原位末端转移酶标记法（TUNEL）比较肿瘤体内凋亡水平的差异。结果（1）成功建立裸鼠原位前列腺癌种植模型，肿瘤生长良好；（2）^131I-PSCA-McAb经静脉注射后在实验组裸鼠前列腺种植瘤内聚集，在不同时段载瘤裸鼠显影均良好，两组肿瘤与对侧正常组织（T/NT）的放射性比值均在注射8h后达到峰值，分别为4．37±0．76（LNCap实验组）、4．21±0．71（PC3实验组）；（3）TUNEL检测显示阳性率LNCap细胞实验组〉单抗对照组〉碘对照组，PC3细胞实验组〉单抗对照组〉碘对照组；LNCap实验组和PC3实验组间阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论成功建立裸鼠原位前列腺癌种植模型，^131I-PSCA-McAb对裸鼠激素依赖性及激素非依赖性前列腺癌原位种植瘤均有显著的治疗效果。

131Ⅰ标记抗前列腺干细胞抗原单克隆抗体对前列腺癌LNCap细胞和PC3细胞的抑制作用

目的 观察131Ⅰ标记抗前列腺干细胞抗原单克隆抗体（131 Ⅰ-PSCA-mAb）对前列腺癌LNCap细胞和PC3细胞体外培养增殖的抑制作用,探讨131 Ⅰ-PSCA-mAb对前列腺癌的治疗效果.方法 体外培养前列腺癌LNCap和PC3细胞株,将每种细胞再进一步分为实验组、抗体对照组、碘对照组及空白对照组,分别加入131 Ⅰ-PSCA-mAb、PSCA-mAb、131 Ⅰ-IgG及生理盐水各2 g/L培养液.用噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞的增殖抑制结果,用流式细胞术检测细胞凋亡,用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果 加入药物后,LNCap实验组和PC3实验组的细胞增殖抑制率分别达（83.67±2.52）％和（80.33±4.51）％,明显高于各对照组;两实验组细胞凋亡率分别达（50.24±5.52）％和（54.71±5.84）％,明显高于各对照组;Transwell侵袭实验两实验组细胞侵袭力较对照组明显减弱.各实验中,两实验组间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 131 Ⅰ-PSCA-mAb可明显抑制前列腺癌LNCap细胞和PC3细胞的生长及侵袭能力,促进细胞凋亡,有望成为一种较理想的前列腺癌放射免疫治疗药物.

靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞中CD2相关蛋白表达的影响及意义

目的研究小RNA干扰靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响及意义。方法利用构建靶向抑制Par-4基因的SiRNA真核表达载体转染hBMSCs。采用实时荧光定量PCR检测Par-4基因的mRNA水平。采用谷氨酸诱导hBMSCs凋亡。采用流式细胞术检测hBMSCs凋亡百分率。Westernblot检测hBMSCsCD2AP蛋白表达量。应用SPSS10.0软件进行统计学分析。结果1.Par-4-SiRNA可下调hBMSCsPar-4-mRNA水平,抑制率为88%(P<0.01)。而非抑制的对照序列未见抑制作用(P>0.05)。2.流式细胞术检测结果显示,与正常对照组比较,谷氨酸加常规hBMSCs组凋亡百分率为(59.12±5.43)%(P<0.01)。而在Par-4-SiRNA转染的Par-4-SiRNA-hBMSCs组中,谷氨酸对hBMSCs的凋亡诱导作用被显著抑制,凋亡百分率显著下调为(39.49±5.01)%(P<0.01)。3.Par-4-SiRNA转染的Par-4-SiRNA-hBMSCs组,谷氨酸对hBMSCs中CD2AP的下调作用被显著抑制,CD2AP蛋白的表达量显著上升(P<0.01)。结论靶向抑制Par-4基因的表达能够拮抗谷氨酸诱导的hBMSCs凋亡及CD2AP表达的下调。

脂肪来源干细胞通过Wnt/β-catenin通路调控前列腺增生上皮BPH-1细胞的增殖和凋亡

为了探讨脂肪来源干细胞对前列腺增生上皮BPH-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制,本研究从人体脂肪组织中分离脂肪来源干细胞并通过流式细胞术鉴定细胞表面标志物,将实验分为2组:对照组和脂肪来源干细胞共培养组。采用Transwell进行共培养,脂肪干细胞与前列腺增生上皮BPH-1细胞共培养组中两者比例为1:1,对照组中不含脂肪干细胞。CCK8检测前列腺增生上皮BPH-1细胞活力;羟脯氨酸法检测前列腺增生上皮细胞胶原合成能力;流式检测前列腺增生上皮细胞凋亡率;Western blotting检测前列腺增生上皮细胞Wnt3a、Bcl2和β-catenin蛋白表达水平。流式细胞仪检测结果,显示酶消化法能够从脂肪组织中分离出脂肪干细胞。人脂肪来源干细胞与前列腺增生上皮BPH-1细胞共培养能够显著抑制前列腺增生上皮BPH-1细胞的增殖能力,羟脯氨酸检测结果表明,脂肪干细胞能够显著抑制前列腺增生上皮BPH-1细胞胶原合成,流式检测结果显示脂肪干细胞能够显著促进前列腺增生上皮BPH-1细胞的凋亡,Western blotting检测显示脂肪干细胞能够显著抑制前列腺增生上皮BPH-1细胞Wnt3a、Bcl2和β-catenin蛋白表达。本研究的初步结论表明:脂肪来源干细胞通过抑制Wnt/β-catenin通路抑制前列腺增生上皮BPH-1细胞增殖。

PSCA、VEGF在皮肤基底细胞瘤中的表达及其相关性分析

目的探讨前列腺干细胞抗原(PSCA)和血管内皮生长因子(VEGF)在皮肤基底细胞瘤瘤组织中的表达及与临床病理参数的关系,以及PSCA和VEGF二者的相关性。方法收集2015年8月至2017年6月进行手术治疗的52例石蜡包埋的皮肤基底细胞瘤(基底细胞瘤组织组)及其癌旁组织标本(癌旁组织组),另选取47例手术切除的无任何皮肤疾病或外伤瘢痕的正常皮肤组织作为对照组。利用实时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测三组中PSCA和VEGF mRNA表达水平,免疫组织化学法检测PSCA和VEGF蛋白表达,分析PSCA和VEGF表达与临床病理特征的关系,Pearson相关分析法分析PSCA和VEGF表达的相关性。结果 Real-time PCR检测结果示,基底细胞瘤组织PSCA和VEGF mRNA相对表达水平较癌旁组织组和对照组均明显增加(P均<0.01),而癌旁组织组与对照组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。免疫组织化学结果示,PSCA、VEGF阳性反应产物主要表达于细胞质,细胞核也有部分表达,皮肤基底细胞瘤组织中PSCA、VEGF蛋白表达率均明显高于癌旁组织(P均<0.01),在对照组二者均不表达;PSCA、VEGF蛋白表达率随着分化程度的降低而增加,随着病理分期的增加而增加(P<0.05,P<0.01);淋巴结转移、浸润深度T3~T4时PSCA、VEGF蛋白表达率高于无淋巴结转移、浸润深度T1~T2时(P<0.05,P<0.01)。Pearson相关性分析结果显示,皮肤基底细胞瘤组织中PSCA与VEGF mRNA表达水平呈显著正相关(r=0.829,P<0.05)。结论 PSCA和VEGF在皮肤基底细胞瘤组织中均高表达,二者呈正相关,可能参与癌细胞的增殖、转移过程。

LncRNASNHG6调控miR-26a/EZH2对前列腺肿瘤干细胞增殖凋亡及化疗敏感性的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)核仁小RNA宿主基因6(SNHG6)对前列腺肿瘤干细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响及其机制。方法采用流式分选技术从前列腺肿瘤细胞PC-3中分选出CD44+CD24-肿瘤干细胞和非CD44+CD24-细胞,采用实时荧光定量PCR检测两种细胞中SNHG6和微小RNA(miR)-26a表达,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞对顺铂的化疗敏感性,免疫印迹法(Western blot)检测细胞中细胞核增殖相关抗原(Ki67)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测SNHG6、miR-26a和zeste基因增强子同源物2(EZH2)的靶向关系,Western blot检测miR-26a模拟物对EZH2蛋白表达的影响。结果与非CD44+CD24-细胞比较,SNHG6在CD44+CD24-细胞中的表达水平明显升高(P<0.05);与NC-siRNA组[(1.00±0.06)%、(96.85±6.48)%、(0.72±0.06)%、(0.43±0.03)%、(5.32±0.15)%、(0.35±0.03)]比较,SNHG6-siRNA组细胞中SNHG6表达水平(0.25±0.03)、细胞增殖活力(75.36±5.1)%和细胞中Ki67(0.38±0.03)、Bcl-2蛋白(0.21±0.02)表达水平均明显降低,而miR-26a表达水平、细胞凋亡率(13.83±2.36)%和Bax蛋白(0.48±0.03)表达水平均明显升高,且细胞对顺铂化疗敏感性明显增强(P<0.05);miR-26a是SNHG6的靶基因,而EZH2是miR-26a的靶基因,miR-26a模拟物可使EZH2蛋白表达水平降低。结论SNHG6在前列腺肿瘤干细胞中表达上调,干扰其表达可抑制肿瘤干细胞增殖,促进细胞凋亡,并增强肿瘤干细胞对顺铂的敏感性,其作用机制可能与靶向调控miR-26a/EZH2轴有关。