志贺菌外排泵cmr基因克隆及耐药作用

目的研究志贺菌外排泵cmr基因的耐药作用。方法以志贺菌临床多耐药株H24基因组为模板,扩增出含cmr基因的1620 bp DNA片段,将所得片段与pMD18-T载体连接,转化到大肠埃希菌DH5α中,酶切鉴定阳性克隆,对其进行序列测定并用琼脂平皿二倍稀释法对重组菌株进行药敏测试和泵抑制剂实验。结果含有志贺菌cmr基因的大肠埃希菌较不含有该大肠埃希菌对红霉素和四环素的耐药性提高1倍,并且这种耐药性提高可被质子泵抑制剂氰氯苯腙(CCCP)所抑制。结论cmr基因与志贺菌耐药株H24对红霉素和四环素的耐药性相关。

双歧杆菌插入失活载体的构建

目的构建双歧杆菌serpin基因插入失活载体,为探究双歧杆菌外膜蛋白Serpin功能做准备。方法在实验室前期构建的p MD18-T/serpin质粒中serpin基因片段的SacⅡ酶切位点插入氯霉素抗性基因cmr,构建双歧杆菌p MD18-T/serpincmr,插入失活载体。结果 PCR成功扩增出了氯霉素抗性基因cmr且测序结果正确;p MD18-T/serpin质粒经SacⅡ单酶切、去磷酸化后与cmr连接,通过菌落PCR、酶切验证和测序显示cmr已成功插入serpin基因片段中。结论成功构建了双歧杆菌serpin基因插入失活载体p MD18-T/serpin-cmr。