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不同载体微球在p300与RORγt Co-IP实验效率的比较
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作者 王秀男 滕霄 +4 位作者 刘彪 殷浩程 任翠平 刘淼 沈际佳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第11期1722-1725,共4页
目的:在免疫共沉淀(Co-IP)过程中使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获蛋白和使用Protein A/G-磁珠捕获蛋白的比较分析。方法先通过共转染Flag-p300和Myc-RORγt质粒入人胚肾细胞系293T(HEK293T)进行过表达,裂解细胞制备蛋白,分别使用Protein A... 目的:在免疫共沉淀(Co-IP)过程中使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获蛋白和使用Protein A/G-磁珠捕获蛋白的比较分析。方法先通过共转染Flag-p300和Myc-RORγt质粒入人胚肾细胞系293T(HEK293T)进行过表达,裂解细胞制备蛋白,分别使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获蛋白和使用Protein A/G-磁珠捕获蛋白进行Co-IP;再通过分离人脐血单个核细胞诱导分化人辅助性T细胞17(Th17)进行Co-IP比较分析;通过CCK8实验排除转染试剂等对细胞活性毒性。结果过表达的HEK293T细胞和诱导分化的Th17细胞中均显示腺病毒E1A结合蛋白(p300)与维甲酸相关孤儿核受体(RORγt)在Co-IP过程中使用Protein A/G-磁珠捕获大分子的p300蛋白效果好于中分子的RORγt蛋白,使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获中分子的RORγt蛋白效果好于大分子的p300蛋白。结论在Co-IP过程中使用Protein A/G-磁珠捕获大分子蛋白效果较好,使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获中分子蛋白效果较好。 展开更多
关键词 P300 维甲酸相关孤儿核受体 co-ip PROTEIN A/G-琼脂糖珠 PROTEIN A/G-磁珠
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流感病毒NP蛋白与宿主蛋白SNRPA的相互作用研究 被引量:4
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作者 张杰 罗维玉 +7 位作者 周圆 王广文 赵玉辉 周陈陈 黄山雨 李呈军 陈化兰 姜丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期167-171,共5页
流感病毒核蛋白(NP)是由病毒RNA节段5编码的主要结构蛋白,与病毒基因组RNA及聚合酶(PB1、PB2、PA)构成核糖核蛋白(vRNP)复合体,是病毒基因组的转录和复制的基本功能单位。本实验室采用酵母双杂交技术从人细胞系cDNA文库中筛选与流感病... 流感病毒核蛋白(NP)是由病毒RNA节段5编码的主要结构蛋白,与病毒基因组RNA及聚合酶(PB1、PB2、PA)构成核糖核蛋白(vRNP)复合体,是病毒基因组的转录和复制的基本功能单位。本实验室采用酵母双杂交技术从人细胞系cDNA文库中筛选与流感病毒NP蛋白相互作用的宿主蛋白U1 small nuclear ribonucleoprotein A(SNRPA)。本研究通过酵母回交验证、免疫共沉淀(Co-IP)和GST pull down试验进一步证实NP与SNRPA之间存在直接相互作用。利用siRNA干扰基因的表达后,流感病毒的复制滴度在24 h和48 h分别下降2.7倍和1.75倍,表明SNRPA蛋白表达对流感病毒的复制发挥正调控作用。本研究丰富了流感病毒蛋白与宿主蛋白之间的蛋白质调控网络,为进一步研究流感病毒复制调控的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 酵母双杂交 co-ip NP蛋白 SNRPA蛋白 相互作用
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组蛋白乙酰化酶调控MSCs经5-azaC诱导后的细胞周期和增殖特性 被引量:3
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作者 周娜 朱静 +3 位作者 田杰 张亚兰 邓兵 李娅莎 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第7期689-697,共9页
目的阐述组蛋白乙酰化酶GCN5在间充质干细胞(MSC)经5-氮杂胞苷(5-azaC)诱导过程中的作用及其转录调控机制。方法 MTT法、流式细胞术检测细胞周期和细胞增殖;定量PCR检测P21基因表达;CH IP技术验证GCN5募集蛋白复合体与P21基因的相互作用... 目的阐述组蛋白乙酰化酶GCN5在间充质干细胞(MSC)经5-氮杂胞苷(5-azaC)诱导过程中的作用及其转录调控机制。方法 MTT法、流式细胞术检测细胞周期和细胞增殖;定量PCR检测P21基因表达;CH IP技术验证GCN5募集蛋白复合体与P21基因的相互作用及P21基因启动子区域的乙酰化水平;Co-IP技术分离、串联质谱技术鉴定GCN5募集蛋白复合体组成。结果 MSCs经5-azaC诱导3 d后,G0/G1期细胞比例、P21基因表达量最高,此后逐渐降低,细胞增殖指数及G2/S期细胞比例与上述结果相反;筛选出GCN5募集蛋白复合体为:依赖ATP的染色质重塑复合体成分、转录起始复合体成分、转录因子和锌指结构蛋白;诱导组GCN5与P21基因启动子区域结合能力及P21基因启动子区域组蛋白H3乙酰化水平高于未诱导组。结论 GCN5募集蛋白复合体通过结合于P21基因启动子区域参与调控MSCs经5-azaC诱导体外分化过程中细胞周期G0/G1期和细胞增殖特性的调控。 展开更多
关键词 间充质干细胞 细胞周期 组蛋白乙酰化酶GCN5 co-ip CHIP
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全反式视黄酸通过RARγ蛋白直接调控PPARγ2蛋白抑制骨髓间充质干细胞成脂分化 被引量:3
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作者 刘祖银 李清 +2 位作者 陈丽君 陈洁 刘友学 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期682-687,共6页
目的研究高浓度全反式视黄酸(atRA)抑制大鼠骨髓间充质干细胞(r BMSCs)成脂分化过程中,视黄酸核受体γ(RARγ)对过氧化物酶体增殖激活受体γ2(PPARγ2)与CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)调控的机制。方法体外分离、培养、诱导r BMSCs。... 目的研究高浓度全反式视黄酸(atRA)抑制大鼠骨髓间充质干细胞(r BMSCs)成脂分化过程中,视黄酸核受体γ(RARγ)对过氧化物酶体增殖激活受体γ2(PPARγ2)与CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)调控的机制。方法体外分离、培养、诱导r BMSCs。成脂分化诱导液中,加入0.5、1.0μmol/L atRA持续作用15 d后,real-time PCR和Western blotting分别检测RARγ、C/EBPα、PPARγ2的mRNA和蛋白表达水平。重组腺病毒过表达RARγ(over-RARγ)、沉默RARγ(si-RARγ)分别感染BMSCs,采用real-time PCR及Western blotting检测RARγ、C/EBPα、PPARγ2的mRNA及蛋白表达水平。Co-IP检测1.0μmol/L atRA持续成脂诱导15 d后,明确RARγ与PPARγ2两者之间是否有相互作用。结果诱导15 d结束时,与对照组相比,加入0.5、1.0μmol/L atRA后,RARγ表达明显增加(P<0.01,P<0.001),而PPARγ2、C/EBPα表达明显降低(P<0.001)。over-RARγ组:RARγmRNA和蛋白表达均较对照组明显增加(P<0.01),而PPARγ2、C/EBPαmRNA和蛋白表达均较对照组明显降低(P<0.05,P<0.01)。si-RARγ组:RARγ蛋白表达较对照组明显减低,但PPARγ2、C/EBPα却无明显变化。Co-IP结果提示:RARγ与PPARγ2蛋白之间有直接作用,形成复合物,未发现其与视黄酸反应元件(RARE)相结合证据。结论高浓度atRA抑制r BMSCs成脂分化,是通过激活视黄酸信号通路RARγ而实现的。RARγ下调成脂分化通路PPARγ2、C/EBPα表达是通过直接作用于下游的PPARγ2蛋白而实现的。 展开更多
关键词 全反式视黄酸 RARγ PPARΓ2 骨髓间充质干细胞 co-ip
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伪狂犬病病毒UL56蛋白与宿主蛋白Nedd4相互作用的研究 被引量:3
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作者 王书文 吕闯 蔡雪辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期553-559,共7页
伪狂犬病病毒(PRV)UL56蛋白(pUL56)属于Ⅱ型膜蛋白。近期研究结果表明PRVpUL56与PRV对啮齿动物的致病性相关。为揭示PRVpUL56与宿主相互作用的分子基础,本研究通过免疫共沉淀(Co-IP)试验确定了pUL56与神经前体细胞表达的发育下调蛋白4(N... 伪狂犬病病毒(PRV)UL56蛋白(pUL56)属于Ⅱ型膜蛋白。近期研究结果表明PRVpUL56与PRV对啮齿动物的致病性相关。为揭示PRVpUL56与宿主相互作用的分子基础,本研究通过免疫共沉淀(Co-IP)试验确定了pUL56与神经前体细胞表达的发育下调蛋白4(Nedd4)存在相互作用。进一步,利用激光共聚焦试验确定过表达pUL56与Nedd4在转染HEK293T细胞的高尔基体存在共定位。通过互作,pUL56可以将细胞质分布的Nedd4重新定位于高尔基体。前期研究表明,含有WW结构域的宿主蛋白可以与含有PPxY(PY)基序的病毒蛋白互作。因此,本研究构建了pUL56PY基序丙氨酸突变体(PPxY/AAxY),利用Co-IP试验对pUL56突变体和Nedd4相互作用进行验证,结果表明随着pUL56PY基序突变的增加,蛋白互作能力逐渐减弱。此外,pUL56通过其PY基序显著下调Nedd4的表达。这些结果证实了PRVpUL56与Nedd4主要通过WW结构域/PY基序模式发挥相互作用,并下调Nedd4的表达。因此,本研究为阐明PRVpUL56与宿主相互作用的分子机制提供了参考依据。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 pUL56 高尔基体 co-ip 蛋白互作
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暹罗炭疽菌中脂滴包被蛋白Cap20与乙酸激酶CsAck的互作研究
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作者 王娜 王记圆 +4 位作者 李潇 张宇 刘文波 林春花 缪卫国 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2022年第3期582-588,共7页
暹罗炭疽菌(Colletotrichum siamense)是一种重要的病原真菌,是我国橡胶树炭疽病(Colletotrichum leaf disease,CLD)的田间优势病原种,也是热带、亚热带地区许多其他农林作物炭疽病的主要病原种。脂滴是细胞的中性脂,存在于绝大多数真... 暹罗炭疽菌(Colletotrichum siamense)是一种重要的病原真菌,是我国橡胶树炭疽病(Colletotrichum leaf disease,CLD)的田间优势病原种,也是热带、亚热带地区许多其他农林作物炭疽病的主要病原种。脂滴是细胞的中性脂,存在于绝大多数真核细胞中,是细胞内甘油三酯的主要贮存形式。脂滴在细胞内可以参与脂质代谢、膜转运、蛋白降解和信号传导等。包被蛋白(perilipin)是脂滴表面最丰富的脂质相关蛋白,主要存在于动植物体内,对细胞内脂滴代谢起着重要的调控作用。Cap20是暹罗炭疽菌中包被蛋白的同源蛋白,前期证实Cap20是一个致病相关蛋白,它参与了炭疽菌附着胞膨压形成、脂滴数量和致病性。了解其互作蛋白和互作的生物学意义可能为深入了解脂滴包被蛋白参与的致病分子机制具有重要意义。课题组前期通过酵母双杂交技术在暹罗炭疽菌cDNA文库中筛选到一个与Cap20互作的候选蛋白乙酸激酶,本研究克隆了该乙酸激酶的编码基因,并进行了蛋白结构和同源蛋白聚类分析。结果表明,乙酸激酶编码基因的DNA大小为1312 bp,包括一个内含子,cDNA为1248 bp,编码415个氨基酸,含有一个乙酸激酶结构域,命名为CsAck。然后构建含6×his标签的原核表达载体PET32a-CsAck,利用其和含GST标签的pGEX6p-1-Cap20(先前构建)进行蛋白表达和纯化,获得含有6×His标签的融合蛋白CsAck和含有GST标签的Cap20。通过Pull down验证了Cap20和CsAck蛋白之间的体外互作。最后,构建含有潮霉素转移酶基因HPH的表达载体PXY203-CsAck-S和含有氯嘧磺隆抗性基因ILV1的表达载体pCB1532-GFP-Cap20,将它们共同转化暹罗炭疽菌野生型菌株获得转化子。Co-IP(Co-immunoprecipitation)的结果证实Cap20和CsAck在暹罗炭疽菌中可以相互作用。该结果证实了致病性相关蛋白Cap20和乙酸激酶CsAck在体外和体内均可发生蛋白互作,可为进一步研究Cap20在暹罗炭疽菌中的致病功能和调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 暹罗炭疽菌 Cap20 CsAck 蛋白互作验证 Pull down co-ip
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RIG-G基因在酵母双杂交后的蛋白互作验证
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作者 程姗 曾庆韬 童建华 《湖北大学学报(自然科学版)》 CAS 2003年第1期73-76,共4页
RIG G基因是利用全反式维甲酸(ATRA)诱导,采用差异显示PCR方法从APL细胞系NB4中克隆到的一个新基因.采用酵母双杂交的方法筛到了与RIG G发生相互作用的JAB1.由于在酵母这种低等真核细胞中缺少诸如高等真核细胞中各种保证蛋白正常生物学... RIG G基因是利用全反式维甲酸(ATRA)诱导,采用差异显示PCR方法从APL细胞系NB4中克隆到的一个新基因.采用酵母双杂交的方法筛到了与RIG G发生相互作用的JAB1.由于在酵母这种低等真核细胞中缺少诸如高等真核细胞中各种保证蛋白正常生物学功能发挥所必需的翻译后修饰,这种方法筛到的阳性克隆并不一定代表了真实的作用,所以在COS7细胞中采用了CO IP(co immunoprecipitation)实验,间接法、直接法均证实了这种相互作用. 展开更多
关键词 RIG-G基因 差异显示 PCR 酶母双杂交 co-ip 高等真核水平 COS7
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GALNT14与MT2A相互作用验证
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作者 左涛 刘学敏 +2 位作者 单金帅 汤静珍 吴琛 《河北大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2016年第1期65-71,共7页
利用免疫共沉淀(Co-IP)和蛋白沉降实验(GST pull-down),分别从体内外对N-乙酰氨基半乳糖转移酶(GALNT14)与金属硫蛋白2A(MT2A)之间的相互作用进行了验证.将MT2A全长c DNA片段克隆到p ET-Dsb A和p CMV-Myc载体上.表达并纯化了His-Dsba-M... 利用免疫共沉淀(Co-IP)和蛋白沉降实验(GST pull-down),分别从体内外对N-乙酰氨基半乳糖转移酶(GALNT14)与金属硫蛋白2A(MT2A)之间的相互作用进行了验证.将MT2A全长c DNA片段克隆到p ET-Dsb A和p CMV-Myc载体上.表达并纯化了His-Dsba-MT2A和GST-GALNT14蛋白,在体外通过GST pulldown技术分析,显示MT2A能与GALNT14结合,证实了二者在体外的直接相互作用.继而,共转染p CMVMyc-MT2A和p CDNA3.1-Flag-GALNT14到人乳腺癌细胞株MCF-7中,通过免疫共沉淀实验发现抗Myc抗体可以将GALNT14从细胞裂解液中沉淀下来,证实了它们在胞内的相互作用.结果显示了GALNT14和MT2A在体内外条件下能够发生直接相互作用,这为进一步明确GALNT14的功能及作用机制奠定了基础. 展开更多
关键词 N-乙酰氨基半乳糖转移酶14(GALNT14) 金属硫蛋白2A(MT2A) 蛋白沉降实验(GSTpull-down) 免疫共沉淀(co-ip)
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Interaction between fragile histamine triad and protein kinase C alpha in human non-small cell lung cancer tissues
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作者 Peng-hui Zhuang1, Zhao-hui Liu2, Xiao-gang Jiang3, Cheng-en Pan41. Department of Thoracic Surgery, the First Affiliated Hospital, Medical School of Xi’an Jiaotong University 2. Department of Anatomy and Histology & Embryology, Medical School of Xi’an Jiaotong University +1 位作者 3. Department of Genetics and Molecular Biology, Medical School of Xi’an Jiaotong University 4. Department of Geratic Surgery, the First Affiliated Hospital, Medical School of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061, China. 《Journal of Pharmaceutical Analysis》 SCIE CAS 2009年第1期57-61,共5页
Objective To investigate the interaction between fragile histamine triad (FHIT) and protein kinase C alpha (PKCα) in human non-small cell lung cancer tissues. Methods FHIT and PKCα double positive samples were scree... Objective To investigate the interaction between fragile histamine triad (FHIT) and protein kinase C alpha (PKCα) in human non-small cell lung cancer tissues. Methods FHIT and PKCα double positive samples were screened by immunohistochemical staining from 13 human non-small cell lung cancer tissues. Co-immunoprecipitation was performed by using anti-FHIT and anti-PKCα. The immune precipitate was analyzed by SDS-PAGE and Western blot. Results Immune precipitate staining detection showed that 3 samples out of the 13 cases were double positive for FHIT and PKCα. FHIT protein was present in the immune precipitate of anti-PKCα while there was PKCα in the immune precipitate of anti-FHITmAb. Conclusion FHIT and PKCα exist as a complex in human non-small cell lung cancer tissues, which will provide a new route for studying the pathogenesis and immunotherapy of human non-small cell lung cancer. 展开更多
关键词 fragile histamine triad (FHIT) protein kinase C alpha (PKCα) non-small cell lung cancer (NSCLC) co-immunoprecipitation
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植物中验证蛋白相互作用的Pull-down和Co-IP技术 被引量:4
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作者 徐重益 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期62-68,共7页
蛋白互作在细胞生命活动中发挥关键作用,在不同时空层面上参与多种细胞学过程,因此研究蛋白互作对理解分子调控网络至关重要。通常情况下,利用酵母双杂交系统筛选植物蛋白互作必须通过体外和体内系统进行验证。Pull-down和Co-IP是验证... 蛋白互作在细胞生命活动中发挥关键作用,在不同时空层面上参与多种细胞学过程,因此研究蛋白互作对理解分子调控网络至关重要。通常情况下,利用酵母双杂交系统筛选植物蛋白互作必须通过体外和体内系统进行验证。Pull-down和Co-IP是验证植物蛋白互作的常用技术。Pull-down被广泛用于体外验证蛋白间的直接互作;而在植物活体内,利用本氏烟草(Nicotiana benthamiana)叶片瞬时表达蛋白,继而通过Co-IP进行鉴定是目前验证蛋白互作最简单且最有效的方法之一。该文对GST Pull-down和烟草瞬时表达系统中Co-IP技术原理及实验方案进行详细描述,以期为验证植物蛋白互作提供参考。 展开更多
关键词 植物 蛋白互作 Pull-down co-ip
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鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞与YY1互作的差异蛋白鉴定
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作者 丁文一 安志远 《生物技术》 CAS 2023年第1期9-13,共5页
[目的]鉴定鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞前后与YY1互作的差异蛋白。[方法]用脂质体转染法在HeLa细胞中过表达YY1;之后用Co-IP技术捕获与YY1相互作用的蛋白质;最后利用高效液相色谱质谱联用技术鉴定互作差异蛋白。用GO注释和KEGG分析预测蛋... [目的]鉴定鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞前后与YY1互作的差异蛋白。[方法]用脂质体转染法在HeLa细胞中过表达YY1;之后用Co-IP技术捕获与YY1相互作用的蛋白质;最后利用高效液相色谱质谱联用技术鉴定互作差异蛋白。用GO注释和KEGG分析预测蛋白质的功能。[结果]经Co-IP和蛋白银染发现鲍曼不动杆菌感染组和YY1捕获组与IgG组比较在45~55 kDa和70~100 kDa处有明显的差异条带;质谱结果显示YY1捕获组的特有蛋白有81个,GO注释和KEGG分析表明这些差异蛋白定位于细胞核及核膜,具有RNA结合功能,主要参与了RNA剪切的生物学过程;与IgG组和YY1捕获组比较在鲍曼不动杆菌感染组中获得了SFRS4、CPSF2、LUC7L2和U2AF65这些差异蛋白。GO注释和KEGG分析表明这些差异蛋白定位于细胞核散斑,具有RNA结合功能,主要参与了mRNA剪切和核输出的生物学过程。[结论]鲍曼不动杆菌感染的HeLa细胞中与YY1作用的蛋白均参与了RNA剪切过程,提示鲍曼不动杆菌很可能利用这些蛋白来调节YY1,为进一步研究鲍曼不动杆菌与YY1的相互作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 转录因子YY1 co-ip/MS技术 HELA细胞 生信分析
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高脂、禁食条件下CIDEC互作蛋白的分析
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作者 崔涵 靳艺 +3 位作者 杨冉冉 李一星 邹知明 周磊 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期3241-3248,共8页
脂肪过度沉积是引起肥胖的最主要原因。脂肪沉积水平受到脂肪代谢的影响。CIDEC是近年研究新发现的一种脂肪滴结合蛋白,是调控脂肪滴发育和脂肪沉积的关键因子。本研究以小鼠为动物模型,采用Co-IP和质谱分析等实验方法,从蛋白功能、亚... 脂肪过度沉积是引起肥胖的最主要原因。脂肪沉积水平受到脂肪代谢的影响。CIDEC是近年研究新发现的一种脂肪滴结合蛋白,是调控脂肪滴发育和脂肪沉积的关键因子。本研究以小鼠为动物模型,采用Co-IP和质谱分析等实验方法,从蛋白功能、亚细胞定位、GO、KEGG功能及其富集度等方面解析CIDEC在高脂和禁食条件下互作蛋白的差异,为理解CIDEC感应机体能量状态的分子机制,及在不同生理条件下的信号传导和功能转换提供实验依据。 展开更多
关键词 肥胖 CIDEC co-ip 互作蛋白 质谱
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宿主细胞蛋白HSPA2与TGEV Nsp2的相互作用及其对病毒复制的影响 被引量:2
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作者 王亚楠 韩露露 +7 位作者 孙傲颖 姜艳平 崔文 乔薪瑗 唐丽杰 徐义刚 李一经 王丽 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第21期1-6,14,175,共8页
为了探究猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)非结构蛋白2(Nsp2)与宿主细胞热休克蛋白70-2(HSPA2)的相互作用,以及HSPA2表达对TGEV复制的影响,试验利用RT-PCR方法获得猪源HSPA2基因并构建其真核表达载体pCMV-... 为了探究猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)非结构蛋白2(Nsp2)与宿主细胞热休克蛋白70-2(HSPA2)的相互作用,以及HSPA2表达对TGEV复制的影响,试验利用RT-PCR方法获得猪源HSPA2基因并构建其真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2,通过Western-blot和间接免疫荧光试验检测真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2在IPEC-J2细胞中的表达情况。利用免疫共沉淀(Co-IP)和共定位试验进一步验证TGEV Nsp2和宿主细胞蛋白HSPA2之间是否存在相互作用,利用基因过表达技术在IPEC-J2细胞中过表达HSPA2后接种TGEV,分别测定接种后36,48小时时病毒TCID50。结果表明:真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2能够在IPEC-J2细胞中成功表达,HSPA2与Nsp2之间存在相互作用,并且HSPA2表达量升高后TGEV的TCID50略有升高。说明宿主细胞蛋白HSPA2与TGEV Nsp2之间存在相互作用,且HSPA2的表达对TGEV复制具有一定促进作用。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus TGEV) 热休克蛋白70-2(HSPA2) 蛋白互作 病毒复制 免疫共沉淀(co-ip) 真核表达
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HAX1 deletion impairs BCR internalization and leads to delayed BCR-mediated apoptosis 被引量:1
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作者 Susanne Wolkerstorfer Elisabeth Schwaiger +4 位作者 Mark Rinnerthaler Iris Karina Gratz Thomas Zoegg Hans Brandstetter Gertrude Achatz-Straussberger 《Cellular & Molecular Immunology》 SCIE CAS CSCD 2016年第4期451-461,共11页
Deletion of HAX1 in mice causes a severe reduction in the numbers of lymphocytes in the bone marrow and in the spleen. Additionally, B220+ B progenitor cells in the bone marrow are reduced, suggesting an important fu... Deletion of HAX1 in mice causes a severe reduction in the numbers of lymphocytes in the bone marrow and in the spleen. Additionally, B220+ B progenitor cells in the bone marrow are reduced, suggesting an important function of HAX1 in B cell development. HAX1 is thought to play a protective role in apoptotic processes; therefore, we investigated the role of HAX1 in bone marrow B progenitor cells and splenic B cells. We did not observe an effect on the survival of Hax1-/- bone marrow cells but detected enhanced survival of splenic Hax1-/- B cells upon in vitro starvation/ growth-factor withdrawal. To explain this apparent inconsistency with previous reports of HAX1 function, we also studied the B cell receptor (BCR)-induced apoptosis of IgM-stimulated splenic naive B cells and found that apoptosis decreased in these cells. We further found impaired internalization of the BCR from Hax1-/- splenic B cells after IgM crosslinking; this impaired internalization may result in decreased BCR signaling and, consequently, decreased BCR-mediated apoptosis. We measured HAX1 binding to the cytoplasmic domains of different Ig subtypes and identified KVKWI(V)F as the putative binding motif for HAX1 within the cytoplasmic domains. Because this motif can be found in almost all Ig subtypes, it is likely that HAX1 plays a general role in BCR-mediated internalization events and BCR-mediated apoptosis. 展开更多
关键词 VIABILITY apoptosis INTERNALIZATION BCR surface plasmon resonance analysis (SPRA) wild type (WT) B cellreceptor (BCR) co-immunoprecipitation co-ip room temperature (RT) annexin V(A) eFluor (eF)
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Global Profiling of 2-hydroxyisobutyrylome in Common Wheat
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作者 Ning Zhang Lingran Zhang +5 位作者 Linjie Li Junyou Geng Lei Zhao Yan Ren Zhongdong Dong Feng Chen 《Genomics, Proteomics & Bioinformatics》 SCIE CAS CSCD 2022年第4期688-701,共14页
As a novel post-translational modification(PTM),lysine 2-hydroxyisobutyrylation(Khib)is considered to regulate gene transcriptional activities in eukaryotic cells;however,the functions of Khib-modified proteins in pla... As a novel post-translational modification(PTM),lysine 2-hydroxyisobutyrylation(Khib)is considered to regulate gene transcriptional activities in eukaryotic cells;however,the functions of Khib-modified proteins in plants remain unknown.Here,we report that Khib is an evolutionarilyconserved PTM in wheat and its progenitors.A total of 3348 Khib sites on 1074 proteins are identified in common wheat(Triticum aestivum L.)by using affinity purification and mass spectroscopy of 2-hydroxyisobutyrylome.Bioinformatic data indicate that Khib-modified proteins participate in a wide variety of biological and metabolic pathways.Immunoprecipitation confirms that Khibmodified proteins are present endogenously.A comparison of Khib and other main PTMs shows that Khib-modified proteins are simultaneously modified by multiple PTMs.Using mutagenesis experiments and co-immunoprecipitation assays,we demonstrate that Khib on K206 of phosphoglycerate kinase(PGK)is a key regulatory modification for its enzymatic activity,and mutation on K206 affects the interactions of PGK with its substrates.Furthermore,Khib modification of low-molecular-weight proteins is a response to the deacetylase inhibitors nicotinamide and trichostatin.This study provides evidence to promote our current understanding of Khib in wheat plants,including the cooperation between Khib and its metabolic regulation. 展开更多
关键词 Post-translational modification Lysine 2-hydroxyisobutyrylation Common wheat PROTEOMICS co-immunoprecipitation
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Co-immunolocalization of Disc1 and Gas7 protein in adult mice brain
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作者 Udaya Kumar 《Brain Science Advances》 2022年第1期70-77,共8页
Objective: The aim of the present study was to check the potential interaction of two neurodevelopmental proteins, Disc1 and Gas7, in the adult mice brain. Methods: Twenty-four male Swiss albino mice were used for the... Objective: The aim of the present study was to check the potential interaction of two neurodevelopmental proteins, Disc1 and Gas7, in the adult mice brain. Methods: Twenty-four male Swiss albino mice were used for the study. The mice were 12 weeks old in the beginning of the experiment. Immunohistochemistry and co-immunofluorescence were performed on the coronal sections of mice brain and immunoblotting and co-immunoprecipitation were done on the whole brain lysate. Results: Data from immunohistochemistry and co-immunofluorescence indicate the occurrence and co-localization of Disc1 and Gas7 proteins in soma and projections of the brain cells. Immunostaining was observed in cerebral cortex, hypothalamus, midbrain, pons, medulla oblongata and CA3 of hippocampus of the brain. The data from Immunoblotting and co-immunoprecipitation validates the presence and interaction of Disc1 and Gas7 protein in whole brain lysate. Conclusion: Data indicates the potential interaction of Disc1 and Gas7 protein in adult brain. The study highlights the need for further research on Disc1-Gas7 protein interaction in brain development and neuro-disorders. 展开更多
关键词 Disc1 Gas7 co-immunolocalization co-immuno-fluorescence co-immunoprecipitation
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