眼镜王蛇三指毒素新cDNA序列的克隆及结构分析

目的:获得眼镜王蛇中多种三指毒素的新的cDNA序列,分析其结构特征,为王蛇三指毒素基因组特征的研究及重组药物的开发奠定基础。方法:采用类似蛇种的毒素信号肽编码序列及简并引物获得部分cDNA序列,再通过3’RACE法获得多种编码成熟三指毒素的完整新cDNA序列。通过BLAST检索,利用功能软件构建系统发生进化树进行分析。结果:获得了眼镜王蛇6类三指毒素共19条新基因的cDNA序列,GenBank的接收号为DQ273567～DQ273585。这些cDNA长度都在480bp左右,彼此之间序列相似度均在70%以上,且每类毒素的cDNA都呈现高度的序列多态性。结论:通过合理的引物设计及3’RACE法成功获得了眼镜王蛇中多种三指毒素的新的编码序列。

纯化眼镜蛇毒蛋白对乙酰胆碱受体通道的阻断作用

在培养的爪蟾胚胎神经和肌肉细胞上用膜片箝技术研究了从中国华南产眼镜蛇毒分离出的神经毒组分对乙酰胆碱受体（ＡＣｈ－Ｒ）通道的影响，发现它在微终板电位和单通道水平上都有明显的阻断作用。完全阻断神经肌肉接点传递的剂量约为２０．μｇ／ｍｌ，对乙酰胆碱受体通道的半阻断量约为０．２３μｇ／ｍｌ。这表明它与α－银环蛇毒有相似功效。

中华眼镜蛇毒膜毒素-12对膀胱癌细胞侵袭、转移的抑制作用及机制

目的观察眼镜蛇毒膜毒素12(MT-12)对膀胱癌T24、RT4细胞侵袭、转移能力的影响,探讨MT-12抑制膀胱癌细胞侵袭、转移的机制。方法取T24、RT4细胞,设置空白对照组(Ctrl组)、溶媒对照组(NC组)、0. 25μg/m L组、0. 50μg/m L MT-12组,分别应用PBS、0. 1%DMSO、0. 25μg/m L MT-12、0. 50μg/m L MT-12处理细胞24h,采用细胞划痕实验测算细胞迁移抑制率以评价细胞迁移能力,采用细胞黏附实验测算细胞黏附率以评价细胞黏附能力。设置空白对照组(Ctrl组)、MT-12组、促瘤剂佛波酯(PMA)组、PMA+MT-12组,分别应用PBS、0. 50μg/m L MT-12、100 nmol/L PMA、0. 50μg/m L MT-12+100 nmol/L PMA干预细胞24 h,采用凝胶酶谱分析法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9酶活性含量,采用RT-PCR法检测细胞侵袭转移相关因子细胞间黏附因子-1(ICAM-1)、血管黏附因子-1(VCAM-1)、血管生成因子(VEGF) mRNA表达,采用ELISA法检测细胞VEGF蛋白表达。结果 T24和RT4两株细胞中,0. 25μg/m L MT-12组、0. 50μg/m L MT-12组细胞迁移抑制率、细胞黏附率均低于NC组(P均<0. 05)。T24和RT4两株细胞中,MT-12组MMP-9酶活性均低于Ctrl组(P均<0. 05),PMA组MMP-9酶活性均高于Ctrl组,PMA+MT-12组MMP-9酶活性均低于PMA组(P均<0. 05); MT-12组ICAM-1及VEGF mRNA表达均低于Ctrl组(P均<0. 05),PMA+MT-12组ICAM-1、VEGF mRNA表达均低于PMA组(P均<0. 05); PMA组VEGF蛋白表达均高于Ctrl组,PMA+MT-12组VEGF蛋白表达均低于PMA组(P <0. 05)。结论MT-12可有效抑制膀胱癌细胞T24、RT4的迁移及转移能力,其分子机制与抑制MMP-9、VEGF、ICAM-1表达有关。

眼镜蛇心脏毒一级结构和功能关系的定量分析

提出了蛋白质一级结构和功能关系的定量分析方法.通过建立结构-功能方程、和辩识取代系数、位点系数等,判断肽链中不同位点和同一位点不同氨基酸残基对生物活性的意义;推测蛋白的活性中心所在区域和位点.对24种眼镜蛇心脏毒的一级结构和半数致死量关系和19种眼镜蛇心脏毒一级结构和大鼠培养骨骼肌细胞膜去极化剂量关系的分析结果表明,眼镜蛇心脏毒的第4、10、16、29和60位对其生物活性具有重要意义;其中位于第一和第二回环上的第10、29位可能是与靶位点结合的部位.