胶原/生物活性玻璃/壳聚糖增强型复合支架

背景:生物活性玻璃/胶原复合材料具有优良的成骨活性和的生物学性能,然而其在人体环境中易降解而导致支架溃散、力学性能下降。目的:构建具有良好力学性能、抗降解性能和骨修复特性的胶原/生物活性玻璃/壳聚糖增强型复合支架。方法:以壳聚糖作为分散剂,将生物活性玻璃粉体预先在壳聚糖溶液中均匀分散,然后与胶原溶液混合,结合冷冻干燥法制备多孔胶原/生物活性玻璃/壳聚糖增强型复合骨修复支架。采用傅里叶变换红外光谱仪、场发射扫描电子显微镜、X射线衍射仪、动态生物力学试验机等对复合支架的结构和性能进行表征。结果与结论:由于壳聚糖和生物活性玻璃粉体在微酸性环境下的电荷吸引,使在壳聚糖中预分散的生物活性玻璃颗粒在复合支架中分散更均匀;壳聚糖的引入大量增加了机体中的羟基和氨基,使分子间的相互作用增强,显著提高了材料的抗压模量和强度;壳聚糖和胶原在分子尺度的混合,使胶原分子被壳聚糖包裹,降低了胶原酶对胶原分子的酶切能力,显著提高了复合支架的抗胶原酶解性;壳聚糖分子使生物活性玻璃颗粒更均匀的包裹在大分子基相中,减少了生物活性玻璃颗粒的团聚和暴露,导致复合支架在模拟体液中的矿化活性略微降低。

软骨Ⅱ型胶原和蛋白多糖变化与温阳益髓方干预的影响

背景:骨关节炎发病过程中软骨破坏以Ⅱ型胶原和蛋白多糖破坏丢失最明显,而软骨基质中的主要成分Ⅱ型胶原和蛋白多糖的质和量的改变是导致骨关节软骨退变继而发生骨关节炎的直接原因。如何逆转或者阻止此进程的发展,成为当今医学的研究重点。目的:观察温阳益髓方对兔膝骨关节炎软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达的影响,探讨其保护软骨细胞的作用机制。方法:选取9月龄新西兰大白兔96只,雌雄各半,采用伸直位石膏管型制动法进行骨关节炎造模,采用信封隐藏随机方法,分为4组:空白组(不做处理)、模型组(单纯造模)、中药组(每日灌胃"温阳益髓方"方药提取液)和西药组(每日灌胃"盐酸氨基葡萄糖"),中药组每日灌胃方药提取液24 mL/(kg·d),西药组每日灌胃24 m L/(kg·d),1次/d,持续6周。通过运用反转录聚合酶链技术,观察温阳益髓方对软骨Ⅱ型胶原和蛋白多糖的影响,并通过病理切片观察Ⅱ型胶原和蛋白多糖的染色结果。结果与结论:空白组及中药组软骨表面平整,甲苯胺蓝染色染色均匀,未见明显失染,模型组及西药组软骨表面不规则,甲苯胺蓝染色染色极度不均,表、中层失染明显;模型组蛋白多糖及Ⅱ型胶原模型组显著低于空白组(P<0.01);中药组蛋白多糖及西药组蛋白多糖高于模型组(P<0.05或P<0.05);中药组Ⅱ型胶原及西药组Ⅱ型胶原高于模型组(P<0.05);中药组蛋白多糖比西药组蛋白多糖高(P<0.05);中药组Ⅱ型胶原比西药组Ⅱ型胶原高(P<0.05)。结果说明,温阳益髓方能增加兔膝骨关节炎软骨中Ⅱ型胶原表达及蛋白多糖的水平,对维持正常胶原表型、保护关节软骨有一定的作用。

骨髓间充质干细胞条件培养液对瘢痕成纤维细胞生物活性的影响

背景:间充质干细胞移植可通过多种调节机制促进皮肤创伤修复,抑制瘢痕形成,目前多数学者认为间充质干细胞分泌的生物活性因子起主要作用。目的:观察骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞增殖能力及胶原合成的影响。方法:分离培养人骨髓间充质干细胞和增生性瘢痕成纤维细胞,制备骨髓间充质干细胞条件培养液。将12,24,48 h收集的条件培养液孵育体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞24 h,并与空白对照组比较,采用CCK-8实验检测增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性,Real-time PCR检测增生性瘢痕成纤维细胞中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达。结果与结论:与空白对照组相比较,在24 h和48 h收集的骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),对其胶原的合成也具有显著的抑制作用(P<0.01)。结果表明骨髓间充质干细胞条件培养液可通过分泌抗纤维化的生物活性因子抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原产生,为细胞疗法策略减轻瘢痕提供了新的理论支持。

响应面优化超声波快速提取鳕鱼皮中胶原蛋白的工艺研究

以冷冻阿拉斯加深海鳕鱼皮为原料,利用响应面分析法(RSM)优化超声波快速提取胶原蛋白的工艺。根据单因素试验影响因子的分析,选取pH、提取温度、超声波提取时间作为响应面分析法中的影响因子,以胶原蛋白提取率为响应值,利用Box-Behnken中心组合试验设立建立数学模型,进行响应面分析。结果表明,最优提取工艺:pH 2.0、温度35℃、超声波辅助提取时间3.5 h、酶解时间7.5h,胶原蛋白提取率达33.75%。

低浓度硫化氢对类风湿性关节病变的软骨保护

背景:类风湿性关节炎是一种常见的慢性系统性自身免疫疾病,以关节滑膜病变、骨质侵蚀为主要特征,临床上的治疗仍然比较棘手。目的:探讨外源性硫化氢对类风湿性关节炎大鼠关节病变的影响。方法:将SD大鼠分为4组:空白组、模型组、高浓度硫化氢干预组、低浓度硫化氢干预组。干预2,4周时,测量关节炎指数,血清炎症因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β水平,滑膜组织病理学变化,膝关节标本Ⅱ型胶原染色的平均吸光度值。结果与结论:从关节炎指数,血清炎症因子水平以及滑膜染色炎性浸润方面看,模型组以及硫化氢干预组均高于空白组,高浓度硫化氢干预组明显高于模型组(P<0.05),低浓度硫化氢干预组低于模型组(P<0.05)。在膝关节软骨Ⅱ型胶原染色的平均吸光度值方面,模型组以及2个硫化氢干预组均低于空白组,高浓度硫化氢干预组明显低于模型组(P<0.05),低浓度硫化氢干预组高于模型组(P<0.05)。结果可见硫化氢对类风湿关节炎症有调节作用,高浓度的硫化氢加重关节炎症及软骨降解,低浓度的硫化氢减轻关节炎症并对软骨有保护作用。

京尼平苷干预体外培养大鼠软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白的合成

背景:近年来的研究表明,中药栀子可能具有活化软骨细胞的功能,而京尼平苷是栀子中重要成分之一。目的:观察京尼平苷对体外培养大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白合成的影响。方法:体外分离培养大鼠膝关节软骨细胞,分别应用25,50及100 mmol/L京尼平苷干预,并设置正常对照组。RT-PCR和Western blot法观察京尼平苷对各组细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达的影响。结果与结论:RT-PCR和Western blot法检测结果显示,与正常对照组相比,25,50及100 mmol/L京尼平苷干预可以明显促进Ⅱ型胶原mRNA及蛋白的表达(P<0.01)。结果证实,京尼平苷可以促进大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白的合成。

壳聚糖及其复合物对小鼠成骨细胞增殖及分化的影响

目的:用含壳聚糖(chitosan,CS)、Ⅰ型胶原蛋白和重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)的培养液体外培养成骨细胞MC3T3-E1,评价3种因素对成骨细胞增殖及分化的影响。方法:实验分为4组,实验组A:CSα-MEM培养基;实验组B:CS+Ⅰ型胶原蛋白溶液的α-MEM培养基;实验组C:CS+Ⅰ型胶原蛋白溶液+rhBMP-2溶液的α-MEM培养基。对照组为含1%FBS的α-MEM培养基。采用MTT法检测加入处理因素后1、3、5、7 d的吸光度(OD)值,并绘制细胞生长曲线,观察成骨细胞的增殖情况。采用碱性磷酸酶活性测定、碱性磷酸酶染色和茜素红钙结节染色观察成骨细胞的分化作用:检测加入处理因素后1、3、5、7 d的碱性磷酸酶活性,并在细胞培养的第7天进行碱性磷酸酶染色,第14天进行茜素红钙结节染色。采用SPSS13.0软件包对所得数据进行单因素方差分析,2组之间比较采用Post Hoc检验。结果:MTT检测结果显示,实验组C的OD值高于其他组,实验组C与其他组间的两两比较具有显著差异(P<0.05)。碱性磷酸酶活性测定结果显示,实验组C的活性高于其他组,实验组C与实验组A、对照组间两两比较具有显著差异(P<0.05),与实验组B两两比较无显著差异(P>0.05)。茜素红染色和碱性磷酸酶染色结果显示,实验组C可见更多的钙盐沉积,且蓝染颗粒多于其他组。结论:壳聚糖、Ⅰ型胶原蛋白和rhBMP-2共同作用,更能促进成骨细胞的增殖与分化。

早期动脉瘤模型大鼠形成过程中血管壁基质结构蛋白的表达

背景:基质蛋白是构成血管壁的必不可少的重要成分,为血管壁的完整性和血管壁细胞发挥生理功能提供了必要的框架,并参与对细胞和平滑肌的调控。目的:构建早期动脉瘤模型大鼠评价基质结构蛋白在形成过程中的表达差异性。方法:将28只健康雄性SD大鼠随机分为2组:对照组(n=8)和模型组(n=20)。模型组大鼠以结扎左侧颈总动脉和右侧肾肾动脉致高血压方法建立脑动脉瘤模型;对照组大鼠仅暴露左侧颈动脉分叉和双侧颈动脉。模型组大鼠分别于造模后15,30 d处死,取大鼠右侧大脑前动脉和嗅动脉的分叉处部分组织进行免疫组化染色,分析纤维连接蛋白、α-平滑肌肌动蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果与结论:与对照组相比,造模后30 d时模型组大鼠右侧大脑前动脉和嗅动脉的分叉处部分中纤维连接蛋白表达水平差异无显著性意义(P>0.05),而Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白表达明显减少(P<0.05)。提示大鼠早期脑动脉瘤形成过程中的结构蛋白表达存在差异性并发生动态变化,血管壁基质结构蛋白降解是动脉瘤形成主要机制之一。

正常与退变髓核细胞形态学及Ⅱ型胶原蛋白的定量分析

背景:椎间盘退变导致椎间隙狭窄的主要变化是髓核细胞表达软骨特异性基因产物蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的减少。目的:对成人的正常与退变椎间盘髓核细胞Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光染色及番红O染色进行定量观察比较。方法:取成人脊柱侧弯患者与椎间盘突出症患者自愿者术中取出的废弃髓核组织各3例,经培养后每个患者各测量26个细胞,正常组和退变组分别测量78个细胞。对正常与退变椎间盘髓核细胞进行番红"O"染色并行灰度及测定细胞内Ⅱ型胶原蛋白行免疫荧光染色定量测定。结果与结论:免疫荧光染色显示:退变椎间盘髓核细胞仅轻度染色,染色模糊,其呈类圆形,纺锤形,梭形及不规则形,其内仅有极少量荧光颗粒;Ⅱ型胶原表达较正常髓核细胞降低显著(P<0.05)。番红O染色显示:退变的髓核细胞肿胀,细胞核肿胀染色略淡,细胞突起延长,胞浆染色不匀伴有空泡,部分细胞崩解,细胞分布零散,混乱,可见成片坏死区。与正常髓核细胞图像灰度值相比差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明退变的椎间盘髓核细胞减少、部分凋亡,其细胞内Ⅱ型胶原蛋白含量较正常髓核细胞显著减少。

胶原支架上体外三维培养成年大鼠心肌细胞

背景:前期研究中已经在Atelocollagen胶原支架培养出了具有收缩功能的乳鼠心肌细胞。目的:在Atelocollagen胶原支架上三维培养成年大鼠心肌细胞。方法:将成年SD大鼠心肌细胞经消化培养并纯化后,种植到Atelocollagen胶原支架上进行三维培养。应用倒置显微镜动态观察心肌细胞在Atelocollagen胶原支架上的生长状况;对三维培养的心肌细胞块进行冰冻切片,分别进行肌钙蛋白免疫组织化学和免疫荧光显色,对支架上生长的细胞进行鉴定。结果与结论:成年SD大鼠心肌细胞接种12h开始贴附支架生长,24h与支架汇合、紧密黏附,但心肌细胞并不产生自律性搏动,细胞之间夹杂少量崩解的细胞碎片;48h换液后支架网孔中崩解的细胞被换掉,剩下大部分细胞贴附在支架壁边缘生长。苏木精-伊红染色显示培养48h细胞与支架形成复合体。形态学鉴定证明支架网孔中生长的主要是心肌细胞。免疫组织化学和免疫荧光显色均显示在支架内生长的大部分是心肌细胞,并且紧贴支架,生长良好。

康复贴敷料对面部激光/光子术后皮肤修复作用的临床观察

目的观察胶原贴敷料对面部激光或光子术后的修复作用。方法对面部激光或光子术后患者局部贴敷胶原贴敷料,每天一次,连续7 d,后每2天1次,共计14 d。观察创伤修复时间、不良反应发生率及患者的舒适度。结果与对照组相比,试验组创面恢复时间显著缩短、不良反应减少且患者感觉舒适。结论胶原贴敷料可应用于面部点阵激光或光子术后的修复治疗。

压力性尿失禁患者尿道周围结缔组织中核心蛋白聚糖和TGF-β1 mRNA表达水平的改变

目的:探讨压力性尿失禁(SUI)患者尿道周围结缔组织中核心蛋白聚糖(DCN)和转化生长因子β1(TGF-β1) mRNA表达水平的改变及其相关性。方法将65例绝经后妇女根据是否存在SUI,分为SUI组(35例)和对照组(30例)。采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测两组妇女尿道周围结缔组织中DCN和TGF-β1 mRNA的表达水平。结果 SUI组患者DCN及TGF-β1 mRNA表达水平与对照组比较,其差异均有统计学意义,且两者间存在负相关关系。结论 SUI患者尿道周围结缔组织中TGF-β1减少及DCN的升高可能导致该部位胶原蛋白含量的减少,最终导致SUI发生的原因之一。