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F4ac型产肠毒素大肠杆菌菌液上清对仔猪小肠上皮细胞的免疫刺激作用 被引量:2
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作者 周传丽 刘铮铸 +1 位作者 俞英 张勤 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期779-785,共7页
【目的】猪源产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是一类世界范围内流行的致仔猪腹泻的病原菌。依据养猪业生产实践中对致仔猪腹泻病原菌血清学鉴定结果可知,F4ac型ETEC的流行性最为广泛。到目前为止,对ETEC导致... 【目的】猪源产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是一类世界范围内流行的致仔猪腹泻的病原菌。依据养猪业生产实践中对致仔猪腹泻病原菌血清学鉴定结果可知,F4ac型ETEC的流行性最为广泛。到目前为止,对ETEC导致仔猪腹泻的机理已经有了比较透彻的阐释。但对ETEC培养液的免疫原性尚未有研究和描述。论文以F4ac型ETEC为研究对象,探索其菌液上清(即培养液)对仔猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)的免疫刺激作用。【方法】首先收集F4ac型ETEC菌株200培养12h后的培养液,后经4℃,4 000 r/min,离心15 min收集培养液上清,将该上清液经0.22μm滤器过滤,并与DMEM/F12培养基以1﹕1的比例混合,以此混合液共孵育IPEC-J2细胞3 h,重复此处理3次获得处理组细胞;同时设新鲜的LB培养基与DMEM/F12培养基同样以1﹕1的比例共孵育3 h的IPEC-J2细胞为对照组细胞,对照处理亦重复3次。然后用TRIZOL试剂按照说明书提取对照组和攻毒组IPEC-J2细胞的总RNA,并用TaKaRa公司的PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser(反转录试剂盒)按照说明书将提取的总RNA反转录成cDNA。应用文献报道或自行设计的跨内含子的引物通过实时荧光定量PCR方法,以猪的持家基因β-actin作为内参,检测IL8、TNF-α、CXCL2、IL6、IL1A、TLR4、SLPI、PLAU和MUC13共9个免疫相关基因和黏蛋白基因在攻毒组和对照组中的mRNA表达差异性。【结果】较之对照组,在攻毒组中,3个重要的促炎细胞因子基因IL8、TNF-α和CXCL2的mRNA均出现了显著性地过表达。其中,在攻毒组中,IL8的表达量为对照组的3.24倍(P<0.05);TNF-α的表达量亦为对照组的3.24倍(P<0.01);CXCL2的表达量为对照组的1.65倍(P<0.001)。在攻毒组和对照组之间,其他6个基因(IL6、IL1A、TLR4、SLPI、PLAU和MUC13)的表达差异未达到统计学上的显著水平。【结论】研究采用F4ac型ETEC菌株200的培养液上清对IPEC-J2细胞系进行3 h攻毒处理,并通过荧光定量PCR方法检测到了3个重要的促炎因子基因IL8、TNF-α和CXCL2在攻毒组较之非攻毒组中的过表达。这表明猪F4ac型ETEC培养液上清对仔猪小肠上皮细胞确实具有一定的免疫刺激作用。研究为更明确地了解猪F4ac型ETEC释放的肠毒素及黏附素等抗原物质对仔猪小肠上皮细胞的免疫刺激作用提供了一定的实验证据。 展开更多
关键词 f4acetec 菌液上清 IPEC—J2细胞 荧光定量PCR 免疫刺激作用
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仔猪抗大肠杆菌性F4ac腹泻病分子遗传机理研究进展
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作者 张婷 廖金龙 +2 位作者 柴晶党 叶丹 欧阳婧 《安徽农业科学》 CAS 2016年第13期144-145,200,共3页
产肠毒素大肠杆菌F4ac(ETEC F4ac)是引发新生和断奶前仔猪腹泻病的最主要致病菌,分离和鉴别猪ETEC F4ac受体目的基因及因果突变位点成为猪ETEC F4ac腹泻抗病育种的关键。对仔猪抗大肠杆菌性腹泻病分子遗传机理研究进展进行综述,以期为... 产肠毒素大肠杆菌F4ac(ETEC F4ac)是引发新生和断奶前仔猪腹泻病的最主要致病菌,分离和鉴别猪ETEC F4ac受体目的基因及因果突变位点成为猪ETEC F4ac腹泻抗病育种的关键。对仔猪抗大肠杆菌性腹泻病分子遗传机理研究进展进行综述,以期为培育种猪抗腹泻病新品系奠定理论基础。 展开更多
关键词 仔猪 etec f4ac 遗传机理
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Polymorphisms of three gene-derived STS on pig chromosome 13q41 are associated with susceptibility to enterotoxigenic Escherichia coli F4ab/ac in pigs 被引量:8
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作者 HUANG Xiang 1 ,REN Jun 1 ,YAN XueMing 1,2 ,PENG QiuLing 1 ,TANG Huan 1 ,ZHANG Bo 1 ,JI HuaYuan 1 , YANG ShuJin1&HUANG LuSheng 1 1Key Laboratory for Animal Biotechnology of Jiangxi Province and the Ministry of Agriculture of China,Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045,China 2Department of Biology,Nanchang University of Science and Technology,Nanchang 330038,China 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2008年第7期614-619,共6页
Neonatal diarrhea caused by enterotoxigenic Escherichia coli(ETEC)F4 is a common and serious disease,resulting in significant economical loss in the pig industry.The locus encoding ETEC F4 receptor has been mapped to ... Neonatal diarrhea caused by enterotoxigenic Escherichia coli(ETEC)F4 is a common and serious disease,resulting in significant economical loss in the pig industry.The locus encoding ETEC F4 receptor has been mapped to pig chromosome(SSC)13q41,and one of the most significantly linked markers is S0075.In this study,we selected three genes including SLC12A8,MYLK and KPNA1 from a chromosomal region flanking S0075 on SSC13 to develop pig specific sequence tagged sites(STS). Seven single nucleotide polymorphisms were identified in the three pig STS using DNA of four full-sib susceptible and resistant animals in a White Duroc×Erhualian intercross.All grandparents,parents and 755 offspring in the intercross were genotyped for three polymorphisms,including SLC12A8 g.159A>G,MYLK g.1673A>G and KPNA1 g.306A>G.Family-based transmission disequilibrium test(TDT) revealed that all polymorphisms and the corresponding haplotypes are significantly associated with ETEC F4ab/ac(especially F4ac)brush border adhesion phenotypes,indicating that these polymor- phism are in linkage disequlibrium with causal mutation(s)of the gene encoding ETEC F4ab/ac receptor. Our results strengthen the evidence for the involvement of SSC13q41 in high acquiring risk of ETEC F4ab/ac infection,and provide novel polymorphic markers for fine mapping of the ETEC F4ab/ac receptor locus. 展开更多
关键词 PIG SSC13q41 sequence tagged sites(STS) ESCHERICHIA coli(etec)f4ab/ac SUSCEPTIBILITY
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猪13号染色体q41区的3个功能基因STS多态性与产肠毒素大肠杆菌F4ab/ac易感性相关 被引量:1
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作者 黄翔 任军 +6 位作者 晏学明 彭秋玲 唐欢 张波 季华员 杨舒瑾 黄路生 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2008年第3期271-276,共6页
由产肠毒素大肠杆菌(Escherichia coli)F4(ETEC F4)引起的断奶前仔猪腹泻病是一种常见细菌感染病,对养猪业造成了巨大经济损失.编码ETECF4ab/ac受体的位点已被定位于猪(Sus scrofa)13号染色体(SSC13)q41区域,S0075为最紧密连锁的标记之... 由产肠毒素大肠杆菌(Escherichia coli)F4(ETEC F4)引起的断奶前仔猪腹泻病是一种常见细菌感染病,对养猪业造成了巨大经济损失.编码ETECF4ab/ac受体的位点已被定位于猪(Sus scrofa)13号染色体(SSC13)q41区域,S0075为最紧密连锁的标记之一.本研究从S0075侧翼染色体区域选择了SLC12A8,MYLK和KPNA13个基因,建立猪特异性序列标签位点(STS).利用白色杜洛克×二花脸资源家系群体中的ETECF4ab/ac侵染抗性和易感个体,通过比较测序法,建立了这3个基因的STS,并鉴别到7个单核苷酸多态位点.进一步检测了白色杜洛克×二花脸资源家系群体祖代、亲本代和755头F2个体在SLC12A8g.159A>G,MYLKg.1673A>G和KPNA1g.306A>G多态位点的基因型.传递不平衡检测(TDT)分析表明:这些多态位点和相应的单倍型与ETEC F4ab/ac(特别是F4ac)刷状缘黏附表型存在显著相关,表明这些多态位点和单倍型与ETEC F4ab/ac受体的编码基因因果突变存在连锁不平衡.本研究进一步证实了SSC13q41存在ETEC F4ab/ac侵染易感性的遗传位点,为ETEC F4ab/ac受体基因的精细定位提供了新型多态标记. 展开更多
关键词 猪(Sus scrofa) SSC13q41 特异性序列标签位点(STS)etec f4ab/ac 易感性
原文传递
仔猪断奶前腹泻抗病基因育种技术的创建及应用 被引量:13
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作者 任军 晏学明 +3 位作者 艾华水 肖石军 丁能水 黄路生 《猪业科学》 2012年第1期44-48,共5页
产肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4ac造成的断奶前仔猪腹泻病是养猪生产中的常见病,给世界养猪业造成了巨大经济损失。本研究面对这一现状,通过全基因组连锁定位分析、目的区域的重组断点事件分析和远缘群体高通量SNP标记的关联性分析等严谨的... 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4ac造成的断奶前仔猪腹泻病是养猪生产中的常见病,给世界养猪业造成了巨大经济损失。本研究面对这一现状,通过全基因组连锁定位分析、目的区域的重组断点事件分析和远缘群体高通量SNP标记的关联性分析等严谨的遗传学分析手段,确定了决定仔猪ETECF4ac腹泻易感性的基因为MUC13基因,并发现了能准确鉴别易感个体和抗性个体的分子标记(准确率>97%),相关研究论文已分别发表于相关国际专业学术期刊,由此首次在国际上创建了高精准度的断奶前仔猪腹泻抗病育种新技术,并利用所创建的分子育种新技术进行大面积推广应用,实现了我国种猪遗传改良研究的重要自主创新。 展开更多
关键词 etec f4ac 仔猪腹泻 MUC13基因 抗病育种
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