毒素蛋白ColicinE1与磷脂膜相互作用的荧光光谱研究临界摩尔比的测定

磷脂－蛋白相互作用的临界摩尔比是研究膜脂－蛋白相互作用的重要参数．本文利用荧光光谱技术首次测定了毒素蛋白ＣｏｌｉｃｉｎＥ１在不同条件下与不同磷脂膜相互作用的临界摩尔比并通过临界摩尔比的变化讨论了插膜蛋白与磷脂膜相互作用的规律。

A new enzymatic method for determination of E. coli

beta-Galactosidase, a kind of endoenzyme in E. coli cells. can be released by the pore-forming action of colicin El. and E. coli can be detected rapidly by enzymatic method.

5种大肠埃希氏菌Col质粒接合传递实验研究

以5种61株Col^+大肠埃希氏菌为供体,与受体E.Coli K_(12)进行接合实验,结果有16株供体菌的Col质粒传递给K_(12),占25.4％。其中NPEC、ETEC、EPEC、EIEC、EAEC的传递比率分别是8/22、 4/21、2/15、1/2、1/1。按传递方式分类,52株耐药供体菌有10株的Col质粒和耐药标记(或R质粒)发生共同传递,占19.2％,伴发Col质粒传递的耐药标记有8种,其中TC、SM、COS、KM的并发传递率较高(16—20％)。不同耐药标记菌株的Col质粒传递率范围在0—66.7％。在8株敏感菌和1株耐药菌中有6株Col质粒发生单独传递,占66.7％。实验发现4个配对组的Col质粒和R(r)质粒发生分离而独自传递。本文分析了Col质粒传递方式和耐药性的关系,同时讨论了接合传递的不同方法。为阐明和研究R^+Col^+肠道菌的演变及其对正常菌群生态平衡的影响提供遗传学依据。

融合大肠杆菌素DNA结合域的Taq DNA聚合酶的性质表征

Taq DNA聚合酶发现自水生热栖菌(Thermus aquaticus),是一种同时具有逆转录酶活性以及DNA聚合酶活性的工具酶。Colicin E(简称CE)蛋白质是一类以维生素受体BtuB为跨膜受体的大肠杆菌素,其中CE2、CE7、CE8和CE9是非特异性的DNase型大肠杆菌素。Taq DNA聚合酶由5′→3′核酸外切酶结构域、3′→5′核酸外切酶结构域以及聚合酶结构域组成。缺失5′→3′核酸外切酶结构域的Taq DNA聚合酶(ΔTaq)具有更高的产量,但是其进行性很低,无法扩增长片段。为了提高ΔTaq的进行性,本研究融合dCE和ΔTaq,发现dCE-ΔTaq的进行性相比于Taq DNA聚合酶和dCE-Taq显著提升,并且其逆转录酶活性也比ΔTaq更高。dCE8-ΔTaq的提升最明显,不仅能够1 min内扩增8 kb的DNA片段,并且产量高于其他突变体。综上所述,本研究通过将ΔTaq DNA聚合酶和dCE进行融合,提升了Taq DNA聚合酶的PCR效率和逆转录活性,为改造Taq DNA聚合酶提供了新的方法,有望开发出性质更好的Taq DNA聚合酶。