中华鳖粉胶原蛋白不同提取方式的比较与理化表征

为减少水产品资源流失,提高鳖类产品附加值,该文以中华鳖粉为原料,分别采用柠檬酸、胃蛋白酶、酸性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶等方法提取酸溶性胶原和酶溶性胶原,探究鳖源胶原蛋白原料的应用价值。使用氨基酸自动分析仪、扫描电子显微镜、SDS-PAGE凝胶电泳、傅里叶红外光谱仪、气相-质谱联用仪、差式量热扫描仪对胶原蛋白的氨基酸、二级结构、挥发性物质、热稳定性等理化指标进行测定。结果表明,5种胶原蛋白均具有I型胶原特征,且纯度较高,但不同方法间提取效率存在差异。其中,胃蛋白酶溶性胶原蛋白具有较高的提取率与热稳定性,具有亚氨基酸含量高、蛋白交联程度好、气味物质少等优势,在食品与医药领域具有较好的应用前景,为后续鳖源胶原的提取与应用提供了理论基础。

复方胶原蛋白肽粉对皮肤慢性紫外线损伤小鼠的改善作用及机制研究

目的:观察复方胶原蛋白肽粉对小鼠皮肤慢性紫外线损伤的改善作用,并探讨其作用机制。方法:ICR雌性小鼠随机分成正常组、模型组、复方胶原蛋白肽粉组、鱼胶原蛋白肽组。使用紫外光疗仪模拟日光照射小鼠背部皮肤建立皮肤慢性紫外线损伤模型。每周对小鼠皮肤表观进行评分,每3周拍照记录一次小鼠皮肤外观,9周后采用干燥法测定小鼠皮肤含水量;苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠皮肤组织病理形态学变化;采用FRAP法检测小鼠皮肤组织中总抗氧化能力(T-AOC)水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测皮肤组织中I型胶原蛋白(Col I)、弹性蛋白(ELN)、透明质酸(HA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、糖基化终末产物(AGEs)水平;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测皮肤组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、转化生长因子β受体2(TGF-βR2)、Smad2、Smad3、Smad7蛋白表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测皮肤组织中TGF-β1、TGF-βR2、Smad2、Smad3、Smad7 mRNA表达水平。结果:与模型组比较,复方胶原蛋白肽粉组小鼠皮肤皱纹减少,无表皮损伤,宏观等级评分极显著降低(P<0.01),皮肤组织病变程度减轻;皮肤组织含水量极显著升高(P<0.01);皮肤组织T-AOC水平极显著升高(P<0.01);皮肤组织中Col I、ELN、HA、GSH-Px、SOD水平极显著升高(P<0.01),MDA、AGEs水平极显著降低(P<0.01);皮肤组织的TGF-β1、TGF-βR2、Smad2、Smad3蛋白及m RNA表达显著升高(P<0.05),Smad7蛋白及mRNA表达极显著降低(P<0.01)。结论:复方胶原蛋白肽粉可有效改善小鼠皮肤慢性紫外线损伤,其机制可能与减轻氧化应激反应,调控TGF-β1/Smads信号转导增加细胞外基质合成有关。

深海鱼皮胶原低聚肽粉对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响

[目的]探讨深海鱼皮胶原低聚肽粉对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响.[方法]采用MTT法检测不同质量浓度深海鱼皮胶原低聚肽粉对肝癌HepG-2细胞增殖的影响;应用HE染色法观察不同质量浓度深海鱼皮胶原低聚肽粉对肝癌HepG-2细胞形态的影响;采用Annexin/PI双染法检测深海鱼皮胶原低聚肽粉对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响;采用PI单染法检测深海鱼皮胶原低聚肽粉对肝癌HepG-2细胞周期的影响.[结果]MTT法检测结果显示,深海鱼皮胶原低聚肽粉呈时间和剂量依赖性地抑制肝癌HepG-2细胞的增殖(P<0.01),当药物质量浓度为40 g/L、作用时间为48 h时HepG-2细胞抑制率为49.93%,接近半数抑制质量浓度.HE染色结果显示,与对照组比较,深海鱼皮胶原低聚肽粉各剂量组肝癌HepG-2细胞间距增大、细胞核固缩、细胞膜皱缩,呈现典型的凋亡形态,且随着剂量的增加凋亡现象更为显著.Annexin/PI双染法检测结果显示,与对照组比较,深海鱼皮胶原低聚肽粉各剂量组细胞凋亡率均显著升高(P<0.05,P<0.01).PI单染检测结果显示,深海鱼皮胶原低聚肽粉可使肝癌HepG-2细胞阻滞在S期.[结论]深海鱼皮胶原低聚肽粉可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡,其作用机制认为可能与细胞周期阻滞有关系.

玉屏风散对紫外线照射的人皮肤成纤维细胞胶原蛋白合成的影响

目的探讨玉屏风散(Yupingfeng Powder,YPF)通过核转录因子NF-E2相关因子2/抗氧化反应元件(nuclear factor erythroid 2-related factor 2/antioxidant response element,Nrf2/ARE)信号通路对紫外线照射的人皮肤成纤维细胞胶原蛋白合成的影响。方法体外培养人皮肤成纤维ESF-1细胞,紫外线照射建立细胞老化模型,MTT法检测各组细胞活力,比色法、蛋白免疫印迹法检测胶原合成。结果与紫外线组相比,YPF组的细胞活力、羟脯氨酸含量和胶原蛋白含量显著增加,同时也显著增加胶原蛋白I(Collagen I)、胶原蛋白Ⅲ(CollagenⅢ)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(metalloproteinase tissue inhibitor-1,TIMP-1)、金属蛋白酶组织抑制剂-2(metalloproteinase tissue inhibitor,TIMP-2)、Nrf2/ARE信号通路蛋白表达,降低基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase 1,MMP-1)蛋白表达。与UV+YPF-H+siRNA组相比,UV+YPF-H+Nrf2 siRNA组的细胞活力、羟脯氨酸含量和胶原蛋白含量及Nrf2、Collagen I、CollagenⅢ、TIMP-1、TIMP-2蛋白表达降低,MMP-1蛋白表达增加。结论玉屏风散通过抑制Nrf2/ARE信号通路促进紫外线照射的ESF-1细胞胶原蛋白合成。

不同配料及发酵剂对发酵香肠品质特性的影响

胶原蛋白和燕麦都是具有良好保健价值和营养价值的健康食品,把二者加入到猪肉香肠中,并使用复合发酵剂进行发酵,考察其对香肠品质特性的影响。经过对各个样品进行pH值、水分含量等理化指标测定以及感官评定,在单因素实验与正交实验的基础上得到最佳的制作工艺是:在原料猪肉中加入一定量调料及香辛料,添加10%燕麦粉及6%胶原蛋白粉(型号1000-S-01),接种4%复合发酵剂(乳酸菌∶酵母菌为1∶2)后,于30℃环境中发酵13h,在60℃环境中干燥2h后150℃烤30min左右至熟。所得产品色泽红润,组织紧密,口感细腻,有烤肠特有滋味,发酵香味浓郁,咸中带甜,酸度适中。复合发酵剂的使用可使发酵香肠的质量提高,色泽、风味改善,生产周期缩短,而胶原蛋白的添加可提高发酵香肠的弹性和嫩度。

利用高分辨质谱鉴定鱼胶原蛋白粉中的鱼源性成分

目的建立高分辨质谱鉴定鱼胶原蛋白粉中的鱼源性成分的分析方法。方法采用高分辨质谱对酶解后的胶原蛋白粉中的肽段进行全扫描分析,通过Max Quant软件分析比对,鉴定其中的成分来源。结果在市场上随机购买的四种胶原蛋白粉(肽)有三种均不同程度混有其他物种来源蛋白和其他蛋白,只有一种是纯鱼源性胶原蛋白。结论本方法对胶原蛋白中的成分来源成功进行了鉴定,为胶原蛋白的市场监督提供了高效、有力的技术支撑。

饲料用胶原蛋白粉的制备及应用研究进展

饲料用胶原蛋白粉是利用制革工业副产品皮革渣、皮革屑、皮角废料等为原料,经过碱水解并脱铬处理后生产的新型高蛋白质饲料。本文介绍了饲料用胶原蛋白粉的制备方法、营养成分,并对其应用前景作了概述。

鱼胶原蛋白粉的制备及其对人体皮肤水分调节作用的安全有效性

以冰冻鱼皮为原料,制备鱼胶原蛋白粉,其主要工艺包括切碎、去除非胶原蛋白、提取、均质、浓缩、酶解、干燥等过程,并进行了人体试食的安全性与功能性研究。选取30～50岁女性自愿受试者,分为对照组与实验组,对照组50人,受试组51人。实验采用双盲法,受试组与对照组均按3g/d服用鱼胶原蛋白粉或者安慰剂,连续40d,进行了一般性安全性与皮肤水分调节的功能性观察。结果发现,试食组和对照组组间对照、试食组食用前后自身对照皮肤水分有显著差异(p<0.05),具有显著的改善皮肤水分作用。体重、血压、心率、尿常规、大便常规、血常规及生化指标未见明显异常变化,未观察到明显过敏及其它不良反应,说明服用鱼胶原蛋白粉是安全有效的。

胶原降解物-三聚氰胺复合物及粉粒性能

为了使铬革屑再生资源化,用碱法从铬革屑提取胶原降解物并与三聚氰胺共缩聚制得复合物(degraded collagen-melamine compound,CMC)。通过原料分次加入可控制CMC中游离甲醛含量。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)测得CMC分子量主要分布在15~25 k Da,相对分子质量较原料大,游离氨基减少;SEM测得CMC粉体平均粒径明显大于胶原降解物,但仍保持胶原降解物原有缔合的颗粒形貌;CMC颗粒的热熔温度为≥120℃。在pH 7~8,CMC水分散液中平均粒径约为125 nm,分布较窄;电位分析仪测得分散液等电点为pH 4~5。分析结果表明了CMC粉料特有的性能及潜在的应用前景。

参麦开肺散对降低肺纤维化小鼠胶原生成的影响

目的：利用博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型研究参麦开肺散对胶原生成的影响。方法：将6～8周龄C57BL/6小鼠单次气管灌注浓度为2.5 mg·kg-1的博莱霉素，建立肺纤维化模型；24只小鼠随机平均分为预防组和治疗组，两组分别包括对照组、模型组和药物组。从小鼠肺组织病理切片、肺组织胶原含量、胶原基因表达量、细胞外基质基因表达量等4个方面研究参麦开肺散在缓解肺纤维化过程中对胶原生成的影响。结果：无论是预防组还是治疗组，对照组中小鼠肺组织均无明显病理变化，模型组小鼠肺泡结构破坏，炎症细胞浸润，并有大量以胶原为主的细胞外基质沉积，表现出了严重的纤维化病变。经过药物治疗，小鼠肺泡结构接近正常，且细胞外基质沉积现象明显缓解；实时定量PCR结果显示，模型组小鼠肺组织中胶原基因Col1a1、Col1a2、Col3a1表达量显著升高，喂食药物后，胶原基因表达量大幅度下调。此外，模型组中细胞外基质基因如Ctgf、Fn1、Sparc、Tgf-β1的表达量相对于对照组均有所升高，而喂食药物之后其表达量均有所下调。结论：参麦开肺散通过降低相关纤维化基因如Ctgf、Fn1、Sparc、Tgf-β1的表达而有效减少胶原的生成，缓解纤维化进程。

黑木耳粉对矽肺大鼠肺内胶原合成的影响及其抗氧化应激机制

目的:探讨黑木耳粉对染矽尘大鼠肺组织胶原合成的抑制作用及其对抗氧化物酶活性和脂质过氧化水平的影响。方法:将80只Wister大鼠随机分为阴性对照组、染矽尘组、黑木耳粉干预高、中、低剂量组共5个组,每组16只,采用非暴露式气管插管方法给大鼠染二氧化硅(SiO2)粉尘,以喂饲途径给予黑木耳粉,分别于第14、56 d时,采用HE染色对矽肺纤维化病变进行形态学观察,采用羟脯氨酸(HYP)测定法对矽肺大鼠肺内胶原含量进行检测,分别采用硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化酶法测肺内丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:14 d时,黑木耳粉各剂量组与染矽尘组相比,病理形态改变有不同程度的减轻,病理分级减轻1/2级,HYP含量均低于染尘组,高、中剂量组与染尘组比较差异有统计学意义(P<0.05),SOD活性各剂量组均高于染尘组(P<0.05),MDA含量各剂量组均低于染尘组,高、中剂量组与染尘组比较差异有统计学意义(P<0.05);56 d时,黑木耳粉各剂量组比染矽尘组病理形态改变均有所减轻,病理分级减轻1/2级,黑木耳粉高剂量组HYP含量仍明显低于染尘组(P<0.05),高剂量组SOD活性仍明显高于染尘组(P<0.05),且MDA含量仍明显低于染尘组(P<0.05)。结论:黑木耳粉能够明显降低矽肺大鼠肺内胶原蛋白的含量,对矽肺组织纤维化有一定的阻抑作用,其机制可能是通过提高抗氧化物酶SOD的活力、减轻脂质过氧化损伤,提高机体的抗氧化损伤能力而发挥抗肺纤维化作用。

牙本质陶瓷粉、非胶原蛋白及其复合材料对修复性牙本质形成作用的研究

目的 :观察牙本质陶瓷粉 (ceramicdentinpowder,CDP)、CDP与非胶原蛋白 (noncollagenouspro teins,NCPs)复合材料 (CDP/NCPs)对修复性牙本质形成的作用。方法 :牙本质粉煅烧后与人牙本质NCPs复合 ,用SD大鼠牙作直接盖髓实验 ,并用组织学方法评价修复性牙本质形成的效果。结果 :术后 14d ,CDP组 :穿髓下方可见少许成牙本质细胞。CDP/NCPs组 :穿髓孔周围见成纤维细胞增殖 ,呈团块状包绕穿髓孔。术后 2 8d ,CDP组 :穿髓下方可见少量修复性牙本质团块形成。CDP/NCPs组 :可见大量修复性牙本质形成。结论 :CDP/NCPs能促进大鼠牙体、牙髓组织修复。

羧基化胶原纤维吸附剂对Cr(Ⅲ)的吸附性能研究

以乙醛酸为改性剂对胶原纤维进行羧基化改性,制备羧基化胶原纤维吸附剂,并以铬粉溶液为处理对象,对比研究了羧基化改性前后胶原纤维吸附剂对Cr(Ⅲ)的吸附性能。通过单因素试验分别考察了温度、时间、pH、吸附剂用量、铬液初始浓度及盐离子(Na+、Ca2+)浓度对吸附过程的影响,结果表明:羧基化改性后胶原纤维对Cr(Ⅲ)的吸附能力比改性前提高了74.13%,吸附的佳pH值及温度分别为4.5和45℃,溶液中Na+、Ca2+离子的存在会对吸附过程产生抑制作用,并且随着其离子浓度的增加,抑制作用增强。

复合胶原蛋白粉对肉仔鸡生长性能及肉品质的影响

选用1日龄艾维茵肉仔鸡180只,随机分为3组,对照组,饲喂不含复合胶原蛋白粉的日粮,试验1用复合胶原蛋白粉替代日粮中一半豆粕,试验2用复合胶原蛋白粉替代日粮中全部豆粕。分析测定试验的生长发育指标屠宰指标及肉质指标结果,与对照组相比一半替代组,肉仔鸡末重、日增重、日采食量分别提高15.74%(P<0.01)、2.59%(P>0.05)、13.90%(P<0.01),全部替代组三指标有所降低,但差异不显著(P>0.05);实验组屠宰率、全净膛率、胸肌率、腿肌率均以一半替代组为最高;腹脂率以一半替代组为最低其它指标差异不显著;各试验组胸肌及腿肌差异均不显著(P>0.05);除全部替代组胸肌中蛋白含量比对照组相提高了4.24%(P<0.05)除外,其它各指标在各组间均无显著差异(P>0.05)。表明用复合胶原蛋白粉替代肉仔鸡日粮中一半豆粕可以提高科技转化率和生长性能。

芎附散对脾虚痹证(类风湿性关节炎)模型的影响

目的观察芎附散对脾虚基础上诱发痹证(类风湿性关节炎)小鼠模型的影响。方法选择DBA小鼠,胶原诱导性关节炎(CIA)作为痹证模型,以大黄泻下加饥饱失常造成脾虚模型,在此基础上加以型胶原(C)诱发脾虚痹证(类风湿性关节炎)的模型,用芎附散及雷公藤多苷进行治疗。观察小鼠体重、关节肿胀程度及病理学改变,用酶联免疫吸附法测定各组小鼠血清中抗C抗体、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及干扰素-γ(IFN-γ)含量的变化。结果痹证组、脾虚痹证组动物体重减轻,关节肿胀加剧,膝、踝关节病理学改变明显,INF-α及IFN-γ含量增高,血清中抗C抗体含量升高,以脾虚痹证组明显,与痹证组比较差异有显著性意义(P<0.01),芎附散能显著减轻上述改变。结论该模型是研究痹证(类风湿性关节炎)机制较理想的动物模型之一,芎附散对该模型有明显的治疗作用。

皮胶原蛋白粉/低密度聚乙烯的复合性能研究

采用熔融挤出的方法制备得到胶原蛋白/低密度聚乙烯复合材料,并研究了抗氧剂1010(K1010)和交联剂过氧化二异丙苯(DCP)的加入对复合材料性能的影响。结果表明:当加入10%(wt,质量分数,下同)胶原蛋白和0.5%K1010时,复合材料力学性能有一定降低,但热稳定性能和加工流动性能得到明显改善,起到增塑作用;胶原蛋白添加量为10%,DCP含量为2%时,聚乙烯发生了部分交联,拉伸强度达到最大值18.187MPa,断裂伸长率达到最大值246.05%,热稳定性能也有明显增强。

参麦开肺散对NIH/3T3成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的探讨参麦开肺散对NIH/3T3成纤维细胞(FB)增殖及体外纤维化细胞模型胶原合成的影响。方法NIH/3T3 FB常规培养后分为正常对照组、模型组和处理组,正常对照组加入含1%胎牛血清(FBS)的细胞培养液500μl,模型组加入使用含1%FBS细胞培养液配制的5 ng/mlβ型转化生长因子(TGF-β)溶液500μl,处理组加入含5 ng/ml的TGF-β+1 mg/ml的参麦开肺散混合溶液500μl,培养24 h。分别采用实时定量聚合酶链反应(PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)和Sircol assay检测细胞内胶原及细胞外基质(ECM)相关基因表达水平、Ⅰ型胶原表达情况以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量。结果参麦开肺散显著降低胶原及其相关基因、Ⅰ型胶原蛋白的表达以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量(P<0.05,P<0.01)。结论参麦开肺散可明显抑制TGF-β诱导的NIH/3T3 FB胶原的合成,其发挥抗纤维化作用可能与其抑制FB增殖及胶原合成相关。

儿童专用型羊骨胶原多肽速溶粉的研制

以奶粉、豆粉为基料,在添加羊骨胶原多肽的同时,适当添加各种蔬菜粉、燕麦粉及其他辅料,生产儿童专用型羊骨胶原多肽速溶粉。以单因素试验和正交试验为主要研究方法筛选最优配方。结果表明:儿童型羊骨胶原多肽速溶粉的配方I(按100 g产品计算)为:17.58 g豆粉+9.48 g奶粉+5.40 g胡萝卜粉+2.70 g菠菜粉+2.70 g南瓜粉+8.10 g山楂粉+6.50 g白砂糖+7.50 g羊骨胶原多肽+41.10 g燕麦粉。配方II(按100 g产品计算)为:27.18 g豆粉+14.63 g奶粉+8.38 g胡萝卜粉+4.18 g菠菜粉+4.18 g南瓜粉+0.33 g木糖醇+0.18 g柠檬酸+7.50 g羊骨胶原多肽+33.45 g燕麦粉。经检测,配方I、II中钙(mg/(100 g))含量分别为1 044.5和1 929.8。

碱性蛋白酶制备高水解度羊骨胶原肽的工艺研究

为改善骨胶原的营养和生理功能,优化羊骨粉的碱性蛋白酶水解工艺,制备高水解度的胶原多肽,以邻苯二甲醛法测定水解度,在单因素试验基础上,采用响应面分析法,建立了水解度与料水比(X1)、温度(X2)、时间(X3)、加酶量(X4)的二次多项回归数学模型,方差分析结果表明此模型拟合度高。对模型最优解适当调整,X1、X2、X3、X4分别为9%(W/V)、45℃、325min和4.25%(E/S),pH9条件下酶解,测得水解度为28.12%,接近预测值28.39%,进一步说明所建模型可靠,可对不同条件下的水解度进行预测,为羊骨的高值化、安全化利用提供理论依据。

牙本质陶瓷粉、TGF-β、NCPs及复合材料直接盖髓后对牙髓细胞的促进作用

目的 :观察牙本质陶瓷粉 (ceramicdentinpowder,CDP)、复合转化生长因子 (transforminggrowthfactors -TGF - β1) ;复合非胶原蛋白 (noncollagenousproteins ,NCPs)及全复合后对修复性牙本质形成的作用。 方法 :用SD大鼠牙作直接盖髓实验 ,并用组织学方法评价每组材料对修复性牙本质形成的效果。结果 :各组材料在不同时间对修复性牙本质促进作用不同 ,实验组的作用明显优于对照组 ,实验组之间未见明显差异。结论 :TGF - β1。