血吸虫病快速诊断试剂盒的优化及其应用

目的 对血吸虫病胶体染料试纸条诊断试剂盒 (DDIA Kit)的检测方法作进一步优化并对其应用价值进行评价。方法 采用专用仪器定量制备 DDIA试纸条 ,以定量的抗原和染料进行标记。分别对 2 0、10、5 μl和 2 .5 μl的血清样本进行检测 ,将各组的敏感性、特异性和交叉反应性进行比较。再以确定的最适血清样本量对一血吸虫病低度流行区的自然人群进行筛查并与粪检结果比较 ,评价其应用价值。结果 用 2 0μl血清样本检测时 ,急性和慢性血吸虫病人的检出率均达到 10 0 %(2 4/2 4和 48/4 8) ,健康人的假阳性率为 8.0 % (8/10 0 ) ,与肝吸虫病人和肺吸虫病人的交叉反应率分别为 2 0 .0 % (4 /2 0 )和 65 .0 % (13 /2 0 ) ;用 10 μl样本血清检测时 ,急性血吸虫病人检出率为 10 0 %(2 4/2 4) ,慢性血吸虫病人的检出率为 97.9% (4 7/4 8) ,健康人的假阳性率为 2 .0 % (2 /10 0 ) ,与肝吸虫病人和肺吸虫病人的交叉反应率分别 10 .0 % (2 /2 0 )和 5 0 .0 % (10 /2 0 )。对低流行区的筛查结果表明 ,DDIA与 18例粪检阳性者的阳性符合率为 94.4% (17/18) ,与 44 5例粪检阴性者的阴性符合率为 87.4% (3 89/4 45 )。结论 定量制备的 DDIA试剂盒在检测血清量为 10μl时有较高的敏感性和特异性 。

血吸虫病快速免疫诊断──胶体染料试纸条法的研究

目的开发一种血吸虫病快速免疫诊断方法。方法用国产胶体染料 Ｄ－１标记日本血吸虫可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ），以此标记物与血吸虫病人血清中的抗血吸虫抗体反应，再用点有羊抗人ＩｇＧ（第二抗体）的硝酸纤维层析膜以层析法捕获标记抗原与抗体的复合物。结果用试纸条法检测急性血吸虫病人血清３０份、慢性血吸虫病人血清８４份，其敏感性分别为９６．７％和９４．０％，检测健康人血清６０份，其特异性为９６．７％，检测肝吸虫病人血清和肺吸虫病人血清各２０份，其交叉反应率分别为 １０ ０％和 ７０． ０％．检测结果与常规ＥＬＩＳＡ法相似。标记染料在室温下至少可保存 ３个月活性不变。结论胶体染料试纸条法操作简便、快速，不需特殊仪器，适用于现场大规模检测。

胶体染料斑点免疫试验检测血吸虫病人抗体方法的建立及初步应用

本研究首次从国产染料中筛选出一种能用于免疫反应显色的蓝色染料(D-1),并对用此染料标记羊抗人IgG的最适条件进行了探讨。这种标记抗体的胶体染料能与相关抗原反应并直接显色,双抗体夹心法检测人IgG蛋白的最低检出量为25—10ng/ml,胶体染料斑点免疫试验(DIA)检测62份血吸虫病人血清,61份阳性,阳性率为98.4％,40份姜片虫病人血清均为阴性,30份非血吸虫病流行区的健康人血清有1份出现阳性,假阳性率为3.3％,与Dot-ELISA检测结果相似。标记的胶体染料在室温下保存1wk仍保持活性不变,冻干能保存更长时间,与酶联免疫斑点法相比似有更高的实用价值。

应用胶体金SEA-DIPSTICK法检测日本血吸虫病血清抗体的研究

目的 建立一种快速、简便、实用的检测日本血吸虫病血清抗体的Dipstick方法。方法 应用胶体金SEA -dip stick法检测日本血吸虫病血清抗体。结果 用该法检测急性血吸虫病血清 2 8人份和慢性血吸虫病血清 2 97人份 ,其阳性检出率分别为 10 0 %和 97 31%。在 5 18例正常人和 5 73例其它 4种寄生虫病人血清中有 0 19%假阳性和 2 4%交叉反应。与Dot-ELISA比较 ,经卡方检验表明两者的敏感性无显著性差异 ,而SEA -dipstick法的特异性较Dot -ELISA强。 结论 胶体金SEA -dipstick法检测日本血吸虫病血清抗体有较高的敏感性和特异性 ,并且方法快速 ,操作简便 ,不需特殊仪器设备 ,稳定性高 ,重复性好 ,具有广泛的应用前景。

血吸虫病快速早期诊断试纸条的研究

目的 探索一种血吸虫病快速早期诊断的试纸条检测方法。方法 用标记胶体染料的可溶性尾蚴抗原 (SCA)作为检测抗原 ,建立用于血吸虫病早期诊断的简便快速的可溶性尾蚴抗原胶体染料试纸条法 (SCA- DDIA) ,并与可溶性虫卵抗原胶体染料试纸条法 (SEA- DDIA)比较 ,检测感染家兔早期血清和急、慢性血吸虫病人血清中抗血吸虫抗体 ,并检测卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病、姜片虫病人和健康人血清。结果 早期感染血吸虫家兔感染后首次检出阳性的平均时间为 2 2 d,全部家兔检出阳性为 30 d,均早于 SEA- DDIA法。检测急、慢性血吸虫病人的敏感性分别为 10 0 .0 %、93.3% ,检测非血吸虫病流行区健康人的特异性为 99.0 % ,与卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病、姜片虫病人的交叉反应率分别为 2 6 .3%、0、0。其敏感性、特异性和交叉反应率与 SEA- DDIA法相似。结论 SCA胶体染料试纸条法是一种快速简便的血吸虫病早期诊断方法 。

日本血吸虫抗独特型抗体NP30抗体检测法在云南大山区应用效果的评价

目的评价日本血吸虫抗独特型抗体NP30抗体检测法在云南大山区血吸虫病流行现场的应用效果。方法对云南大山区血吸虫病流行区的506位居民进行粪检,同时用NP30抗体检测法和血吸虫抗体ELISA检测试剂盒(SEA-ELISA)分别对其血清进行检测,评价NP30抗体检测法的敏感性;同时检测非流行区的100份血清确定其特异性。结果NP30抗体检测法和SEA-ELISA法的粪检阳性符合率分别为87.80%(144/164)和84.76%(139/164);两者的特异性分别为96.00%(96/100)和94.00%(94/100),差异均无显著性(P均>0.05),但在粪孵阴性人群血清样本中,NP30抗体检测法和SEA-ELISA法的检出率分别为44.15%(151/342)和70.47%(241/342),差异有显著性(P<0.05)。结论NP30抗体检测法可用于云南大山区血吸虫病筛查。

评估日本血吸虫病免疫学诊断方法疗效考核价值的合作研究

本项合作研究有12个单位的14个测试系统,采用450份血清进行双盲法测试,用经典抗体检测方法SEA/ELISA作为对照.检测结果显示,有6种测试系统相对较好,已超过或接近经典抗体检测方法,并对今后我国血吸虫病诊断研究提出意见.

双抗体夹心酶联免疫吸附试验(S-ELISA)检测血吸虫病人循环抗原的研究

应用从重感染兔血清中提取的γ-球蛋白为捕捉抗体、以酶标单克隆抗体为结合物进行双抗体夹心酶联免疫吸附试验(S-ELISA),检测日本血吸虫病人循环抗原.结果:69例急性血吸虫病人血清的阳性率为80.6%一90.9%;110例慢性血吸虫病人血清的阳性率为88.2%;40例华支睾吸虫病人血清有1例出现阳性,交叉反应率为2.5%,50例健康人血清亦有1例出现阳性反应,假阳性率为2%.提示该法具有较高的敏感性、特异性,判断结果较客观,可应用于现场.

检测日本血吸虫病胶体碳试纸条的研制与初步应用(英文)

目的:开发一种快速检测血清中日本血吸虫抗体的免疫诊断方法。方法:用胶体碳标记日本血吸虫成熟虫卵可溶性抗原(SEA),与待测血清中日本血吸虫抗体结合,再用SEA包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上以捕捉碳标SEA-血吸虫抗体复合物,达到检测血吸虫抗体的目的。结果:检测137份血清,与间接血凝法(indirect haemagglutination assay,IHA)检测结果一致性为98.54%,如经IHA试剂盒检测呈阳性者即视为阳性血清,则该方法的检测敏感性为98.99%,特异性为97.37%;且检测条带的灰度与血清效价具有曲线关系,因而可以对待测血清作半定量分析。结论:胶体碳试条层析法操作简便,快速,具有较高的敏感性和特异性,适合作血吸虫现场检测。

胶体染料斑点兔疫试验法(DIA)检测血吸虫病人血清抗体的进一步研究

本研究对胶体染料斑点免疫试验法(DIA)检测血吸虫病人抗体的有关因素进行了系统的观察,并对实验方法进行了改进.用改进后的DIA检测288份血吸虫病人血清抗体,其中69份急性病人血清,阳性率为95.7%;110份慢性病人血清阳性率为96.4%;19份晚期病人血清阳性率为47.4%;40份华支睾吸虫病人血清,2份阳性,交叉反应率为5%;50份健康人血清,1份阳性,假阳性率2%.敏感性、特异性与酶联斑点免疫试验法相似.改进后的DLA简单、经济、易行,适于现场应用.

感染日本血吸虫单性尾蚴兔抗体水平的观察

对９只雄性尾蚴感染兔（检虫１５－１３３条，平均５３．１条）及９只雌性尾蚴感染兔（检虫１－１０２条，平均３６．１条）定期采血，用ＥＬＩＳＡ、ＬＡ及ＣＨＲ进行检测，至感染后１年阳性率依次为８８．９％、５５．６％及８３．３％。３种方法检出阳性反应时间分别为感染后３－５１ｗｋ、４－１７ｗｋ及２－３５ｗｋ，其中ＥＬＩＳＡ法波动性较大，ＬＡ及ＣＨＲ则较稳定。此结果从一个侧面提示检测抗体的方法不应偏废，至少对于血防监测用于发现新感染是值得推荐的。

血吸虫病快速免疫诊断—胶体染料免疫渗滤法的初步研究

目的开发一种适合现场应用的血吸虫病快速免疫诊断方法。方法将纯化的日本血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)点于硝酸纤维素膜上,以捕获血清标本中血吸虫特异性抗体,通过胶体染料R3标记的SEA来直接显色,阳性者出现红色斑点。结果胶体染料免疫渗滤法检测急性血吸虫病人血清35份、慢性血吸虫病人血清107份、晚期血吸虫病人血清35份,其敏感性分别为100％、97.2％和74.3％。检测健康人血清87份,特异性为100％。检测肝吸虫病人血清38份、姜片虫病人血清11份、钩虫病人血清20份,其交叉反应率分别为2.6％、0.0％和0.0％,整过试验过程仅需2～3分钟,操作简单。染料标记SEA在室温条件下保存6个月、37℃恒温中保存62天,其活性均未发生明显变化。结论胶体染料免疫渗滤法检测各期血吸虫病结果准确,操作简便、快速、廉价、肉眼观察结果不需特殊仪器,特别适用于基层现场查病。

日本血吸虫抗体检测试剂盒在鄱阳湖区现场应用分析

目的分析常用的日本血吸虫抗体检测试剂盒在鄱阳湖区日本血吸虫病流行区人群的应用价值。方法在鄱阳湖区3个日本血吸虫病不同流行程度的行政村(新建县曹会村、都昌县井头村和星子县新华村),对5岁以上的常住居民同时采用日本血吸虫感染的病原学(Kato-Katz法和尼龙绢集卵孵化法)检查方法和常用5种抗体检测试剂盒检查人群日本血吸虫感染情况。结果 3个调查点人群的5种常用免疫诊断试剂盒检测的抗体阳性率(33.1%～57.1%)均显著高于粪检阳性率(5.0%-8.2%)(P<0.05)。抗体阳性率的年龄分布趋势与粪检结果一致,人群粪检阳性率、抗体阳性率高峰均出现在40～49岁组人群。不同免疫诊断试剂盒的抗体阳性率随着感染度的增加而增高,敏感性为81.2%～94.5%,其中ELISA检测试剂盒敏感性最高;但粪检阴性者中仍有约26.9%～46.1%为抗体阳性。粪检阳性者中,仍有5.5%～18.8%为抗体阴性。结论 5种免疫诊断试剂盒均可用于流行区群体水平的血吸虫病流行病学调查,其中ELISA诊断试剂敏感性最高,且在不同感染度水平间无显著性差异。

浸棒-夹心-胶体染料免疫试验检测血吸虫病患者循环抗原方法的建立及应用

目的：建立检测感染宿主血清中循环抗原的简易免疫学试验方法。方法：从国产的工业染料中首次筛选出 １ 种能用于免疫显色反应的淡紫色染料莲（ Ｈ Ｆ Ｒ Ｌ），用 Ｉｇ Ｍ 类别抗日本血吸虫组合单抗 Ｄ Ｈ Ｃ 标记染料，并探索最适标记条件。建立浸棒夹心胶体染料免疫试验（ Ｄ Ｓ Ｄ Ｉ Ａ），检测宿主血清中日本血吸虫循环抗原。结果： Ｄ Ｓ Ｄ Ｉ Ａ检测日本血吸虫 Ｓ Ｅ Ａ 的最低检出极限为 ５ ｎｇ／ｍ ｌ，分别检测急性血吸虫病患者 １４ 例及慢性血吸虫患者 １１３ 例的血清，其阳性率分别为 １００％ 和 ５２．２％ ，检测正常学生血清 １１３ 例，特异性为 ９２．９％ 。该法的敏感性及特异性与ｄｏｔ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 相似，且两法联合检测可提高检出率，而特异性不变，提示两法有一定的诊断互补叠加效应。标记染料室温下保存 １ ｗ ｋ 活性不变。结论： Ｄ Ｓ Ｄ Ｉ Ａ 操作简便、试剂价廉，有广泛的应用潜力。

血吸虫病低流行状态下抗体检测的现场应用价值

目的评价间接红细胞凝集试验（IHA）和ELISA在血吸虫病低流行状态下的现场应用价值。方法于2008年和2010年同时采用改良加藤厚涂片法（Kato—Katz法）、IHA和ELISA平行检测鄱阳湖区血吸虫病流行区新华村728人和799人．并以三送二十七检Kat0-Katz法结果为金标准对免疫诊断结果进行评估。结果2008年和2010年人群Kato。Katz法、IHA和ELISA检出阳性率分别为10.3％（75／728）和3．8％（30／799）、40．0％（291／728）和31．5％（252／799）、40．1％（292／728）和40．1％（320／799），其中Kato—Katz法（X2=26．92，P〈0．05）和IHA阳性率（x2=11．82，P〈0．05）年间的差异均有统计学意义。IHA、ELISA的诊断结果与粪检结果的一致性较差，Kappa值均低于0．2（均P〈0．01）。IHA或ELISA筛查阳性者再以Kato—Katz’S法确诊。结果表明粪检阳性检出率与送粪次数和检查片数呈正相关（rIHA2008=0．922，rIHA2008=0．908，qnA2010=0．749，rELISA201种．798；均P〈0．05）。IHA和ELISA阴性的粪检阳性者主要为低感染度患者，每克粪虫卵数（EPG）≤40时，IHA抗体阳性率为66．1％（39／59）-87．0％（20／23）．EUSA抗体阳性率为62．7％（37／59）～100％（23／23）；EPG〉40时，ELISA均为阳性，但IHA仍有呈阴性者。结论为提高血吸虫病低流行状态下IHA和ELISA的诊断能力，降低假阳性和假阴性．建议人群化疗对象的确定采用血检过筛后Kato—Kat：粪检．由常规的“一送三检”改为“一送九检”。