TIMP-3甲基化调控与大肠癌转移的关系研究

目的探讨TIMP-3基因启动子5'CpG岛甲基化状况与大肠癌转移的关系。方法随机收集45例大肠癌病例。用甲基化特异性PCR检测TIMP-3基因启动子5'CpG岛甲基化状况;用免疫组化方法检测TIMP-3蛋白的表达水平;分析TIMP-3基因启动子甲基化与大肠癌转移之间的关系。结果大肠癌肝转移组、淋巴结转移组TIMP-3基因甲基化率分别高于非肝转移组(P<0.01)、非淋巴结转移组(P<0.01);Duck's C+D组甲基化率高于Duck's A+B组。大肠癌TIMP-3基因甲基化与TIMP-3蛋白的表达缺失有关(P<0.01)。结论TIMP-3甲基化是大肠癌中TIMP-3蛋白表达缺失的主要原因,在大肠癌转移中发挥重要的作用,提示预后不良。

TIMP-3基因甲基化调控与大肠癌发生发展的关系研究

目的:探讨TIMP-3甲基化调控与大肠癌发生发展的关系。方法:随机收集45例大肠癌病例、42例大肠腺瘤病例、48例非肿瘤性大肠病例标本,用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)分别检测TIMP-3基因启动子5'CpG岛甲基化状况。结果:非肿瘤性大肠病变、大肠腺瘤、大肠癌分别有0例(0.00%)、5例(11.90%)、14例(31.11%)TIMP-3基因启动子发生甲基化。大肠癌组织TIMP-3甲基化率高于非肿瘤性大肠病变(P<0.01)和大肠腺瘤(P<0.05)。大肠腺瘤TIMP-3甲基化率高于非肿瘤性大肠病变(P<0.05)。大肠癌肝转移组、淋巴结转移组TIMP-3基因甲基化率分别高于非肝转移组(P<0.01)、非淋巴结转移组(P<0.01);Duck'sC+D组甲基化率分别高于Duck'sA+B组(P<0.01)。结论:大肠癌TIMP-3基因的高甲基化在大肠癌的发生、发展中发挥重要作用,对于大肠癌的早期预防、诊断、恶性程度及预后判断有重要意义。

SOCS3对结肠癌增殖和侵袭的调控机制

目的探讨细胞因子信号抑制子3(SOCS3)对结肠癌增殖与侵袭能力的调控机制。方法收集我院2014年7月～2017年5月进行肿瘤治疗并经确诊的80例结肠癌患者的癌组织(n=80)和癌旁组织标本(n=80)。通过Western blot分析SOCS3在组织中表达情况。复苏结肠癌细胞系SW480,利用lipo3000转染建SOCS3的过表达质粒;利用小干扰RNA(siRNA)技术转染结肠癌细胞株敲低SOCS3表达。应用CCK-8检测SOCS3基因对结肠癌细胞增殖的影响;采用Transwell试验测定SOCS3基因对于SW480侵袭能力的作用。通过去甲基化及IL-6处理SW480观察对于SOCS3表达的影响,并检测处理之后对SW480增殖、侵袭的作用。结果结肠癌组织中SOCS3表达量均低于癌旁组织;过表达SOCS3后抑制SW480细胞增殖和侵袭,而敲减SOCS3后促进其增殖和侵袭;去甲基化处理SW480上调了SOCS3的表达,SW480增殖和侵袭能力受到抑制;IL-6处理SW480后降低了SOCS3的表达,SW480细胞增殖和侵袭能力得以增强。结论 SOCS3参与结肠癌的发生发展,是结肠癌治疗的潜在靶点。在结肠癌患者中,SOCS3低表达可能与甲基化有关。

SOCS-3基因在结肠癌中的表达及其甲基化测定

目的通过对SOCS-3基因在结肠癌和癌旁组织中的表达及其启动子甲基化状态的测定,探讨其与结肠癌发生、发展和转移的关系。方法收集40例结肠癌患者的肿瘤标本、20例癌旁组织及10例正常结肠组织,运用甲基化特异性PCR测定SOCS-3基因CpG岛甲基化状态,同时运用实时定量PCR分析SOCS-3基因在结肠癌组织中的表达水平。结果40例结肠癌组织中有34例(85%)存在SOCS-3基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中有2例(10%),而正常结肠组织中未检测到SOCS-3基因CpG岛的异常甲基化;结肠癌组织中SOCS-3基因CpG岛甲基化组与无甲基化组相比,其SOCS-3基因的相对表达量明显减少(P<0.05),表明SOCS-3基因CpG岛甲基化可导致SOCS-3基因表达降低。SOCS-3基因CpG岛甲基化与性别、年龄无关(P>0.05),而与肿瘤病理分级、TNM分期有关(P<0.05)。结论结肠癌中存在SOCS-3基因CpG岛异常甲基化,且CpG岛的甲基化导致其基因表达降低。SOCS-3基因CpG岛甲基化可能参与了结肠癌的发生、发展和转移。

粪便脱落细胞BMP3与BCAT1基因甲基化检测对结肠癌及癌前病变筛查的价值

目的分析粪便脱落细胞骨形态发生蛋白3(BMP3)、支链氨基酸氨基转移酶1(BCAT1)甲基化对结肠癌及癌前病变筛查的价值。方法纳入2020年2—12月海南医学院第一附属医院胃肠肿瘤外科患者94例,其中结肠癌患者43例(结肠癌组)、结肠腺瘤患者19例(结肠腺瘤组)、单纯痔疮患者32例(对照组),收集结肠癌患者的临床分期、肿瘤最大径、肿瘤体积、分化程度、淋巴结转移、浸润程度情况;取其粪便样本采用甲基化特异性PCR(MSP)检测粪便脱落细胞BMP3、BCAT1甲基化情况;分析结肠癌患者粪便脱落细胞BMP3、BCAT1及二者联合基因甲基化与临床病理特征关系;受试者工作特征曲线(ROC)评价BMP3、BCAT1单基因及二者联合基因甲基化对结肠腺瘤和结肠癌的诊断价值。结果粪便脱落细胞BMP3、BCAT1单基因及二者联合基因甲基化阳性率比较,结肠癌组>结肠腺瘤组>对照组(χ^(2)/P=18.462/0.000、24.203/0.000、56.039/0.000)。粪便脱落细胞BMP3与BCAT1联合基因甲基化结肠癌患者肿瘤最大径、肿瘤体积大于非甲基化患者(t/P=11.417/0.000、3.381/0.002),分化程度越低、临床分期越高基因甲基化阳性率越高,且高于非甲基化患者(χ^(2)/P=11.646/0.003、4.882/0.027)。粪便脱落细胞BMP3、BCAT1单基因及二者联合基因甲基化对结肠腺瘤诊断的ROC曲线显示,BMP3基因甲基化(AUC=0.579,95%CI 0.433~0.716)、BCAT1基因甲基化(AUC=0.521,95%CI 0.377~0.663)、二者联合基因甲基化(AUC=0.574,95%CI 0.428~0.711),三者AUC比较,差异无统计学意义(Z=0.052,P=0.959)。以上指标对结肠癌诊断的ROC曲线显示,BMP3基因甲基化(AUC=0.701,95%CI 0.585~0.802)、BCAT1基因甲基化(AUC=0.744,95%CI 0.630~0.838)、二者联合基因甲基化(AUC=0.852,95%CI 0.752~0.924),三者AUC比较,BMP3与BCAT1联合基因甲基化的AUC最高(Z=3.598,P=0.000)。结论粪便脱落细胞BMP3、BCAT1甲基化对结肠癌癌前病变筛选价值不大,但对结肠癌有较高的筛选价值,且与结肠癌分化程度、临床分期等关系密切,有一定应用价值。

四神丸含药血清抑制人结肠癌细胞有氧糖酵解的效应及机制

目的:探究四神丸含药血清对人结肠癌细胞HCT116有氧糖酵解的影响和作用机制。方法:采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测四神丸含药血清(2.5%、5%、10%)处理结肠癌HCT116细胞24、48、72 h的细胞活力;微量法检测细胞培养液中乳酸浓度和细胞内葡萄糖含量,以及己糖激酶(HK)和果糖-6-磷酸激酶(PFK)活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测葡萄糖转运酶1(GluT1)mRNA含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GluT1、甲基转移酶样3(MettL3)蛋白表达;免疫荧光染色法检测细胞GluT1表达;比色法检测N6-甲基腺苷(m^(6)A)RNA甲基化水平。结果:与空白组比较,2.5%、5%、10%四神丸含药血清24 h对HCT116细胞活力均无明显影响,10%四神丸含药血清在48 h可明显抑制HCT116细胞活力(P<0.05),故后续实验选用10%四神丸含药血清,给药时间为48 h。与空白组比较,10%四神丸含药血清能够降低乳酸生成(P<0.05),并下调细胞对葡萄糖摄取(P<0.05),并降低糖酵解关键限速酶HK和PFK的活性(P<0.05),同时四神丸含药血清还可降低GluT1蛋白(P<0.01)及其mRNA表达(P<0.05),并减少表达GluT1的细胞比例(P<0.01)。与空白组比较,四神丸含药血清还能降低MettL3蛋白含量(P<0.05)及m^(6)A RNA甲基化水平(P<0.01)。结论:四神丸能够抑制结肠癌细胞糖酵解,其作用机制可能与降低MettL3过表达,抑制m^(6)A RNA甲基化,下调GluT1及细胞内HK、PFK等有氧糖酵解相关酶的活性有关。