化合物968对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的增殖和凋亡的影响及其机制

目的观察谷氨酰胺酶1(GLS1)抑制剂化合物968对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的增殖和凋亡的影响,并探讨相关机制。方法不同浓度的化合物968(0,5. 0,10. 0,20. 0,40. 0,80. 0μmol/L)刺激RA-FLS细胞24,48和72 h,0μmol/L组为空白对照组。MTT法检测化合物968刺激RA-FLS细胞24,48,72 h,对细胞的增殖抑制作用。倒置显微镜观察化合物968刺激细胞48 h细胞形态的变化。DAPI染色观察化合物968刺激细胞后细胞核的变化。Annexin-Ⅴ/PI双染法检测在化合物968作用下细胞的凋亡率。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Mcl-1的表达。结果 MTT法结果显示,化合物968能显著抑制RA-FLS细胞的增殖(P<0.05),呈浓度和时间依赖性,作用24,48,72 h的IC50值分别为48. 45,35. 66,20. 95μmol/L。DAPI染色显示,随着药物浓度的增加,细胞核浓染,核固缩现象显著。Annexin-Ⅴ/PI双染法结果表明,化合物968可诱导RA-FLS细胞发生凋亡,20,40,80μmol/L化合物968作用48 h时,细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.05)。Western blot结果显示,化合物968可下调抗凋亡蛋白Mcl-1的表达,并上调促凋亡蛋白Bax的表达。结论化合物968可以明显降低RA-FLS细胞的生存率并可以诱导细胞发生凋亡,其可能的机制是调节细胞凋亡相关蛋白Mcl-1和Bax的表达。

谷氨酰胺酶1在胃癌中的作用和机制探讨

目的谷氨酰胺酶1(GLS1)在胃癌中高表达,通过生物信息学探索GLS1在胃癌中的作用和机制。方法应用多个数据库(包括TIMER,UALCAN和MethPrimer)分析GLS1在胃癌中高表达的原因、GLS1的表达与免疫细胞浸润之间的相关性,实验验证靶向GLS1对于胃癌肿瘤细胞增殖能力的影响。结果生物信息学分析发现:GLS1的高表达与基因突变没有明显的相关性,而与TP53基因突变和启动子区域甲基化有明显的相关性;胃癌中GLS1的表达与多种免疫细胞的浸润明显相关,并且与PD-L1(CD274)和CTLA4的表达呈正相关关系,在一定程度上可以预测PD-L1治疗的疗效;用特异性的siRNA敲低GLS1的表达,可以抑制胃癌肿瘤细胞的增殖,新型GLS1的抑制剂Compound 968可以更好地抑制胃癌肿瘤细胞的增殖。结论GLS1在胃癌中高表达主要是与TP53基因突变和启动子区域甲基化明显相关,胃癌中GLS1的表达与免疫因素密切相关,靶向GLS1可以抑制胃癌肿瘤细胞的增殖能力。