亚硝基胍-紫外复合诱变选育高产衣康酸菌株

为提高土曲霉KYK-031发酵生产衣康酸能力,对出发菌株开展诱变育种和高产能力选育研究。采用亚硝基胍(NTG)和紫外(UV)复合诱变方法,通过平板初筛和摇瓶复筛,筛选衣康酸高产突变株。结果表明,亚硝基胍在500μg/mL浓度下的最佳诱变时间为40 min,15 W紫外诱变的最佳诱变时间为2 min,亚硝基胍-紫外复合诱变后筛选得到一株衣康酸高产菌株KYK-1035,摇瓶发酵产量为73.7 g/L,比出发菌株(41.8 g/L)提高了76.3%,糖酸转化率为63.4%。采用亚硝基胍-紫外复合诱变,提高了出发菌株诱变的正突变率,为衣康酸发酵继续放大和工业化生产奠定了基础。

氯化锂-紫外-离子束复合诱变红霉素高产菌株研究

以红霉素生产菌红色链霉菌为研究对象,探讨了氯化锂、紫外、离子束3种不同诱变方式对红色链霉菌的影响,根据后代的存活率和突变率选定合适的诱变条件:氯化锂的最优诱变浓度1.2%,紫外的最优诱变时间120s,离子束的最优诱变注量200×1014 cm-2,然后将3种方式结合起来进行复合诱变。经复合诱变后筛选获得高产突变株E0317-1-7-26,该菌株摇瓶效价达7 126μg/mL,较出发菌株E03提高了20.3%;经多次传代分离实验表明,该突变株遗传稳定性较好。

紫外线与氯化锂复合诱变选育L-组氨酸产生菌

以一株谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)S6为出发菌株,利用氯化锂、紫外线进行诱变,通过实验证明氯化锂诱变剂量在1.2%时致死率达到82.4%,紫外线在照射30s时致死率达到81.8%。利用氯化锂诱变谷氨酸棒杆菌S6,所得菌株D3的L-组氨酸产量为243mg/L,比出发菌株提高10.5%;以紫外线做诱变S6,所得高产菌株U1产量256mg/L,比出发菌株提高8.5%;以紫外线、氯化锂复合诱变S6,所得菌株N1产量为251mg/L,比出发菌株提高13.6%,结果显示,经紫外线与氯化锂复合诱变后的菌株N1产L-组氨酸的产量最高,比氯化锂诱变后的菌株产L-组氨酸量提高3.1%,比紫外线诱变后的菌株产L-组氨酸量提高5.1%。

快速发酵面包酵母菌株的选育

对出发菌株进行紫外-氯化锂复合诱变,通过初筛、复筛选育出高麦芽糖发酵力、低葡萄糖阻遏的面包酵母菌株BM-72,该菌株在不加糖、低糖面团中均表现出较好的发酵力,分别高于出发菌株19.4%和7.3%。

复合诱变皮状丝孢酵母选育高产油脂菌株

采用紫外线与硫酸二乙酯对皮状丝孢酵母进行复合诱变。研究结果表明:用15 W紫外灯在照射距离30 cm条件下照射60 s,可以筛选到油脂含量30.4%,生物量1.135 4 g/100 mL的突变菌株皮-60;利用硫酸二乙酯诱变皮-60,在硫酸二乙酯质量分数1.0%,处理时间为70 min条件下,可以筛选到油脂含量35.7%,生物量1.257 3 g/100 mL的突变菌株皮-60-70,较出发菌株,油脂含量提高了33.7%。

树舌灵芝复合诱变选育漆酶高产菌株

以一株产漆酶树舌灵芝的菌丝片段为试材,利用紫外线和硫酸二乙酯逐级诱变;采用愈创木酚显色圈初筛突变菌株,并通过摇瓶复筛对优势菌株产酶能力进行验证,以期选育稳定高产漆酶菌株。结果表明:最终诱变获得一株遗传稳定的高产突变株,与原始菌株相比,漆酶活性提高63.3%,同时发酵周期缩短1 d。

紫外线与微波复合诱变选育高产脂肪酶菌株的研究

研究选育高产脂肪酶菌株。采用紫外线诱变、微波诱变和紫外微波复合诱变出发菌株H3,测定比较酶活,确定最佳诱变效果。结果表明,出发菌株经紫外线和微波诱变后,所产脂肪酶的最高酶活分别为57.984 U/m L和57.1 U/m L,比出发菌株H3提高了38.3%和36.2%,经微波辐射40 s和紫外线照射80 s的复合诱变菌株M3产酶活力最高,达61.6 U/m L,比出发菌株H3提高了46.85%。

复合诱变红曲霉选育高产壳聚糖菌株及培养基优化

为了提高壳聚糖的产量,通过对紫红曲霉菌(Monascus purpureus went)进行60Co及紫外复合诱变,考察不同诱变剂量下菌体的致死率和正突变率,以确定最佳的诱变条件,获得一株稳定性良好的突变株C16,经过液态发酵进行壳聚糖的提取,壳聚糖的产量提高了5.46%,再以贵州特色资源——山药、苦荞及天麻为基质对C16进行培养条件优化,壳聚糖产量提高2.254%。

紫外链霉素复合诱变选育高产surfactin菌株研究

Surfactin是芽孢杆菌产生的一种抗菌脂肽,在畜牧养殖中有替代抗生素的潜力。野生菌株代谢产生surfactin能力弱,限制了surfactin的开发使用,为提高Bacillus subtilis S21产surfactin的能力,以B.subtilis S21为出发菌株,采用紫外链霉素复合诱变,以期得到高产surfactin菌株。诱变筛选结果表明:经过复合诱变筛选,得到了诱变菌株38',其传代8次后的遗传稳定菌株,surfactin产量为0.28 mg/mL,比出发菌B.subtilis S21的surfactin产量提升了9.33倍,取得较佳的诱变效果。

紫外线、He-Ne激光对葡萄白腐病菌拮抗菌PT2的复合诱变效应

采用紫外线、He-Ne激光及两者复合诱变的方法,分别处理对葡萄白腐病有拮抗作用的枯草芽胞杆菌PT2,以提高其抑菌效果。结果表明,紫外线和He-Ne激光单独作用,所筛菌株UV10与HN14抑菌效果提高率分别为15.0%与21.7%。而经过对复合诱变条件确定,在紫外线照射90 s后,再用15 mW的He-Ne激光辐照10 min,筛选出最佳正变菌株F15,抑菌效果提高30.9%,明显高于单因素诱变,经25代传代试验证明其拮抗能力可以进行稳定遗传。

紫外-氯化锂复合诱变选育高产α-淀粉酶菌株

以枯草芽孢杆菌BL01为出发菌株,采用紫外-氯化锂复合诱变选育高产α-淀粉酶菌株,确定最佳紫外照射时间为150s、最佳氯化锂浓度为0.3%。采用透明圈法进行初筛,比较HC值(透明圈直径与菌落直径之比);对HC值较大的菌株进行复筛,测发酵上清液α-淀粉酶的酶活,得到高产α-淀粉酶菌株BL01-13,其产α-淀粉酶活性是出发菌株的2.02倍;且该菌株能稳定性遗传,传代5代后,α-淀粉酶酶活稳定在(357.73±4.06)U·mL-1范围内。

高产虾青素红法夫酵母的紫外线诱变

虾青素(3,3'-二羟基-β,β'-胡萝卜素-4,4'-二酮)是一种类胡萝卜、素类物质,具有巨大的开发价值。本文通过单一紫外线、紫外线-氯化锂复合处理,结合选择性平板的筛选作用,对菌株G26进行诱变育种。实验结果表明:紫外线照射3～9min,法夫酵母的死亡率在70%～95%之间;当死亡率为78.57%时,正变率达到最大值71.43%。经多次单独紫外线处理,以及紫外线-氯化锂复合诱变,获得稳定高产突变株G49,虾青素产量达到10 321μg/L,含量为713.8μg/g DCW,较出发菌株G26分别提高31.48%和20.47%。

紫外-氯化锂复合诱变选育泰妙菌素高产菌株

对泰妙菌素生产菌TMⅡ09-003经紫外线(UV)照射180 s后,将菌悬液均匀地涂布于加有0.8%的氯化锂平板上,在避光条件下于温度26℃～27℃、相对湿度60%～65%的环境下培养13～14 d后,挑取单菌落,进行初筛、复筛,用HPLC法测定含量。结果表明,UV照射180 s后,氯化锂加量为0.8%剂量对菌株的致死率为88.6%。对该剂量处理获得的诱变菌株进行了筛选,最终获得4支高产菌株,分别为TMⅡ09-236、TMⅡ09-253、TMⅡ09-441和TMⅡ09-447。

恩拉霉素高产菌株的快速选育

为筛选恩拉霉素高产菌株,降低生产成本,以生产用Streptomyces-483为出发菌株,进行紫外-氯化锂复合诱变。以金黄色葡萄球菌为指示菌,用琼脂块法测定抑菌圈大小,筛选出84株突变株,经摇瓶初筛、复筛、5L发酵罐验证,最终获得4株高产突变株。筛选得到的4株高产突变株经稳定性考察完全适用于生产。

核糖霉素高产菌株的选育

目的选育核糖霉素高产菌株,提高其生产发酵水平。方法以核糖苷链霉菌03-8为出发菌株,经紫外线和氯化锂复合处理后,再采用微波诱变,筛选自身产物抗性解除反馈调节突变株,同时结合单菌落自然分离纯化法进行选育。结果获得了稳定高产菌株563-44,比出发菌株产量提高201.1%,其生产能力在5吨发酵罐试验中得到验证。结论变异株563-44确实是1株高产的工业生产菌种。

复合诱变选育5-ALA高产菌株及发酵条件优化

以类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)为出发菌株,通过紫外-氯化锂复合诱变,筛选出高产5-ALA的菌株,并通过单因素试验对其发酵产5-ALA条件进行优化。结果表明,在紫外照射80 s、氯化锂浓度0.6%的最适诱变条件下,突变菌落形态大小与产5-ALA能力呈正相关,单菌落直径越大,产5-ALA能力越强,筛选出1株高产5-ALA菌株H80110,其5-ALA产量达24.56 mg/L,较初发菌株提高97.14%。其最佳发酵条件为初始pH 6.6、接种量20%、装液量100 mL/250 mL,且发酵周期缩短为3 d,该菌株具有良好的遗传稳定性。

琥珀酸产生菌原生质体的复合诱变

利用酶解法制备琥珀酸产生菌的孢子原生质体,对其进行紫外线与He-Ne激光的复合诱变,筛选到了一株突变株MS-23,其琥珀酸产量为1.27g/L,是出发菌株产酸量的20.16倍。将此菌株连续传代5次,具有较好的遗传稳定性。

紫外诱变选育脱硫微生物

为了深度脱除石油及其产品中的有机硫,实验从天津大港油田被原油污染的土壤中驯化、分离出对多种硫化合物具有一定脱除能力的枯草芽孢杆菌。以此枯草芽孢杆菌为出发菌株,紫外线为诱变剂进行诱变育种,经过多级水平筛选,并连续进行3次复证后,获得了脱硫效果显著,有效脱硫时间明显缩短的正突变脱硫菌种。该突变菌株对100μg/mLD-BT脱硫反应24 h,其平均比脱硫活性由突变前的3.78 mmol/(h.g)提高到21.70 mmol/(h.g),诱变效果显著,并可直接应用于低硫油品的深度脱硫,有一定的实际应用价值。

He-Ne激光与紫外复合诱变选育林可霉素高产菌株

对林肯链霉菌原生质体进行He—Ne激光-紫外复合诱变，结果表明，复合诱变对该菌的原生质体有明显的致死作用。将诱变后的原生质体涂布含林可霉素浓度为15000tLg／mL的再生平板上，可获得抗性基因突变株。经筛选，得到一株遗传性状稳定的高产菌株SL-98-2^#-8，其摇瓶效价为3110μg／mL，比出发菌株SL-98-2#（2210μg／mL）提高了40．7％。

紫外-氯化锂复合诱变选育高产维生素K_(2)(MK-7)菌株

作为一种新兴的功能性保健食品,维生素K_(2)受到人们越来越多的关注。传统的诱变育种技术是国内外提高菌种产量和性能的重要手段。以本实验室一株产维生素K_(2)(MK-7)的纳豆芽孢杆菌KVK-09为出发菌株,通过对紫外和氯化锂诱变致死率和正突变率的考察,确定紫外-氯化锂复合诱变的最佳诱变条件为紫外照射30s,氯化锂浓度为0.4%。紫外-氯化锂复合诱变后经过摇瓶初筛和复筛,采用高效液相色谱(HPLC)进行检测并筛选突变株。筛选得到一株维生素K_(2)(MK-7)高产菌株KVK-2694,摇瓶发酵水平达到78μg/mL,是出发菌株(43μg/mL)的1.81倍。采用紫外-氯化锂复合诱变,提高了诱变菌株的正突变率,可以有效提高维生素K_(2)(MK-7)的产量,突变菌株KVK-2694遗传稳定性良好,为工业化生产和应用奠定了良好基础。