结膜松弛症患者泪膜稳定性、杯状细胞及黏蛋白5AC表达的变化

目的检测和观察结膜松弛症患者泪膜稳定性、杯状细胞变化及黏蛋白5AC的表达情况,探讨结膜松弛症的发病机制。方法收集在我院就诊的结膜松弛症患者30例30眼)为结膜松弛症组,另选取单纯老年性白内障手术患者15例(15眼)为正常对照组,对所有入选者进行眼部症状评价[国际眼表面疾病指数(ocular surface disease index,OSDI)积分法]、泪膜破裂时间检测、Schirmer I试验、泪液羊齿状结晶试验,分别对结膜松弛症组和正常对照组的结膜组织标本行HE染色、AB染色、黏蛋白5AC免疫组织化学染色观察,行统计学分析。结果结膜松弛症组OSDI评分为(37.80±8.94),高于正常对照组(11.40±4.08)(P<0.01)。结膜松弛症组泪膜破裂时间为(6.70±2.76)s,低于正常对照组(13.67±3.48)s(P<0.01)。SchirmerⅠ试验结膜松弛症组为(6.23±3.13)mm,明显低于正常对照组(13.40±3.74)mm(P<0.01)。结膜松弛症组患者泪液中羊齿状结晶较正常对照组明显减少(χ~2=14.309,P=0.003)。光镜下结膜松弛症组较正常对照组球结膜厚度变薄,胶原纤维少,弹力纤维缺失,固有层间质淤血水肿,杯状细胞减少,黏蛋白5AC染色阳性细胞数低于正常对照组(χ~2=9.499,P=0.023)。结论结膜松弛症患者泪膜功能受到影响,杯状细胞减少,泪液中羊齿状结晶减少,黏蛋白5AC含量减少,最终导致球结膜过度松弛,出现眼表泪液学异常。

结膜杯状细胞特性与眼表健康相关性的研究进展

结膜杯状细胞散在分布于复层上皮中,可分泌黏蛋白来维持眼表环境稳定。有研究证明结膜杯状细胞具有分泌黏液、眼表废物清除以及免疫调节功能。本文着重阐述结膜杯状细胞的生物学特性以及对其分化起调节作用的关键性因子SPDEF(SAM pointed domain Ets factor)对该细胞功能的影响,进一步明确杯状细胞与眼健康的相关性。

结膜上皮干细胞研究进展

结膜上皮干细胞是结膜上皮细胞和杯状细胞的共同祖细胞,具有较强的自我更新、增生和分化能力,在维持眼表稳态和损伤修复中起关键作用.随着对结膜上皮干细胞研究的不断深入,我们对眼表稳态的调节机制更加了解,并且为组织工程技术重建结膜上皮提供了种子细胞.本文就结膜上皮干细胞的概念、生物学特性、解剖学部位、鉴别、体外培养及其检测方法、分化、临床应用等的研究进展进行综述。

活体共焦显微镜下观察正常人眼球结膜组织结构

目的探讨应用活体激光共焦显微镜观察正常人球结膜的组织结构。方法横断面研究。2008年2月至7月选择50名无眼部外伤、感染及配戴接触镜史，且裂隙灯显微镜检查无异常的正常人的50只眼作为研究对象。使用激光共焦显微镜对其上方、下方、鼻侧及颞侧球结膜进行检查，各层图像均被记录，分析球结膜各层形态，并对上皮细胞、杯状细胞及树突状细胞密度进行计数。运用单因素方差分析对各层上皮细胞密度和各方位杯状细胞密度进行统计学分析，运用最小显著性差异分析组间差异。结果球结膜七皮浅表层细胞体积较大，排列松散，胞核呈低反光，细胞平均密度为（1643±206）个／mm^2。中间层细胞呈卵圆形，体积较小，排列紧密，胞核呈点状高反光，细胞平均密度为（4693±228）个／mm^2。基底层细胞呈多边形，排列规整，有清晰而高亮的细胞边界，细胞平均密度为（4420±230）个／mm^2。经统计学分析3种上皮细胞密度存在显著性差异（F=1160．312，P=0．000）。类似杯状细胞的细胞呈圆形，胞体较大，胞内充满透亮颗粒，成团或散在分布，细胞的平均密度为（432±72）个／mm^2。树突状细胞呈高反光颗粒，伴树枝状突起，分散于结膜各层，细胞的平均密度为（22±25）个／mm^2。在结膜上皮与固有层之间，存存一层致密的高反光的基底膜。球结膜固有层由高度血管化的疏松结缔组织组成，可见大最小规则的条状纤维或大片的网状纤维，弥散分布小圆高亮的游走细胞，还可清晰观察钊血管中血液的流动。结论活体激光共焦显微镜是研究球结膜组织结构的一种有效工具，为眼表疾病的临床诊断提供了快速而无创的检查的手段。

正常人结膜杯状细胞的体外培养

目的体外建立人结膜杯状细胞系,观察其形态结构等生物学特征,并观察杯状细胞超微结构。设计实验性研究。研究对象体外培养的人结膜杯状细胞。方法外眼手术中取正常球结膜组织,放入含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中,以组织块培养法进行培养。通过倒置相差显微镜下细胞形态、特殊组化染色和免疫组化方法鉴定杯状细胞。利用透射电镜观察其超微结构。主要指标细胞形态、结构。结果培养24小时后细胞从组织块向外长出,6￣10天后可形成细胞单层,并可传3￣5代。倒置相差显微镜下可见杯状细胞呈长椭圆形,胞浆中含有黏蛋白颗粒。对阿利新蓝/过碘酸-希夫试剂染色(AB-PAS染色)呈阳性;对杯状细胞特异性中间丝角蛋白-7(CK-7)和黏蛋白MUC5AC单克隆抗体均呈阳性反应,而对复层非角化上皮细胞特异性中间丝角蛋白-13(CK-13)呈阴性反应。透射电镜下可见离体杯状细胞体积较大,呈长椭圆形,核位于细胞一端,胞浆中充满圆形黏蛋白颗粒,大小不一。传三代后杯状细胞纯度可达80%左右。结论人结膜杯状细胞可在体外培养并传代,并保持在体细胞特性,为进一步研究杯状细胞相关的眼表疾病提供实验室基础。(眼科,2006,15:172-176)

神经生长因子对人结膜杯状细胞增殖与黏蛋白基因表达的影响

目的探讨神经生长因子（NGF）对体外培养人结膜杯状细胞增殖与黏蛋白MUC5AC基因表达的影响。方法利用抗NGF高亲和力受体（TrkA）的单克隆抗体进行免疫组织化学染色，初步检测杯状细胞膜表面是否存在此受体。在传代的人结膜杯状细胞中加入含20、40、60及80ng／ml NGF的RPMI-1640培养液，加入不含NGF的培养液作为阴性对照。于加药后1、3、5d分别用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察细胞增殖情况。加入含80ng／ml NGF的培养液后第5天，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测NGF对杯状细胞中MUCSAC基因表达的影响。结果人结膜杯状细胞膜表面存在NGF高亲和力受体（TrkA）。加入NGF后不同时间（F=12．766，P=0．000）、不同浓度组（F=892．406，P=0．000）之间的吸光度值比较，差异有统计学意义，时间和浓度这两个因素之间无交互作用（F=1．778，P=0．095）。NGF组MUC5AC的mRNA表达量明显高于对照组（t=4．963，P=0．000）。结论体外培养的人结膜杯状细胞膜表面存在NGF高亲和力受体；NGF有促进杯状细胞增殖的作用，并随浓度增加和时间的延长而促增殖作用增强；NGF能够促进杯状细胞黏蛋白MUC5AC基因表达。

电子烟对小鼠角膜上皮和结膜杯状细胞的影响

目的:研究电子烟对小鼠角膜上皮组织结构及结膜杯状细胞的影响。方法:实验研究。18只雄性c57BL小鼠,8周龄,随机分为A、B、C组,每组6只。A组不做任何干预,B组采用0 mg尼古丁电子烟进行干预,C组采用12 mg尼古丁电子烟进行干预。每日2次,每次30 min。干预12周后,行苏木精-伊红染色观察角膜上皮情况,透射电子显微镜下观察小鼠角膜上皮组织超微结构变化,免疫荧光染色观察Mucin 5AC阳性表达的杯状细胞的改变。各组间结果数据采用单因素方差分析和事后分析。结果:干预12周后,A组上皮细胞层数为5.0±0.7,而B、C组上皮细胞层数分别为7.0±0.7和7.0±0.6,A组与B、C组间差异有统计学意义(F=18.50,P<0.001),而B组和C组间差异无统计学意义。与A组相比,B、C组角膜上皮微绒毛明显减少(F=153.50,P<0.001),长度变短(F=29.54,P<0.001),排列紊乱。在结膜穹隆部的上皮中,B组和C组的Mucin 5AC阳性细胞数目比A组明显减少(F=420.10,P<0.001),但是B组和C组之间Mucin 5AC阳性细胞数目差异无统计学意义。结论:电子烟会损伤小鼠角膜上皮的组织结构,减少结膜杯状细胞的数目。