应用Proofman-LMTIA技术双重检测当归和东当归

通过梯型熔解温度核酸等温扩增技术(Ladder-shape melting temperature nucleic acid isothermal amplification,LMTIA)与校对酶介导探针(Proofreading enzyme-mediated probe cleavage,Proofman)联合的方法对当归和东当归进行双重检测。以ddH2O为阴性模板,当归和东当归基因组DNA为阳性模板,测定当归和东当归引物的最适温度、灵敏度及稳定性,并进行了真实样品检测。结果表明,应用Proofman-LMTIA双重检测当归和东当归,引物测定的最适温度为62℃,当归引物灵敏度低至10 pg/μL,东当归引物灵敏度低至1 pg/μL,具有良好的稳定性。7份市售当归样品经检测均为当归。该研究可为当归和东当归的鉴别提供一种新的检测方法。

RPA检测技术在禽源病原检测中的研究进展

重组酶聚合酶扩增(recombinant polymerase amplification, RPA)是一种近年来研究者关注较多的新型恒温核酸扩增技术,该方法操作便捷、扩增速度快、特异性强及灵敏度高,无需借助精密仪器,且在恒温环境下(25~45℃)即可完成核酸检测,极有可能取代传统PCR检测技术。RPA检测技术迄今发展十余年,已广泛应用于细菌、病毒、真菌、寄生虫及耐药基因检测等领域,被认为是当前最有潜力的快速分子诊断工具,具有较为广泛的应用前景。笔者就RPA检测、技术优势、常见检测方式及其在禽源病原检测方面的研究进展进行概述,旨在为临床禽源病原新型检测技术的研究提供一定理论参考。

MicroRNA检测方法研究进展

MicroRNA(miRNA)是一类广泛存在于真核细胞中的单链非编码小RNA,在机体中通过诱导mRNA降解或调节蛋白质水平调控基因表达。研究表明,miRNA的异常表达与多种人类疾病密切相关,可作为早期诊断和疾病筛查理想的生物标志物,因此,实现miRNA早期精准检测在临床诊断和医学研究中具有重要意义。本文围绕传统检测方法与新型miRNA生物传感器两方面,总结了miRNA检测方法的研究成果,并提出了未来的发展趋势。

旋转式三温区微流控PCR扩增平台的研制

微流控芯片用于聚合酶链式反应(PCR)可提高检测效率和自动化程度,但目前把核酸提取、扩增、检测功能集成到一块芯片上仍比较困难,此外,微流控芯片专用PCR仪也存在温度控制不够快速、精准的问题。作者采用空间上温度循环代替时间上温度循环的设计思路,搭建了一套旋转式三温区微流控PCR扩增平台,对大肠杆菌进行核酸提取和扩增。结果表明,旋转式三温区微流控PCR扩增平台拥有较好的热均匀性和热稳定性,平台的升降温速率分别为3.5℃/s和2.67℃/s,单次循环时间为110 s。与9700型PCR仪相比,所建平台的温度控制方案更为简单、升降温速率更高、循环时间更短。本研究结果可为实现核酸提取、扩增一体化的微流控PCR设备的研发提供参考。

荧光定量核酸扩增检测技术与环介导等温扩增技术在呼吸道感染病原体检测中的对比研究

目的对比荧光定量核酸扩增检测技术与环介导等温扩增技术在呼吸道感染病原体检测中的应用价值。方法随机在2020年1月~2023年1月天津市河东区疾病预防控制中心接收的呼吸道感染的患者中选取120例作为研究对象,分别采用荧光定量核酸扩增(PCR)检测技术与环介导等温扩增技术(LAMP)检测呼吸道病原体,并对检测结果进行比较分析。结果120例患者中使用LAMP检出细菌感染85例(阳性率为70.83%)。荧光定量PCR检出细菌感染72例(阳性率60.00%),差异无统计学意义(P>0.05);其中LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的检出率高于荧光定量PCR法,差异有统计学意义(P<0.05);采用荧光定量PCR与LAMP法对呼吸道感染10种病原体进行检测,结果表明,除LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、流感嗜血杆菌的检测一致性极好,荧光定量PCR对耐甲氧西林葡萄球菌的检测一致性极好(Kappa≥0.75),其余病原体采用荧光定量PCR与LAMP法检测一致性均中等(0.4≤Kappa<0.75)。结论荧光定量PCR与LAMP两种检测方法对呼吸道感染病原体检出率均较高,其中LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的检出率高于荧光定量PCR法。

核酸等温扩增技术在病毒检测中的应用

病毒是引发人类疾病的主要病原体之一.传统的聚合酶链式反应(PCR)技术虽然被广泛应用于病毒分子诊断,但其对温度的要求较为严格,限制了其在现场诊断中的应用.为了满足现场快速诊断的需求,核酸等温扩增技术得到快速发展,其无需热循环,可以在恒定温度下实现核酸扩增,可适应不同的应用场景.本文综合评述了等温扩增技术在病毒检测领域的最新进展,从病毒样本采集、核酸提取、等温扩增检测等几个方面分别进行阐述,探讨了酶辅助等温扩增技术、无酶等温扩增技术以及与多体系串联的级联扩增技术的原理、关键参数及其病毒检测应用,并对比了市场上相关试剂盒的特点.此外,讨论了当前核酸等温扩增技术在病原体检测应用中面临的一些难题,如提取效率、稳定性和成本等,提出了未来的发展方向,为进一步改善现场诊断效率提供了新的思路.

多温区恒等温快速核酸检测仪温度校准方法研究

恒等温扩增技术无需反复升降温和循环,能提高核酸扩增和检测的速度,被广泛应用于核酸POCT设备中。本文针对多温区恒等温快速核酸检测仪的结构、控温原理及关键点,对多温区快速核酸检测仪的温度偏差、升温速率、温度波动度和温度持续时间偏差进行校准和分析,并验证了该校准方法的可行性和合理性。

核酸信号放大技术在生物检测中的应用研究进展

近年来,核酸扩增技术在食品安全控制、环境监测和医药领域都发挥着越来越重要的作用。本文介绍了部分核酸扩增技术,阐述了这些核酸扩增技术的原理,综述了这些核酸扩增技术在生物检测中的应用,并对生物样品快速检测的应用前景进行展望,以期为相关研究提供参考。

血站的核酸检测与酶免检测平行筛查血液的应用分析

目的进行核酸检测与酶免检测平行筛查血液对血站的效果探究。方法本次选取本血站中收集的无偿献血者标本15427例,各样本进行平行筛查血液操作,检测技术包括核酸扩增技术与酶联免疫法,分析检查结果。结果经酶联免疫法筛查后乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙肝病毒抗体(抗-HCV)、艾滋病病毒1型/艾滋病病毒2型(抗-HIV-1/2)无反应性及仅1种试剂为反应性的标本共15329例;经核酸扩增技术检测的15329例,发现阴性标本15231例,阳性标本为98例,阳性标本检出率达到0.64%;酶联免疫法检测后,开展HB-sAg、抗-HBs、抗-HBe、HBeAg、抗-HBc等筛查工作,检测有52例属于阳性标本,确认阳性率达到53.06%;通过定量检测98例核酸扩增技术检测阳性标本,结果发现有43例为HBV DNA阳性,阳性率达到82.69%(43/52),结果未发现HIV RNA阳性样本、HCV RNA阳性样本。结论在血站血液筛查中应用核酸扩增技术检测、酶联免疫法检测平行筛查,可达到两种检测手段互补的效果,及时发现病毒阳性样本,提高血液筛查质量,降低病毒性疾病输血传播风险,保证血液安全性。

核酸等温扩增技术检测动物源食品研究进展

综述了依赖核酸序列的扩增(NASBA)、链替代扩增(SDA)、滚环扩增(RCA)、环介导等温扩增(LAMP)、赖解旋酶恒温基因扩增(HDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、梯型熔解温度等温扩增(LMTIA)几种主要核酸等温扩增检测技术的发展及其基本原理、特点和在动物源食品检测中的应用,并对几种主要核酸等温扩增检测技术的特点及应用进行比较。

核酸扩增技术在动物源性食品掺假中的研究进展

核酸扩增技术是一种在体外快速扩增特定DNA片段的分子生物学技术,目前已广泛应用于传染病检测、生物勘测、食品安全检测、临床诊断和公共卫生监测等研究领域。其中,食品安全领域的问题日渐成为人们关注的焦点,尤其是动物源性食品掺假的现象屡禁不止。在过去的科学研究中,动物源性食品掺假的核酸扩增技术发展迅速,取得了很大进展。该文就核酸扩增技术中的凝胶电泳PCR、实时荧光定量PCR、数字液滴PCR、环介导等温扩增、交叉引物扩增、滚环扩增、重组酶聚合酶扩增等技术的原理及在动物源性食品掺假检测中的应用进行综述。讨论了各类核酸扩增技术的关键优势和局限性,简要介绍了现有的挑战和进一步的研究进展,旨在为动物源性食品掺假核酸扩增技术的发展指明方向。

重组酶聚合酶扩增技术在动物疫病诊断中的应用研究进展

重组酶聚合酶扩增(RPA)技术是一种基于T4噬菌体复制机理为主要反应机理的核酸恒温扩增技术,广泛应用于动物疫病诊断、动物食品安全和遗传分析等领域。反应可在25~42℃温度条件下20 min完成快速扩增,具有条件温和、灵敏度高、特异性好、无需昂贵试验仪器和简便快捷等优点,适用于现场快速检测,已被应用于常见动物疫病的诊断。为让更多技术人员了解RPA技术诊断的优势,论文对RPA技术原理、引物探针设计、检测方法及在动物疫病诊断中的应用进行了分析。

基于CRISPR/Cas系统的核酸生物传感器

近年来,CRISPR/Cas系统已经成为转录调控和基因组编辑的重要工具。除了在基因编辑领域的贡献,CRISPR/Cas系统独特的靶核酸顺式切割和非特异性单链核酸反式切割能力,在开发核酸检测的新型生物传感器方面展现出巨大潜力。构建基于CRISPR/Cas系统高灵敏度生物传感器的关键通常依赖其与不同信号扩增策略,诸如核酸扩增技术或特定信号转导方法的结合。基于此,本文旨在通过介绍不同类型的CRISPR/Cas系统,全面概述基于该系统的核酸检测生物传感器的研究进展,并重点对结合核酸扩增技术(PCR、LAMP、RCA、RPA和EXPAR)、灵敏的信号转导方法(电化学和表面增强拉曼光谱)和特殊结构设计生物传感的三大类型信号放大策略的CRISPR/Cas生物传感器进行总结和评论。最后,本文对目前的挑战以及未来的前景进行展望。

犬细小病毒Proofman-LMTIA检测方法

为评价Proofman探针的梯型熔解温度等温扩增技术(LMTIA)检测核酸的性能,以Proofman-LMTIA快速检测犬细小病毒为例,采用实时荧光定量PCR方法和微滴式数字PCR方法进行对比分析。针对犬细小病毒基因的特异性序列设计引物和Proofman探针,通过优化反应条件,对方法的特异性、灵敏度进行测试,再通过实时荧光定量PCR方法、微滴式数字PCR进行对比验证。结果表明,所建立的Proofman-LMTIA方法在最适反应温度为61℃时,与猫、犬等基因组DNA无交叉反应,灵敏度达到8拷贝/μL,且能够在20 min内完成检测,与实时荧光定量PCR和数字PCR方法结果具有一致性。该方法不仅在恒温条件下即可扩增,且具有快速、灵敏、高效等优点,适用于病毒的现场快速检测。

实时荧光RNA恒温检测在气管支气管结核疗效监测中的应用价值

目的:分析实时荧光RNA恒温检测技术(SAT-TB)和实时荧光定量PCR检测技术(qRT-PCR)在气管支气管结核患者治疗早期对抗结核治疗效果的监测作用。方法:收集2021年1—12月在西安市胸科医院完成治疗的168例初治气管支气管结核患者,分析其中每2周做1次气管镜的94例病原学阳性患者的初入院(基线)及治疗2、4、6、8、10和12周时支气管肺泡灌洗液标本的分枝杆菌MGIT 960培养、SAT-TB和qRT-PCR的检测结果;并以MGIT 960培养结果为参照标准,分析SAT-TB和qRT-PCR检测结果的动态变化规律及检测效能。最后对168例患者培养阴转时间与首次SAT-TB法测定的探测时间(dt值)之间的关系进行分析。结果:分析每2周做1次气管镜检查的94例患者检测结果显示,MGIT 960培养在基线至治疗12周检测的阳性率从87.23%(82/94)下降至1.06%(1/94),下降幅度为98.78%(81/82);qRT-PCR从92.55%(87/94)下降至29.79%(28/94),下降幅度为67.81%(59/87);SAT-TB法从93.62%(88/94)下降至15.96%(15/95),下降幅度为82.95%(73/88)。qRT-PCR和SAT-TB下降幅度均低于MGIT 960培养(χ^(2)值分别为28.472和12.469,P值均<0.001)。以MGIT 960培养结果为参照标准,qRT-PCR法在各检测点的Kappa值介于0.044~0.416、ROC曲线下面积(AUC)介于0.553~0.715,均明显低于SAT-TB法(Kappa值介于0.107~0.620,AUC值介于0.642~0.814)。168例患者阴转时间在1~4周时首次SAT-TB法检测的dt值[7.264(4.891,10.990)]明显长于5~8周[5.113(3.520,6.390)]和9周及以上[5.222(4.068,6.886)],差异均有统计学意义(Z=-4.318,P<0.001;Z=-2.017,P=0.044)。结论:SAT-TB法用于病原学阳性的气管支气管结核患者的早期疗效监测时效果优于qRT-PCR。

液滴微流控结合核酸扩增技术在食源性致病菌检测中的应用

食源性致病菌是影响食品安全的重要因素,随着生物技术发展及人们对食品安全要求的提高,食源性致病菌的检测方法也不断更新和升级。微流控技术将样品预处理、分离、检测等过程集成在微小的芯片上完成多种功能,而液滴微流控作为其中一个重要的分支,可利用两液体互不相溶特性形成的分散微液滴进行高通量的测试。本文针对核酸扩增方式的不同,比较总结了液滴微流控-数字化聚合酶链式反应、液滴微流控-数字化环介导等温扩增、液滴微流控-数字化重组酶聚合酶扩增检测方法的特点,介绍了其在食源性致病菌检测中的应用,并对该技术的未来发展前景进行了展望。液滴微流控技术结合数字化核酸扩增,可实现对食源性致病菌的智能化、连续化、精准化和微型化的快速检测,本文为其在食源性致病菌快速检测领域的发展提供了参考资料。

基于核酸等温扩增技术金黄色葡萄球菌检测的研究进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)作为一种食源性致病菌,是导致食品安全和公共卫生事件的主要病原体之一,开发快速准确的金黄色葡萄球菌检测技术是保障食品安全和提高食源性致病菌防控水平的关键措施。核酸等温扩增技术具有检测速度快、灵敏度高和设备简单等优点,在金黄色葡萄球菌检测方面具有很大的应用前景。基于此,该文简要介绍了核酸等温扩增技术的原理及优缺点,主要阐述了核酸等温扩增技术在金黄色葡萄球菌检测上的应用,并总结了目标产物检测技术,为金黄色葡萄球菌等温扩增快速检测技术的开发提供理论支持,为食品安全控制和食源性致病菌监控工作奠定基础。

恒温扩增核酸仪校准方法

介绍了恒温扩增核酸分析仪的工作原理。根据仪器的性能提出了该仪器的校准项目和技术指标:温度示值误差、温度均匀度、温度波动度、样本检测重复性、荧光强度或浊度检测重复性和荧光强度或浊度线性;重点探讨了仪器计量指标的校准方法,形成了一套系统的恒温扩增核酸分析仪校准方法,并对恒温扩增核酸分析仪进行了实际校准。结果表明,该方法科学合理、简便易行,可操作性强,可用于评价仪器计量性能,为仪器日常的校准工作以及国家计量校准规范的制定奠定了基础。

核酸可视化检测技术研究进展

传统核酸检测技术依赖于以热循环为基础的聚合酶链式反应和昂贵的检测仪器,不适合现场快速检测。快速检测的发展趋势应是低成本和便携式仪器,结合了等温扩增技术和可视化检测技术的核酸可视化检测在现场快速检测领域有着巨大的发展潜力和应用前景。本文综述了等温扩增技术和可视化检测技术的种类及特点,并对核酸可视化检测技术在现场快速检测中的应用进行了展望。

重组酶聚合酶扩增技术研究进展

重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术是一种新兴的核酸恒温扩增技术,具有灵敏度高、特异性强、反应快速等特点。利用RPA技术可以对核酸拷贝数进行绝对定量并且可以同时检测多个靶标核酸序列,结合侧流层析试纸条或荧光信号监测装置等简易实验设备即可直接观察检测结果。就RPA技术的原理、发展、技术特点及其近年来在体外诊断、病原检测等领域的研究进展作一综述,旨在为该技术的深入研究和应用提供参考。