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Sero-Prevalence and Risk factors of Contagious Bovine Pleuropneumonia (CBPP) in Afgoye District Lower Shabelle Region, Somalia
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作者 Ahmed Mohamed Ahmed Sumaya Hassan Ali +7 位作者 Abdisalam Mohamed Ali Abdirazack Saleban Osman Binti Abubakar Mohamed Abdifatah Mohamud Ibar Shafii Abdullahi Mohamed Mohamed Abdelrahman Mohamed Ahmed Ali Omar Zakaria Ibrahim Issack 《Open Journal of Veterinary Medicine》 CAS 2024年第2期11-20,共10页
Contagious bovine Pleuropneumonia (CBPP) is an infectious and highly contagious respiratory disease of cattle and water buffalo, caused by the Mycoplasma mycoides subspecies mycoides. It induces significant economic l... Contagious bovine Pleuropneumonia (CBPP) is an infectious and highly contagious respiratory disease of cattle and water buffalo, caused by the Mycoplasma mycoides subspecies mycoides. It induces significant economic losses and leads to a severe livestock production problem, negatively influencing people’s livelihoods of affected countries. In Somalia, there is no updated data on the prevalence and distribution of the disease. Hence, a descriptive cross-sectional study was conducted from September 2022 to June 2023 in different villages under the Afgoye District of lower Shabelle region, Somalia. The main purpose of this study is to assess the sero-prevalence and identify the associated risk factors for the occurrence of the disease. In this study, villages, age, sex, breed, and body condition were considered as risk factors. A total of 90 blood samples were collected and tested in the laboratory using the Anti-CBPP Elisa kit test. Out of 90 serum samples from herd cattle, 32 were positive, resulting in an overall prevalence of 35.5%. In addition, we found a statistically significant variation between the prevalence of the disease and factors such as sex, age, body condition and breeds. In summary, the overall prevalence of Contagious bovine pleuropneumonia in this study area is worth to be considered because there is a low quality of health care and less awareness of the Contagious bovine Pleuropneumonia effects on herds, which warrants the official authorities to act and follow appropriate preventive and control measures to reduce the incidence of the disease and generate appropriate controlling and prevention measures in all regions of Somalia. 展开更多
关键词 contagious bovine pleuropneumonia SERO-PREVALENCE CATTLE SOMALIA MYCOPLASMA Cross Sectional Study
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Development of an Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Seromonitoring Contagious Bovine Pleuropneumonia Using Recombinant Lipoprotein LppQ of Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC as Antigen
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作者 XIN Jiu-qing GAO Yun-long +2 位作者 LI Yuan WANG Yan-fan QIAN Ai-dong 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2007年第1期100-107,共8页
Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC (MmmSC) is the etiological agent of contagious bovine pleuropneumonia (CBPP). The lipoprotein LppQ encoded by lppQ gene is specific to MmmSC and is found in the type strain an... Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC (MmmSC) is the etiological agent of contagious bovine pleuropneumonia (CBPP). The lipoprotein LppQ encoded by lppQ gene is specific to MmmSC and is found in the type strain and in field strains isolated in Europe, Africa, and Australia, as well as in vaccine strains. No serological cross-reactions were observed with the related mycoplasmas of the Mycoplasma mycoides cluster. The N-terminal domain of the mature lipoprotein LppQ is hydrophilic, and it induces a strong, specific, early, and persistent immune response in naturally and experimentally infected animals. Mycoplasma-specific TGA (Trp) codons are utilized as stop codons in most other organisms. The lppQ N-terminal fragment from MmmSC HVRI X strain, the Chinese strain for CF antigen production, was mutated with one-step overlapping extension PCR. Sequence analysis confirmed the successful mutation from A to G in codon 198 in the lppQ gene. The fragment containing the mutation site was subcloned into the pET32a expression vector. The recombinant protein with molecular weight of 42 kDa was purified using the Ni-NTA His.Bind purification kit, with a purity of up to 95%. Western blot indicated that the standard positive serum of CBPP could react with the recombinant protein. The purified protein was diluted to 0.35 μg mL^-1, and coated to microtiter enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) plates. Indirect ELISA reaction conditions were optimized. The value of P/N was determined to be 4.8 (0.934/0.193), the sensitivity to be 95.8% (46/48), and the specificity to be 98.9% (161/163). 3 817 cattle serum samples from three different provinces were detected by the indirect ELISA and CFT. The Kappa value is 0.63, which is middle or high agreement between the two methods. 展开更多
关键词 contagious bovine pleuropneumonia cbpp lipoprotein LppQ MUTAGENESIS indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
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牛支原体和丝状支原体丝状亚种双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量:3
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作者 马芷忻 武琪 +2 位作者 刘桐 辛九庆 徐青元 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期262-268,共7页
牛传染性胸膜肺炎和牛支原体病均为重要的牛传染病,两者均可致牛出现呼吸系统症状,临床上难以区分。为建立鉴别诊断牛传染性胸膜肺炎和牛支原体病的双重Taq Man荧光定量PCR检测方法,本研究根据这两种病的病原丝状支原体丝状亚种和牛支... 牛传染性胸膜肺炎和牛支原体病均为重要的牛传染病,两者均可致牛出现呼吸系统症状,临床上难以区分。为建立鉴别诊断牛传染性胸膜肺炎和牛支原体病的双重Taq Man荧光定量PCR检测方法,本研究根据这两种病的病原丝状支原体丝状亚种和牛支原体的基因组保守区域(丝状支原体丝状亚种nt826-nt1742,牛支原体nt189-nt618)分别设计引物与探针,通过优化反应体系与反应条件,建立同时检测这两种病原的Taq Man荧光定量PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方法仅对丝状支原体丝状亚种模拟样品和牛支原体检测结果为阳性,而巴氏杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒、无乳支原体、山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、关节炎支原体Leachii株检测结果均为阴性,特异性较强。分别以1.0×10~7拷贝/μL~1.0×10~1拷贝/μL的p EASY-Mmm和p EASY-Mb质粒标准品为模板,进行敏感性试验,结果显示,该方法对丝状支原体丝状亚种和牛支原体重组质粒标准品的检测限均为1.0×10~1拷贝/μL,敏感性较高。对不同浓度质粒标准品混合物的重复性试验结果显示,组内与组间重复性试验变异系数均小于2.5%,重复性较好。利用该方法对112份临床样品(104份鼻拭子、8份肺组织样品)检测,结果显示,丝状支原体丝状亚种检测结果和已发表PCR方法检测结果一致,均为阴性,而本实验建立的方法检测出4份牛支原体阳性样品,且经测序证实检出样品为真实阳性样品,而已发表的多重PCR方法检测该病原结果均为阴性。本研究建立了能够同时检测丝状支原体丝状亚种和牛支原体的双重Taq Man荧光定量PCR方法,其特异性强、敏感性高、重复性好,可用于各种临床样品的检测,为这两种病原的快速检测和流行病学调查提供了技术手段。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 牛支原体 TaqMan荧光定量PCR
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全球牛传染性胸膜肺炎的流行和防控
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作者 宋建德 孙映雪 +4 位作者 袁丽萍 张秀娟 李昂 王梦瑶 郑雪光 《中国动物检疫》 CAS 2023年第1期1-6,共6页
本文回顾了全球牛传染性胸膜肺炎(也称牛肺疫)历史流行情况,简述了部分国家牛肺疫消灭史,总结了全球牛肺疫防控成效及进展,分析了全球牛肺疫流行状况及特点。迄今为止,欧洲、北美洲和大洋洲已经彻底消灭了牛肺疫,全球已有24个国家被世... 本文回顾了全球牛传染性胸膜肺炎(也称牛肺疫)历史流行情况,简述了部分国家牛肺疫消灭史,总结了全球牛肺疫防控成效及进展,分析了全球牛肺疫流行状况及特点。迄今为止,欧洲、北美洲和大洋洲已经彻底消灭了牛肺疫,全球已有24个国家被世界动物卫生组织(WOAH)认可为无牛肺疫国家;2005—2022年,全球共有34个国家(非洲32个、亚洲2个)累计报告疫情4727起,发病动物365506头/只;亚洲的马来西亚和沙特阿拉伯存在疫情散发,非洲撒哈拉以南地区是主要流行区域;总体看,全球牛肺疫流行趋势趋缓,特别是近年报告疫情的国家数量和疫情数都大幅下降。此外,本文还简述了我国牛肺疫消灭史。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎(牛肺疫) 流行状况 全球 防控 消灭
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牛传染性胸膜肺炎研究进展 被引量:1
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作者 徐博文 邵建宏 +2 位作者 王永刚 陈德镁 罗宝正 《广东畜牧兽医科技》 2023年第4期48-53,共6页
牛传染性胸膜肺炎是由丝状支原体亚种引起的严重牛科动物传染性疾病,是WO-AH规定必须报道的重要传染病之一,属我国一类动物疫病。该病于20世纪初传入我国并在我国多个地区暴发流行,导致大量牛只死亡,相关产品的出口贸易受到严重影响,经... 牛传染性胸膜肺炎是由丝状支原体亚种引起的严重牛科动物传染性疾病,是WO-AH规定必须报道的重要传染病之一,属我国一类动物疫病。该病于20世纪初传入我国并在我国多个地区暴发流行,导致大量牛只死亡,相关产品的出口贸易受到严重影响,经济损失惨重。1996年我国宣布消灭该疾病,但直至2011年才获WOAH认可为无CBPP国家。目前该病在非洲、拉丁美洲等地区频发,严重影响当地农牧业发展,造成巨大经济损失;近年来该病在我国周边国家仍有报道,具有再次传入我国的风险。我国对牛传染性胸膜肺炎的研究分析工作与国外相比较晚、较少,该文结合国内外的研究进展,从牛传染性胸膜肺炎的病原学特征、流行病学特点、致病机制、临床特征、检测与诊断等方面进行系统阐述,并结合疫病发病机理和流行特点提出了防控建议,以期为我国牛传染性胸膜肺炎的深入研究、监测防控及预警提供参考。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 牛肺疫 cbpp 病原学 流行病学 疾病防控
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牛支原体套式PCR检测方法的建立 被引量:24
6
作者 李媛 董惠 +5 位作者 张美晶 陈超 曹培丽 郭丹 姜海芳 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期709-711,共3页
为建立牛支原体检测方法,本研究采用牛支原体的oppD/F基因的两对特异性引物,建立了牛支原体的套式PCR检测方法。该套式PCR可以从100ccu/mL(color change unit颜色变化单位)的牛支原体培养物中检出目的片段;同时还可以从病牛肺脏、病牛... 为建立牛支原体检测方法,本研究采用牛支原体的oppD/F基因的两对特异性引物,建立了牛支原体的套式PCR检测方法。该套式PCR可以从100ccu/mL(color change unit颜色变化单位)的牛支原体培养物中检出目的片段;同时还可以从病牛肺脏、病牛鼻拭子中扩增出目的片段,而且结果与病原分离结果一致。特异性试验结果表明,该方法与其它支原体无交叉反应,是一种特异性强、敏感性高的牛支原体检测方法。 展开更多
关键词 牛支原体 无乳支原体 牛传染性胸膜肺炎 套式PCR
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牛霉形体PCR检测方法的建立 被引量:7
7
作者 李媛 董惠 +5 位作者 张美晶 陈超 曹培丽 郭丹 姜海芳 辛九庆 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期416-420,共5页
参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法,并对该方法进行了敏感性和特异性试验。该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体... 参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法,并对该方法进行了敏感性和特异性试验。该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体培养物中检出目的片段;经对丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)PG1株、丝状霉形体丝状亚种LC型(MmmLC)Y-goat株、山羊霉形体山羊亚种(Mccp)87001株、无乳霉形体(M.agalactiae)PG2株、绵羊肺炎霉形体Y-98株等亲缘关系相近的霉形体纯培养物检测,结果证实该方法具有良好的特异性。利用建立的PCR检测方法可以从人工感染牛的鼻拭子和临床发病牛肺中扩增出目的片段,与分离培养结果完全符合,本方法为国内首次建立的敏感、特异、快速的牛霉形体PCR检测方法。 展开更多
关键词 牛霉形体 牛传染性胸膜肺炎 聚合酶链式反应
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应用重组抗原建立检测牛传染性胸膜肺炎的间接ELISA方法 被引量:6
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作者 辛九庆 高玉龙 +2 位作者 李媛 王砚范 钱爱东 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期181-186,共6页
目的丝状支原体丝状亚种SC(MycoplasmamycoidessubspmycoidesSC,MmmSC)是引起牛传染性胸膜肺炎(contagiousbovinepleuropneumonia,CBPP)的病原体。成熟的脂蛋白LppQN端是亲水性的,在自然感染和人工感染时,特异性免疫反应产生早,持续时间... 目的丝状支原体丝状亚种SC(MycoplasmamycoidessubspmycoidesSC,MmmSC)是引起牛传染性胸膜肺炎(contagiousbovinepleuropneumonia,CBPP)的病原体。成熟的脂蛋白LppQN端是亲水性的,在自然感染和人工感染时,特异性免疫反应产生早,持续时间长,抗体滴度高,因此有理由相信脂蛋白LppQN端片段将有可能成为一种理想的CBPP诊断抗原。方法由于TGA密码子在支原体中编码色氨酸(Trp),而在细菌中则为终止密码子,故利用一步重叠延伸PCR突变方法体外诱变中国生产抗原用毒株HVRIⅩ的lppQ基因进行原核表达,利用重组抗原建立间接ELISA方法。结果序列分析表明,将lppQ基因第198位的A成功突变为G,并将突变后的脂蛋白LppQN端基因片段插入原核表达载体pET32a的多克隆位点,构建了原核表达载体。重组菌经诱导后,表达出了分子量约为42kD、带有6个组氨酸标签的重组融合蛋白,纯化后蛋白质纯度高达95%,Westernblot结果显示,重组蛋白具有很好的免疫活性。将纯化的蛋白质稀释至0.35μg·ml-1,包被酶标反应板,优化反应条件,P/N为4.8(0.934/0.193)。应用TG-ROC统计软件分析确定阴阳性血清临界OD值为0.376,敏感性为95.8%(46/48),特异性为98.9%(161/163)。应用间接ELISA和补体结合试验(CFT)对来自3个省自治区3817头份牛血清进行了检测。结论Kappa值为0.63,两种方法存在中、高度一致性。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 脂蛋白LppQ 突变 ELISA
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丝状支原体丝状亚种SC生物型PCR检测方法的建议 被引量:3
9
作者 辛九庆 高玉龙 +1 位作者 杨婉容 王砚范 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期453-455,共3页
建立了一个可以识别丝状支原体丝状亚种SC生物型 (MmmSC)的PCR方法。根据丝状支原体丝状亚种SC生物型(MmmSC)相关核苷酸序列 ,设计合成了MC1、MC2和SC1、SC2两对引物。MC1、MC2是一对簇特异性引物 ,用于鉴别丝状支原体族 6个成员 ,对Mm... 建立了一个可以识别丝状支原体丝状亚种SC生物型 (MmmSC)的PCR方法。根据丝状支原体丝状亚种SC生物型(MmmSC)相关核苷酸序列 ,设计合成了MC1、MC2和SC1、SC2两对引物。MC1、MC2是一对簇特异性引物 ,用于鉴别丝状支原体族 6个成员 ,对MmmSC、MmmLC扩增出与预期结果相符的 4 6 2bp片段 ;而SC1、SC2是针对MmmSC的一对特异性引物 ,只能对MmmSC扩增出 2 77bp的片段 ,经过VspI、Bsp14 3I和Dral三种限制性内切酶鉴定与预期结果相符 ,而不能扩增出MmmLC型Y_goat代表株 ,说明具有非常好的特异性。对MmmSC进行的敏感性试验显示SC1、SC2引物能够检测到 10 0个CFU ,具有非常高的敏感性。 展开更多
关键词 丝状支原体丝状亚种SC生物型 PCR检测方法 传染性胸膜肺炎 病原 鉴别诊断
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丝状霉形体丝状亚种SC型脂蛋白LppQ基因的序列分析 被引量:2
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作者 高玉龙 李媛 +1 位作者 王砚范 辛九庆 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第10期27-30,共4页
根据基因库发表的丝状霉形体丝状亚种SC型 (MmmSC)脂蛋白LppQ基因序列设计引物 ,采用PCR对国内MmmSC分离株HVRI X株的脂蛋白LppQ基因进行扩增 ,将扩增产物与pMD18 T载体连接并测序。核苷酸序列比较结果显示 ,HVRI X株的LppQ基因序列与... 根据基因库发表的丝状霉形体丝状亚种SC型 (MmmSC)脂蛋白LppQ基因序列设计引物 ,采用PCR对国内MmmSC分离株HVRI X株的脂蛋白LppQ基因进行扩增 ,将扩增产物与pMD18 T载体连接并测序。核苷酸序列比较结果显示 ,HVRI X株的LppQ基因序列与基因库发表的核苷酸序列同源性为 99.8% ;由其推导的氨基酸序列同源性为 99.3%。 展开更多
关键词 丝状霉形体 丝状亚种SC型脂蛋白 LppQ基因 序列分析 PCR 传染性胸膜肺炎
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丝状支原体丝状亚种SC型中国不同地区分离株脂蛋白Q基因的分子特征 被引量:2
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作者 高玉龙 辛九庆 +1 位作者 李媛 王砚范 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期142-146,共5页
根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)脂蛋白Q(LppQ)基因序列设计并合成一对引物,利用PCR扩增方法,从我国不同省区的MmmSC分离株HVRI-Ⅹ、BenⅠ、QingⅠ、MuⅠ和模式株PG1中获得了LppQ基因1303bp的片段,将该片段克隆到PMD18-T载体... 根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)脂蛋白Q(LppQ)基因序列设计并合成一对引物,利用PCR扩增方法,从我国不同省区的MmmSC分离株HVRI-Ⅹ、BenⅠ、QingⅠ、MuⅠ和模式株PG1中获得了LppQ基因1303bp的片段,将该片段克隆到PMD18-T载体上,通过对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定,证明得到了含有目的基因片段的阳性重组质粒。采用Sanger's双脱氧末端终止法对插入片段进行核苷酸序列测定,获得了HVRI-Ⅹ、BenⅠ、QingⅠ、MuⅠ株和模式株PG1LppQ基因核苷酸序列。核苷酸序列比较结果显示,国内4个MmmSC分离株与GenBank公布的LppQ基因核苷酸序列同源性均在99.7%以上,氨基酸序列同源性均在99%以上;与模式株PG1的核苷酸序列同源性在99.7%以上,氨基酸序列同源性均在99.3%以上。国内4个MmmSC分离株之间的核苷酸序列同源性均在99.7%以上,氨基酸序列同源性均在99.3%以上。对HVRIⅩ株LppQ基因氨基酸亲水性和蛋白表面可能性进行了分析,证实LppQN末端富含亲水氨基酸,比C末端更有可能定位在蛋白表面。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 丝状史原体丝状亚种SC型 脂蛋白 LppQ 分子特征
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基于丝状支原体丝状亚种P35反应原性的验证及其间接ELISA方法的建立 被引量:2
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作者 闫磊 潘巧 +3 位作者 赵雅芝 郝文君 李媛 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期716-720,共5页
为建立检测丝状支原体丝状亚种(Mmm)的间接ELISA方法,本研究利用生物信息学软件对Mmm的全基因组序列进行了分析,选定大小为540bp的0584基因,该基因是编码分子量为35ku的脂蛋白,并对其免疫反应原性进行研究。利用原核表达系统获得了0584... 为建立检测丝状支原体丝状亚种(Mmm)的间接ELISA方法,本研究利用生物信息学软件对Mmm的全基因组序列进行了分析,选定大小为540bp的0584基因,该基因是编码分子量为35ku的脂蛋白,并对其免疫反应原性进行研究。利用原核表达系统获得了0584基因的重组蛋白rP35,以牛传染性胸膜肺炎(CBPP)阳性血清为一抗进行western blot分析,试验结果为阴性,但Dot-blot试验结果为阳性,证明该蛋白可能是Mmm特有的一种构象依赖性免疫相关蛋白且具有反应原性。以rP35蛋白为包被抗原,通过反应条件优化初步建立了检测CBPP血清抗体的间接ELISA方法,特异性为88.0%,敏感性为89.8%,批内和批间变异系数均小于10%,与商品化试剂盒符合率为84.8%。本研究为研制CBPP血清检测试剂盒提供了一种候选蛋白。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 丝状支原体丝状亚种 间接ELISA
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丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白Q的N末端定点突变及表达载体的构建
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作者 高玉龙 辛九庆 +1 位作者 李媛 王砚范 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期95-99,共5页
根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)LppQ基因序列设计引物,从MmmSC HVRI X株中扩增出了LppQ N末端基因,并将其分别克隆到pUC18和pUC19上,利用一步重叠延伸PCR突变方法将其66位的TGA突变为TGG,经克隆与序列测定证实突变成功后,... 根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)LppQ基因序列设计引物,从MmmSC HVRI X株中扩增出了LppQ N末端基因,并将其分别克隆到pUC18和pUC19上,利用一步重叠延伸PCR突变方法将其66位的TGA突变为TGG,经克隆与序列测定证实突变成功后,将已突变的LppQ N末端基因插入原核表达载体pET32a的多克隆位点,成功地构建了LppQ N末端基因原核表达载体pET32a-LppQ,为其下一步体外表达奠定了基础。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 丝状支原体丝状亚种SC型 脂蛋白 LppQ 定点突变
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丝状霉形体丝状亚种SC型脂蛋白LppQN末端基因克隆与序列分析
14
作者 辛九庆 高玉龙 +1 位作者 李媛 王砚范 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期252-254,共3页
脂蛋白 L pp Q是丝状霉形体丝状亚种 SC型 (Mm m SC)非洲株、欧洲株和疫苗株所特有的。 L pp Q N末端域具有良好的免疫原性 ,在牛体内可诱导产生强大、特异、早期、持续的免疫反应。本研究根据已发表的 L pp Q基因序列设计引物 ,用 Pyro... 脂蛋白 L pp Q是丝状霉形体丝状亚种 SC型 (Mm m SC)非洲株、欧洲株和疫苗株所特有的。 L pp Q N末端域具有良好的免疫原性 ,在牛体内可诱导产生强大、特异、早期、持续的免疫反应。本研究根据已发表的 L pp Q基因序列设计引物 ,用 Pyrobest TM高保真 DNA聚合酶从 Mmm SC HVRI X株中扩增出了 L pp Q N末端基因序列 ,并进行了克隆与序列测定。核苷酸序列比较结果显示 ,HVRI X株的 L pp Q N末端基因序列与国外发表的序列同源性为 99.7% ,由其推导的氨基酸序列同源性为 99.1% ,为脂蛋白 L pp Q 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 丝状霉形体丝状亚种SC型 LppQ N末端 序列分析 基因 克隆
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丝状支原体丝状亚种SC型LppC基因的表达纯化
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作者 李媛 乔祖健 +2 位作者 王亮 张建华 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期90-93,共4页
丝状支原体丝状亚种SC型是A类烈性传染病牛传染性胸膜肺炎的病原体。脂蛋白LppC是重要的免疫优势抗原,LppC基因是MmmSC的特异性基因。本研究通过PCR方法,扩增MmmSC标准株PG1的LppCN末端基因。将该序列克隆到pMDT-18载体上并测序,用pET32... 丝状支原体丝状亚种SC型是A类烈性传染病牛传染性胸膜肺炎的病原体。脂蛋白LppC是重要的免疫优势抗原,LppC基因是MmmSC的特异性基因。本研究通过PCR方法,扩增MmmSC标准株PG1的LppCN末端基因。将该序列克隆到pMDT-18载体上并测序,用pET32a为载体构建重组质粒进行诱导表达。LppCN末端基因长度为644bp,将其与NCBI上发布的Afade株、欧洲群代表株L2比较,它的核酸序列同源性为100%,表明LppC基因在种内高度保守。原核表达结果得到大小为45ku的目的蛋白,用Ni-NTA系统进行纯化得到高纯度的蛋白,Westernblot结果表明,重组蛋白能与牛传染性胸膜肺炎阳性血清反应,具有免疫学活性,为进一步与LppQ融合表达奠定基础。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎(cbpp) 丝状支原体丝状亚种SC(MmmSC) LppC
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丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白QN末端基因的表达、纯化与抗原性分析
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作者 高玉龙 辛九庆 +1 位作者 李媛 王砚范 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期788-791,共4页
为了表达丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)中国分离株HVRIⅩ脂蛋白Q(LppQ)N末端基因,将该基因经PCR扩增后克隆至原核表达载体pET32a中,经酶切、PCR、测序证实获得了重组表达质粒,转化Escherichia coliBL21(DE3)菌,经IPTG诱导后获得可溶性... 为了表达丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)中国分离株HVRIⅩ脂蛋白Q(LppQ)N末端基因,将该基因经PCR扩增后克隆至原核表达载体pET32a中,经酶切、PCR、测序证实获得了重组表达质粒,转化Escherichia coliBL21(DE3)菌,经IPTG诱导后获得可溶性融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的53.7%,用Ni-NTAHis.Bind纯化试剂盒纯化后,蛋白纯度达95%以上。表达蛋白经Western blot检测其抗原活性,结果表明纯化蛋白可与CBPP标准阳性血清发生强烈的反应,而与阴性血清不发生反应。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 丝状支原体丝状亚种SC型 脂蛋白Q LppQ 表达
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牛传染性胸膜肺炎抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量:2
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作者 郝文君 李媛 +2 位作者 周效乾 王秀梅 辛九庆 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期329-336,共8页
旨在建立一种检测牛传染性胸膜肺炎(CBPP)血清抗体的间接ELISA方法,用于该病的监测。利用生物信息学软件对CBPP的病原丝状支原体丝状亚种国内分离株Ben-1株的全基因组进行分析,选取脂蛋白rP0308作为包被抗原,通过一系列反应条件的优化,... 旨在建立一种检测牛传染性胸膜肺炎(CBPP)血清抗体的间接ELISA方法,用于该病的监测。利用生物信息学软件对CBPP的病原丝状支原体丝状亚种国内分离株Ben-1株的全基因组进行分析,选取脂蛋白rP0308作为包被抗原,通过一系列反应条件的优化,建立了基于rP0308蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并对其性能进行评价。结果显示该方法的敏感性为92%,特异性为96%,与牛支原体、牛鼻支原体、无乳支原体、口蹄疫、牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎和牛结核分枝杆菌等阳性血清均不发生交叉反应,批内变异系数在2.41%~6.03%,批间变异系数在2.94%~6.59%,重复性良好。利用本方法和商品化的cELISA试剂盒分别对实验室保存的1648份临床样品进行检测,该方法与商品化试剂盒的阴性符合率为89.1%,阳性符合率为79.2%,总符合率为88.7%。以上研究结果表明,本研究建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,具有良好的临床应用前景。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 rP0308 间接ELISA
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牛霉形体免疫相关性蛋白P51的筛选与鉴定 被引量:1
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作者 李媛 陈维 +4 位作者 呼太飞 刘洋 宋志强 孙文静 辛九庆 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期490-495,共6页
为了筛选免疫原性蛋白,建立牛霉形体的快速诊断方法,利用二维凝胶(2-D)电泳、Western-blot分析及蛋白质谱分析,筛选出一个免疫相关性蛋白P51。以牛霉形体中国分离株Hubei-1为模板,扩增了p51基因,并克隆到原核表达载体pET32a上。结果显示... 为了筛选免疫原性蛋白,建立牛霉形体的快速诊断方法,利用二维凝胶(2-D)电泳、Western-blot分析及蛋白质谱分析,筛选出一个免疫相关性蛋白P51。以牛霉形体中国分离株Hubei-1为模板,扩增了p51基因,并克隆到原核表达载体pET32a上。结果显示,重组蛋白pET32a-p51与牛霉形体阳性血清的Dot-blotting试验结果为阳性,而Western-blotting试验结果为阴性。以pET32a-p51重组蛋白为包被抗原的ELISA试验表明其能与自然感染和人工感染牛霉形体的阳性血清发生特异性反应,而与灭活疫苗免疫的阳性血清不发生特异性反应,与牛传染性胸膜肺炎的阳性血清没有交叉反应。表明P51可能是牛霉形体特有的一种构象依赖性免疫相关蛋白,是一种有前景的诊断用抗原。 展开更多
关键词 牛霉形体 牛传染性胸膜肺炎 二维凝胶电泳 质谱
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应用酶联免疫吸附试验检测牛肺疫血清抗体的研究 被引量:1
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作者 马学恩 郭景芳 +1 位作者 吴海涛 安慧敏 《内蒙古农牧学院学报》 1989年第2期72-79,共8页
本文用普通ELISA和BA--ELISA检测牛肺疫血清抗体并与间接血凝试验和补体结合试验作比较,结果表明阳性检出率BA--ELISA(86.7%,13/15)>普通ELISA(80%,12/15)>间接血凝(53.3%,8/15)>补反试验(40%,6/15)。8种类症鉴别血清中6种呈现... 本文用普通ELISA和BA--ELISA检测牛肺疫血清抗体并与间接血凝试验和补体结合试验作比较,结果表明阳性检出率BA--ELISA(86.7%,13/15)>普通ELISA(80%,12/15)>间接血凝(53.3%,8/15)>补反试验(40%,6/15)。8种类症鉴别血清中6种呈现ELISA阴性。故认为ELISA是一种特异、敏感、快速、简便的血清学检测牛肺疫的方法,适于在现地检验时应用。 展开更多
关键词 肺疫 血清抗体 检测 酶联免疫
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牛传染性胸膜肺炎补反阳性牛病理形态学观察
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作者 赵振华 马学恩 +7 位作者 郭景芳 皇甫玉珩 顾玉芳 佟程浩 王永胜 崔坤 刘兴民 赵彬 《内蒙古农牧学院学报》 1990年第1期21-26,共6页
通过对14头牛肺疫补反阳性牛的病理形态学观察,未发现有牛肺疫的典型病变;肺脏的病原微生物学检查呈阴性结果。但在胸腔和肺脏出现了一些程度不同的修复性变化、淋巴细胞增生性反应和某些局灶性病变。这些变化显然与肺线虫幼虫的寄生有... 通过对14头牛肺疫补反阳性牛的病理形态学观察,未发现有牛肺疫的典型病变;肺脏的病原微生物学检查呈阴性结果。但在胸腔和肺脏出现了一些程度不同的修复性变化、淋巴细胞增生性反应和某些局灶性病变。这些变化显然与肺线虫幼虫的寄生有关,也可能同时存在着对牛肺疫病原体抗原性刺激的免疫反应和既往炎性渗出物的修复过程。观察中还发现,这批病例除肺线虫外,肝片吸虫和心肌肉孢子虫的寄生也相当普遍,所以寄生虫的问题应引起有关部门的重视。 展开更多
关键词 肺疫 病理形态学 传染性胸膜肺炎 补反检疫
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