盾构隧道铺轨前设备安装1米线控制点测量方法研究

城市轨道交通盾构隧道设备安装1米线通常是根据已经铺设完成的轨道面为参考基准进行放线,但为了满足施工进度,设备安装施工有时可能需要先于轨道铺设开始。鉴于此,本文提出了进行平面位置投测的环缝平行偏距法和基于高精度自动跟踪测量全站仪在圆形盾构隧道中进行自由设站及免仪器高的1米线控制点测量方法。最后以福州市轨道交通某盾构区间为例进行实践验证,实现了高效、高精度的设备安装1米线控制点测量。

基于CRISPR/Cas9点突变技术构建HIV-1基因型耐药检测质控品

目的人外周血淋巴细胞株8E5可分泌无感染性HIV-1病毒颗粒,靶向于8E5细胞株基因组整合的HIV-1前病毒基因POL区,基于CRISPR/Cas9点突变技术构建含有POL区耐药突变位点的单克隆细胞株,可用于制备一种安全稳定的新型HIV-1基因型耐药检测质控品。方法设计构建小向导RNA(single guide RNA,sgRNA)和Cas9共表达载体以及携带有目标突变位点的供体单链寡核苷酸(donor single-stranded oligonucleotides,Donor ssODN)共转染8E5细胞,通过流式微孔板分选获得转染成功的阳性单克隆细胞株,通过Sanger测序确认定点突变的编辑效果。对定点突变编辑成功的单克隆细胞株培养至第3代、5代和7代的细胞及细胞分泌到上清中的HIV病毒颗粒进行Sanger测序,验证定点突变的编辑效果。结果成功构建双sgRNA和Cas9共表达载体,与携带有耐药突变位点Q151M的Donor ssODN共转染8E5细胞株的效果良好。对分选获得的共转染阳性单克隆细胞株进行靶位点测序,结果显示成功构建了携带有定点突变Q151M的纯合子单克隆细胞株8E5Q151M。细胞株8E5Q151M多次传代后的细胞及细胞分泌的无感染性HIV-1病毒颗粒可被持续检测出Q151M突变位点。结论利用CRISPR/Cas9点突变技术成功构建稳定携带有Q151M耐药突变位点的细胞株8E5Q151M,为制备HIV-1基因型耐药检测质控品提供新的技术平台。