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弓形虫棒状体蛋白18的原核表达及免疫分析
被引量:
4
1
作者
王素凡
齐辰
+2 位作者
陈滨
吴焜
陈晓光
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期211-215,共5页
目的克隆刚地弓形虫ROP18基因,进行原核表达及重组蛋白的免疫分析。方法提取弓形虫RH株基因组DNA,经PCR获得ROP18基因片段,经双酶切分别连入原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+),构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18,并转化大...
目的克隆刚地弓形虫ROP18基因,进行原核表达及重组蛋白的免疫分析。方法提取弓形虫RH株基因组DNA,经PCR获得ROP18基因片段,经双酶切分别连入原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+),构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。IPTG诱导表达后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳及Western-blot检测。结果 PCR得到约1 665bp目的基因片段,单、双酶切及PCR鉴定结果显示成功构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18;经IPTG诱导后,ROP18基因在大肠杆菌中高效表达;SDS-PAGE电泳及Western-blot分析显示,pET28a-ROP18在相对分子质量约60kD的位置出现目的蛋白条带,pET32a-ROP18在相对分子质量约83kD的位置出现目的蛋白条带,均与理论值相符;Western-blot结果显示重组蛋白与弓形虫慢性感染小鼠血清具有特异免疫反应性。结论成功克隆和表达了ROP18基因,所表达的重组蛋白具有免疫效应,为其功能研究奠定基础。
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关键词
刚地弓形虫
棒状体蛋白18
基因克隆
原核表达
免疫分析
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职称材料
题名
弓形虫棒状体蛋白18的原核表达及免疫分析
被引量:
4
1
作者
王素凡
齐辰
陈滨
吴焜
陈晓光
机构
南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期211-215,共5页
基金
国家自然科学基金(No.30972578
31030066)
+7 种基金
教育部博士点项目(No.20094433120013
20094433120016)
广东省自然科学基金(No.9151051501000075)
广东省"大学生创新实验计划"项目(No.1212110025
1212110027)
南方医科大学大学生课外科研项目(Nos.2010kw082
GWXS20110101
GWXS20110205)~~
文摘
目的克隆刚地弓形虫ROP18基因,进行原核表达及重组蛋白的免疫分析。方法提取弓形虫RH株基因组DNA,经PCR获得ROP18基因片段,经双酶切分别连入原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+),构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。IPTG诱导表达后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳及Western-blot检测。结果 PCR得到约1 665bp目的基因片段,单、双酶切及PCR鉴定结果显示成功构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18;经IPTG诱导后,ROP18基因在大肠杆菌中高效表达;SDS-PAGE电泳及Western-blot分析显示,pET28a-ROP18在相对分子质量约60kD的位置出现目的蛋白条带,pET32a-ROP18在相对分子质量约83kD的位置出现目的蛋白条带,均与理论值相符;Western-blot结果显示重组蛋白与弓形虫慢性感染小鼠血清具有特异免疫反应性。结论成功克隆和表达了ROP18基因,所表达的重组蛋白具有免疫效应,为其功能研究奠定基础。
关键词
刚地弓形虫
棒状体蛋白18
基因克隆
原核表达
免疫分析
Keywords
coplasma gondii
rhoptry protein 18
gene clone
prokaryotic expression
antigenicity analysis
分类号
R382.5 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
弓形虫棒状体蛋白18的原核表达及免疫分析
王素凡
齐辰
陈滨
吴焜
陈晓光
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
4
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职称材料
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