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脐血CD34^+造血干/祖细胞基因表达图谱的研究 被引量:3
1
作者 李群良 蔡海波 +1 位作者 刘启威 谭文松 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期59-62,共4页
目的通过脐血CD34+造血干/祖细胞的基因表达分析,理解造血干/祖细胞生物学特性。方法利用Min-iMACS免疫磁珠法从脐血细胞中分离CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用SMART-PCR技术从微量RNA中扩增产生足够量的cDNA用于高密度点阵膜分析检测C... 目的通过脐血CD34+造血干/祖细胞的基因表达分析,理解造血干/祖细胞生物学特性。方法利用Min-iMACS免疫磁珠法从脐血细胞中分离CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用SMART-PCR技术从微量RNA中扩增产生足够量的cDNA用于高密度点阵膜分析检测CD34+造血干/祖细胞表达的基因。结果在所检测的588个基因中,发现63个基因具有显著的表达水平,其中18个基因强表达。这些基因主要涉及造血干细胞增殖、分化、应激响应、凋亡、转录调节以及细胞周期等。结论对理解脐血干/祖细胞生物学性质以及指导造血干细胞体外培养提供了分子生物学基础。 展开更多
关键词 脐血 cd34^+造血干/祖细胞 SMART—PCR 高密度点阵膜
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Flt3和c-kit在脐血CD34^+干/祖细胞中功能性表达及意义 被引量:1
2
作者 马艳萍 邹萍 +1 位作者 肖娟 黄世昂 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期277-280,共4页
为了解作用于早期造血的细胞因子受体Flt3和c-kit在脐血CD34^+造血干/祖细胞中的表达及功能,从蛋白和基因水平对其进行了研究。采用常规双色直接免疫荧光标记法,使用流式细胞术测定新鲜分离的和体外不同培养时间的脐血CD34^+造血干/祖... 为了解作用于早期造血的细胞因子受体Flt3和c-kit在脐血CD34^+造血干/祖细胞中的表达及功能,从蛋白和基因水平对其进行了研究。采用常规双色直接免疫荧光标记法,使用流式细胞术测定新鲜分离的和体外不同培养时间的脐血CD34^+造血干/祖细胞中Flt3和c-kit蛋白水平的表达,用RT-PCR法测定Flt3和c-kit的mRNA水平表达,并在体外对受体功能进行了探讨。研究结果显示,新鲜脐血CD34^+细胞中(68.8±15.4)%为Flt3^+,(50.6±12.7)%为c-kit^+,随着体外培养时间的延长,二者表达逐渐下降。结论:脐血CD34^+造血干/祖细胞在体外液体培养条件下Flt3和c-kit阳性表达可维持2-3周,其配体FL和SCF在培养的第1周内对细胞扩增效果最显著。 展开更多
关键词 脐血 cd34^+细胞 造血干/祖细胞 FLT3 C-KIT 细胞分子 受体-配体网络系统 直接免疫荧光标记法 流式细胞术
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脐血CD34^+细胞及红系祖细胞扩增的实验研究 被引量:5
3
作者 张洁霞 毛平 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期429-433,共5页
脐血是造血祖细胞的丰富来源之一,选择合适的培养条件,体外诱导其定向扩增为红系祖细胞,输入体内产生成熟红细胞。本实验旨在探讨脐血单个核细胞(MNC)体外红系定向扩增的理想因子组合(Flt3配基FL联合TPO、SCF、EPO及FL、SCF、TPO)对CD34... 脐血是造血祖细胞的丰富来源之一,选择合适的培养条件,体外诱导其定向扩增为红系祖细胞,输入体内产生成熟红细胞。本实验旨在探讨脐血单个核细胞(MNC)体外红系定向扩增的理想因子组合(Flt3配基FL联合TPO、SCF、EPO及FL、SCF、TPO)对CD34+细胞扩增的影响。将单个核细胞接种至stemspan无血清培养液中,共分3组:A组为对照组,B组为TPO+SCF+FL+EPO+IGF1组,C组为TPO+SCF+FL组,C组在第6天及以后换液加入EPO和IGF1。于培养0、6、10、14天进行细胞计数,细胞集落测定,流式细胞术测定细胞的CD34、CD34CD71、CD71GPA细胞的比例。结果表明:经10天培养后,B组总细胞数扩增6.89倍,而C组3.06倍;B组CD34+细胞增加4.83,而C组2.47倍;B组集落形成细胞数增加4.3倍,而C组增加2.5倍;B组红系祖细胞BFUE和CFUE数增加5.4倍,而C组3.1倍;B组CD34+CD71+细胞数增加8.72倍,而C组3.37倍;B组CD71+GPA+细胞数增加53.4倍,而C组30.29倍。结论:脐血MNC在无血清培养液中加入FL+SCF+TPO实现了CD34+细胞及集落形成细胞的扩增。脐血MNC在无血清培养液中加入FL+SCF+TPO+EPO+IGF1短期液体培养获得红系祖细胞的扩增,在第0天比6天加入EPO获得更多红祖细胞(P<0.05)。由于TPO+SCF+FL+EPO+IGF1组的集落形成细胞数、CFUE和BFUE数于第10天最多。 展开更多
关键词 脐血 单个核细胞 红系祖细胞 无血清培养 cd34^+细胞
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2型重组腺相关病毒对人脐血CD34^+造血干/祖细胞的转导效率研究 被引量:3
4
作者 陈焱 陈方平 +3 位作者 彭建强 吴小兵 吴新华 傅敢 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第6期576-578,共3页
为探讨 2型重组腺相关病毒 (rAAV 2 )载体能否有效地转导脐血CD34+造血干 /祖细胞 ,采用rAAV 2 /GFP感染经免疫磁珠法分离的脐血CD34+造血干 /祖细胞 ,在荧光显微镜下观察GFP的表达。结果显示 ,转导 19小时后感染复数 (MOI)为 2× 1... 为探讨 2型重组腺相关病毒 (rAAV 2 )载体能否有效地转导脐血CD34+造血干 /祖细胞 ,采用rAAV 2 /GFP感染经免疫磁珠法分离的脐血CD34+造血干 /祖细胞 ,在荧光显微镜下观察GFP的表达。结果显示 ,转导 19小时后感染复数 (MOI)为 2× 10 5时 ,CD34+细胞GFP基因的表达率为 4 3%。结论 :rAAV 2能有效地转导脐血CD34+造血干 /祖细胞。 展开更多
关键词 2型重组腺相关病毒 脐血 造血干细胞 祖细胞 cd34^+细胞 AAV-2
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体外培养脐血单个核细胞与CD34^+富集细胞 被引量:2
5
作者 王斌 康自珍 +1 位作者 迟占有 谭文松 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期343-347,共5页
对比MNC和CD34 +富集细胞在SCF +IL 3+IL 6 +FL +Tpo细胞因子组合下的体外扩增特性 ,发现 :CD34 +富集细胞具有很高的扩增潜力 ,在本实验条件下其总细胞持续扩增了 8周 ,扩增倍数达 312 70 9± 86 40 5倍 ;而MNC在培养至第 4周扩... 对比MNC和CD34 +富集细胞在SCF +IL 3+IL 6 +FL +Tpo细胞因子组合下的体外扩增特性 ,发现 :CD34 +富集细胞具有很高的扩增潜力 ,在本实验条件下其总细胞持续扩增了 8周 ,扩增倍数达 312 70 9± 86 40 5倍 ;而MNC在培养至第 4周扩增就已呈现下降趋势 ,最大仅扩增了 5 3 3± 6 2倍。对比集落和CD34 +细胞的扩增发现 ,MNC的集落密度和CD34 +细胞含量由第 0天至第 7天有一个上升的过程 ,而CD34 +富集细胞在培养过程中 ,集落密度和CD34 +细胞含量却始终呈下降趋势。在体外培养过程中 ,CD34 +富集细胞的CFU GM和CD34 +细胞最大分别扩增了 185 7± 14 1和 191 7± 188 8倍 ,明显高于MNC的 12 4± 3 2和 5 0 6± 33 2倍 ;而CD34 +富集细胞和MNC的BFU E则只实现了少量扩增 ,分别为 7 2± 5 2和 10 1± 3 4倍。结果显示 ,从CD34 +富集细胞出发扩增造血干 祖细胞 ,可以得到更多的CD34 +细胞和CFU 展开更多
关键词 体外培养 脐血单个核细胞 cd34^+富集细胞
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脐血CD34^+细胞体外短期培养扩增研究 被引量:2
6
作者 苏力 田丁 +2 位作者 万岁桂 刘聪艳 徐娟 《首都医科大学学报》 CAS 2002年第3期218-221,共4页
为寻找更有效的体外扩增脐血CD34 + 细胞的造血细胞因子组合 ,采集健康产妇脐带血 ,用免疫磁珠法分选CD34 + 细胞。采用SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种具有早期作用的细胞因子的不同组合进行脐血CD34 + 细胞短期无血清液体培养 ,观察培养前... 为寻找更有效的体外扩增脐血CD34 + 细胞的造血细胞因子组合 ,采集健康产妇脐带血 ,用免疫磁珠法分选CD34 + 细胞。采用SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种具有早期作用的细胞因子的不同组合进行脐血CD34 + 细胞短期无血清液体培养 ,观察培养前后有核细胞、CD34 + 细胞、CD34 + /CD38- 细胞、CFU GEMM、CFU GM和BFU E数量的变化。结果在 3种不同的细胞因子组合中 ,同时应用SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种细胞因子培养 7d的扩增效果最好。突出的发现是在这种条件下CD34 + /CD38- 细胞亚群达到平均 1 97.9倍的扩增效果。提示 :SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种细胞因子是脐血CD34 + 展开更多
关键词 脐血cd34^+细胞 造血生长因子 cd34^+细胞体外扩增 cd34^+/CD38^+细胞亚群
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GM—CSF和IL—3对脐带血CD34+细胞植入骨髓基质的促进作用
7
作者 裴雪涛 吴祖泽 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期485-490,共6页
利用抗CD34单克隆抗体吸附磁性微球的方法分离纯化脐带血CD34+细胞,将其种入照射后的成年骨髓基质。比较rhGM-CSF、IL-3及两者的联合对植入效率的促进作用。结果表明:经2h铺展贴壁后,对照组只有36%的CD... 利用抗CD34单克隆抗体吸附磁性微球的方法分离纯化脐带血CD34+细胞,将其种入照射后的成年骨髓基质。比较rhGM-CSF、IL-3及两者的联合对植入效率的促进作用。结果表明:经2h铺展贴壁后,对照组只有36%的CD34+细胞植入基质,而生长因子预处理组则有68—89.6%的CD34+细胞植入基质。在长期液体培养体系中则显示了植入CD34+细胞多的处理组造血重建快速而持久。表明GM-CSF和IL-3预处理将明显提高脐带血移植效率。 展开更多
关键词 脐带血 造血祖细胞移植 GM-CSF 白细胞介素
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脐血单个核细胞和CD34^+细胞体外扩增造血干/祖细胞
8
作者 王斌 康自珍 +1 位作者 迟占有 谭文松 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期592-596,共5页
考察了脐血单个核细胞 ( MNC)和 CD3 4 +富集细胞在 SCF+IL- 3 +IL- 6 +FL+Tpo细胞因子组合下的体外扩增特性。实验发现 :CD3 4 +富集细胞具有很高的扩增潜力 ,通过 3周培养总细胞扩增了 ( 883 .2± 3 2 2 .4)倍 ,而 MNC仅扩增了 ( ... 考察了脐血单个核细胞 ( MNC)和 CD3 4 +富集细胞在 SCF+IL- 3 +IL- 6 +FL+Tpo细胞因子组合下的体外扩增特性。实验发现 :CD3 4 +富集细胞具有很高的扩增潜力 ,通过 3周培养总细胞扩增了 ( 883 .2± 3 2 2 .4)倍 ,而 MNC仅扩增了 ( 5 3 .3± 6 .2 )倍。对比细胞集落生成和 CD3 4 +细胞的扩增发现 ,MNC的集落密度由最初的 ( 2 70 .9± 5 4 .9) CFCs/ 1 0 5cells上升至第 7天的( 1 496 .3± 41 7.7) CFCs/ 1 0 5cells,CD3 4 +细胞百分比则由最初的 ( 0 .99± 0 .1 8) %上升至第 7天的( 4.4± 1 .9) % ,而 CD3 4 +富集细胞在培养过程中 ,虽然集落总数和 CD3 4 +细胞总数始终呈上升趋势 ,但是其集落密度和 CD3 4 + 细胞百分比则始终呈下降趋势。在两种起始细胞培养中 ,CFU- GM(粒细胞 -巨噬细胞集落形成单位 )在集落中的含量逐渐增加 ,BFU- E(爆式红细胞集落形成单位 )含量则逐渐降低。在 3周的短期培养中 ,MNC可以得到更多的集落形成细胞 ( CFC)和 CD3 4 展开更多
关键词 造血干/祖细胞 脐血 MNC cd34^+细胞 体外扩增
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脐血CD34^+细胞巨核系定向诱导分化的研究
9
作者 应逸 毛平 +2 位作者 许艳丽 王汉平 王顺清 《广州医学院学报》 2002年第3期6-8,共3页
目的 :研究TPO与SCF、IL - 11协同在体外促进入脐血CD34+ 细胞向巨核系增殖分化的效应。方法 :利用流式细胞仪分离纯化脐血CD34+ 细胞 ,在含血清液体培养体系中、细胞因子诱导下培养 14d。采用流式细胞术测定不同时间点培养体系中CD4 1+... 目的 :研究TPO与SCF、IL - 11协同在体外促进入脐血CD34+ 细胞向巨核系增殖分化的效应。方法 :利用流式细胞仪分离纯化脐血CD34+ 细胞 ,在含血清液体培养体系中、细胞因子诱导下培养 14d。采用流式细胞术测定不同时间点培养体系中CD4 1+ 细胞的比例 ;同时采用甲基纤维素半固体集落培养测定CFU -MK的数量。结果 :经 14d培养 ,TPO +SCF +IL - 11组可使CD4 1+ 细胞和CFU -MK数量分别扩增 4 0 .83± 12 .4 1倍、7.86±2 .6 3倍 ,明显高于TPO组的 2 8.6 9± 8.2 7倍、4 .4 8± 1.2 5倍。结论 :在体外SCF和IL - 11可以协同增强TPO诱导脐血CD34+ 展开更多
关键词 脐血 造血祖细胞 抗原 cd34 细胞因子 巨核细胞 诱导分化
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人骨髓间充质干细胞与脐血CD34^+细胞体外扩增 被引量:1
10
作者 李明辉 田丁 +4 位作者 刘聪燕 孙雪静 万岁桂 苏力 徐娟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期235-239,共5页
为了研究骨髓间充质干细胞(MSC)及细胞因子对脐血CD34+造血祖细胞体外扩增的作用,及其扩增作用 对细胞黏附分子的影响,用免疫磁珠富集脐血CD34+细胞,然后接种到含有或不含有MSC和细胞因子的24孔培 养板,体外培养1周,观察不同指标并进行... 为了研究骨髓间充质干细胞(MSC)及细胞因子对脐血CD34+造血祖细胞体外扩增的作用,及其扩增作用 对细胞黏附分子的影响,用免疫磁珠富集脐血CD34+细胞,然后接种到含有或不含有MSC和细胞因子的24孔培 养板,体外培养1周,观察不同指标并进行组间比较。结果表明:①SDF-1α+SCF+TPO+FL因子组合与SCF+ TPO+FL因子组合对脐血CD34+细胞的扩增作用无显著性差异(无论有无MSC细胞层存在)(P>0.05);②MSC 与上述细胞因子共存的培养体系优于相应的单纯细胞因子培养体系(P<0.05);③扩增前与扩增后脐血造血祖 细胞黏附分子CD44的表达没有明显变化。结论:趋化因子SDF-1α对SCF+TPO+FL因子组合的扩增作用无显 著影响;MSC增加细胞因子的脐血细胞体外扩增的作用;体外扩增不影响跻血细胞黏附分子CD44的表达。 展开更多
关键词 脐血cd34^+细胞 间充质干细胞 体外扩增 粘附分子
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脐血和骨髓来源的CD34^+细胞体外扩增巨核祖细胞差异的研究
11
作者 何祎 孟恒星 +7 位作者 张宇光 侯士芳 王华 黄勇 李茜 韩俊领 邱录贵 韩忠朝 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期1398-1402,共5页
本研究探讨脐血(CB)和骨髓(BM)来源的CD34+细胞体外扩增巨核祖细胞的差异。采用Ficoll-Hypaque分离法分离人CB及BM单个核细胞,免疫磁珠法制备CD34+细胞,在含血小板生成素(TPO)、TPO+白介素11(IL-11)或TPO+IL11+肝素的无血清液体培养体... 本研究探讨脐血(CB)和骨髓(BM)来源的CD34+细胞体外扩增巨核祖细胞的差异。采用Ficoll-Hypaque分离法分离人CB及BM单个核细胞,免疫磁珠法制备CD34+细胞,在含血小板生成素(TPO)、TPO+白介素11(IL-11)或TPO+IL11+肝素的无血清液体培养体系中培养14天。流式细胞术检测扩增产物(CD34+、CD41a+及CD34+CD41a+细胞)免疫表型、巨核细胞凋亡率及DNA含量,并以集落形成单位测定法进行粒巨-噬细胞集落形成单位(CFU-GM)、红系爆式集落形成单位(BFU-E)及巨核细胞集落形成单位(CFU-Mk)计数。结果表明:14天培养中,CB来源细胞在总细胞数、CD41a+及CD34+CD41a+细胞扩增倍数上均高于BM(p均<0.05)。0天CB及BM来源CD34+细胞在CFU-GM、BFU-E及总的CFU-Mk的形成能力上无显著性差异(p均>0.05),但CB来源CD34+细胞形成的CFU-Mk以大集落为主,其数量高于BM(p<0.05);在培养7、10和14天,CB及BM来源细胞CFU-GM扩增倍数无显著性差异(p均>0.05),但CB来源细胞的BFU-E及总的CFU-Mk扩增倍数均高于BM(p均<0.05)。14天培养中CB和BM来源巨核细胞的凋亡率无显著性差异(p均>0.05)。DNA含量检测发现,14天培养中CB来源巨核细胞始终以2N细胞为主(比例>90%),而BM来源巨核细胞随着培养时间延长,4N、8N及以上倍体巨核细胞比例逐渐增加。结论:CB来源CD34+细胞体外扩增巨核祖细胞能力高于BM,它可能是巨核祖细胞体外扩增较好的来源。 展开更多
关键词 脐血 骨髓 cd34^+细胞 巨核祖细胞
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Puma表达下调对人脐血CD34+造血细胞抗放射作用的初步研究 被引量:1
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作者 赵蕾 张鸿雁 +4 位作者 庞雅坤 顾海慧 许静 袁卫平 程涛 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期412-420,共9页
Puma属于BCL-2家族中BH3-only亚家族,动物和细胞研究发现其通过p53依赖和非依赖途径诱导细胞凋亡,并具有抗放射保护不增加肿瘤发生率的作用。本研究检测Puma基因敲降后对人脐血CD34+造血干祖细胞生物学功能的影响。应用RT-PCR、Western ... Puma属于BCL-2家族中BH3-only亚家族,动物和细胞研究发现其通过p53依赖和非依赖途径诱导细胞凋亡,并具有抗放射保护不增加肿瘤发生率的作用。本研究检测Puma基因敲降后对人脐血CD34+造血干祖细胞生物学功能的影响。应用RT-PCR、Western Blot检测Puma基因在辐射刺激条件下的表达,采用慢病毒感染人脐血CD34+细胞分选GFP+细胞,Annexin V-PE/7-AAD双染流式细胞术检测细胞凋亡,Ki67染色检测细胞周期,CCK-8、Brdu标记法检测细胞增殖能力,并进行集落形成实验(colony formig cell assay,CFC)。结果表明:Puma基因表达量随着射线强度的增加而增高,Puma基因表达下调抑制造血祖细胞体外集落形成能力和体外增殖能力。在辐射刺激条件下,抑制Puma基因表达可以减少人脐血CD34+细胞凋亡,维持细胞周期于G0期。结论:人脐血CD34+造血干细胞中Puma基因敲降具有一定的抗辐射作用,维持细胞于静息状态。 展开更多
关键词 PUMA基因 造血干 祖细胞 脐血cd34+细胞 慢病毒载体
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凋亡在脐血造血干/祖细胞冷冻损伤中的作用及其机制研究 被引量:7
13
作者 肖娟 邹萍 +3 位作者 黄士昂 胡中波 刘凌波 游泳 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期90-94,共5页
为探讨脐血造血干 /祖细胞冷冻损伤中凋亡的作用及其机制 ,应用流式细胞术检测脐血CD34+ 细胞冻存前后细胞凋亡率、线粒体膜势能和Fas抗原 ,用免疫组织化学法检测Bcl 2蛋白表达 ,用Westernblot和caspase 3蛋白活性分析检测caspase 3的表... 为探讨脐血造血干 /祖细胞冷冻损伤中凋亡的作用及其机制 ,应用流式细胞术检测脐血CD34+ 细胞冻存前后细胞凋亡率、线粒体膜势能和Fas抗原 ,用免疫组织化学法检测Bcl 2蛋白表达 ,用Westernblot和caspase 3蛋白活性分析检测caspase 3的表达 ,以甲基纤维素半固体培养进行造血祖细胞集落分析。研究结果显示 ,CD34+ 细胞在 - 196℃冻存 2周或 4周后凋亡率增加 ,电泳出现DNA梯形条带 ,CFUs分别下降了 2 5 .2 %和 30 .1%。冷冻过程中细胞内线粒体膜势能下降 ,Bcl 2蛋白表达下调 ,而Fas抗原表达无明显改变。新鲜分离的CD34+ 细胞中caspase 3以分子量为 32kD的非活性酶原形式存在 ,冷冻过程中caspase 3被激活 ,可检测到分子量为 2 0kD的裂解片段 ,cas pase 3蛋白活性分别增加了 1.2倍和 1.5倍。结论 :凋亡在脐血造血干细胞冷冻损伤中起着重要作用 ,其机制可能是通过线粒体介导的caspase依赖性途径执行 ,caspase 3是其中一个重要的效应蛋白酶。 展开更多
关键词 细胞凋亡 脐血 造血干/祖细胞 cd34^+细胞 冷冻保存 Caspase-3
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体外构建人巨核祖细胞/胃癌细胞融合体生成血小板的研究 被引量:3
14
作者 雷慧芬 范娅涵 +4 位作者 孟强 尹智平 陆华 蒋天伦 赵树铭 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期294-298,共5页
目的构建脐血巨核祖细胞/胃癌SGC7901细胞融合体产生功能性血小板。方法免疫磁珠分选人脐带血CD34+细胞,通过RPMI1640培养基体外静态培养,加入定向分化因子TPO、FL、IL-3、IL-6产生巨核祖细胞;复苏胃癌SGC7901细胞;采用聚乙二醇(PEG)化... 目的构建脐血巨核祖细胞/胃癌SGC7901细胞融合体产生功能性血小板。方法免疫磁珠分选人脐带血CD34+细胞,通过RPMI1640培养基体外静态培养,加入定向分化因子TPO、FL、IL-3、IL-6产生巨核祖细胞;复苏胃癌SGC7901细胞;采用聚乙二醇(PEG)化学融合法制备巨核祖细胞/胃癌SGC7901细胞融合体,HAT筛选系统分选融合细胞,继续培养;流式细胞仪检测培养孔上层液中类血小板颗粒表面CD41、CD62p表达,血小板聚集试验、粘附试验检测血小板功能,瑞氏染色观察颗粒形态。结果免疫磁珠分选的CD34+细胞培养7 d可增殖80倍,与胃癌SGC7901细胞株经PEG化学融合法融合成巨核祖细胞/胃癌细胞,融合率为(36.91±1.08)%;融合细胞培养10 d可增殖4倍,产生(6.1±1.21)×106/ml的类血小板颗粒;瑞氏染色后观察,其形态与正常血小板相似。类血小板颗粒表达血小板特异性标志CD41及血小板活化后标志CD62p,与正常血小板比较,CD62p在类血小板颗粒中表达略降低:正常血小板(74.11±1.71)%、类血小板颗粒(71.04±1.64)%;CD41表达明显降低:正常血小板(88.83±3.26)%、类血小板颗粒(72.51±2.79)%(t=6.59,P<0.05);聚集试验表明具有正常血小板相似的聚集功能;血小板粘附试验:正常血小板(40.43±1.63%)、类血小板颗粒(35.53±4.06%)。结论通过PEG细胞化学融合法构建的脐带血巨核祖细胞/胃癌SGC7901细胞融合体能产生功能性血小板。 展开更多
关键词 巨核祖细胞 脐带血 cd34+细胞 胃癌SGC7901细胞 融合体 血小板 聚乙二醇化学融合法 类血小板颗粒
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差异显示法分析不同生长环境中造血干/祖细胞基因表达的研究 被引量:1
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作者 李群良 刘启威 +1 位作者 蔡海波 谭文松 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期11-14,共4页
目的对比分析不同生长环境中的脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达变化。方法采用静态和动态培养系统培养脐血单个核细胞,1周后收获CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用差异显示法对比分析在不同生长环境中造血干/祖细胞基因表达的差异。结果... 目的对比分析不同生长环境中的脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达变化。方法采用静态和动态培养系统培养脐血单个核细胞,1周后收获CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用差异显示法对比分析在不同生长环境中造血干/祖细胞基因表达的差异。结果在所使用的差异显示条件下,得到30个差异表达基因片段,其中一个差异表达片段为RAN基因,该基因属于RAS癌基因家族,可能与造血细胞增殖有关。结论不同生长环境影响CD34+造血干/祖细胞的基因表达,这些差异表达的基因可为优化体外培养环境,扩增造血细胞提供分子基础。 展开更多
关键词 脐血 cd34^+造血干/祖细胞 培养环境 差异显示
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微囊化基质细胞对脐带血造血干/祖细胞扩增支持 被引量:1
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作者 刘洋 刘天庆 +3 位作者 范秀波 鲍春雨 马学虎 崔占峰 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期176-182,共7页
将脐带血单个核细胞与包埋有兔骨髓间充质干细胞的海藻酸钙微胶珠在3种不同的培养液中进行了7d的体外静态共培养.每24h进行总有核细胞计数,在0、72和168h进行流式CD34+细胞分析以及甲基纤维素集落检验.实验结果表明:经过7d的静态共培养... 将脐带血单个核细胞与包埋有兔骨髓间充质干细胞的海藻酸钙微胶珠在3种不同的培养液中进行了7d的体外静态共培养.每24h进行总有核细胞计数,在0、72和168h进行流式CD34+细胞分析以及甲基纤维素集落检验.实验结果表明:经过7d的静态共培养,在添加常规剂量造血生长因子的培养液中,总有核细胞扩增了(15±2.85)倍,CD34+细胞扩增了(5.33±0.32)倍,CFU-Cs扩增了(5.6±1.21)倍.微胶囊可以作为一种新的共培养隔离手段,微囊化兔骨髓间充质干细胞在添加适量血清或者造血生长因子组合的条件下对于脐带血造血干/祖细胞在静态下的扩增有明显的促进作用. 展开更多
关键词 脐带血造血干/祖细胞 cd34+细胞扩增 间充质干细胞 海藻酸钙微胶珠
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脐血造血细胞的冷冻保存方法的比较 被引量:2
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作者 李昕 张勇 +1 位作者 陈方平 张国平 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第6期563-566,共4页
目的 :比较程控降温和 - 70℃冰箱直接保存脐血造血细胞对细胞活性的影响及免疫磁珠分离法对细胞生物学活性的影响。方法 :用密度梯度离心法分离出脐血中单个核细胞后 ,采用联合冷冻保护剂经程控降温后存放于液氮和直接存放于 - 70℃冰... 目的 :比较程控降温和 - 70℃冰箱直接保存脐血造血细胞对细胞活性的影响及免疫磁珠分离法对细胞生物学活性的影响。方法 :用密度梯度离心法分离出脐血中单个核细胞后 ,采用联合冷冻保护剂经程控降温后存放于液氮和直接存放于 - 70℃冰箱两种方法冷冻保存一个月 ,从细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率等方面比较这两种冷冻方法的优劣。另外 ,用免疫磁珠分离法正性分选脐带血中CD34+细胞 ,流式细胞仪计数分选前后的CD34+细胞的纯度及回收率 ,并分别进行分选前后的细胞培养。结果 :细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率在冷冻的两组间差异不显著。用免疫磁珠分选后CD34+细胞纯度达 88.3% ,回收率为 4 6 .2 % ,分选后的CD34+细胞比分选后CD34 细胞的细胞活力及集落形成能力明显要高。结论 :两种方法均可对脐血造血细胞进行保存。免疫磁珠分选法能够提供高纯度的造血干细胞 ,其分选过程不会影响细胞的活力及集落形成能力 。 展开更多
关键词 脐血 造血细胞 冷冻保存 磁性细胞分选 细胞生物活性 恶性血液病
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当前造血干细胞研究面临的挑战 被引量:13
18
作者 唐佩弦 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期1-4,共4页
More works documented recently indicated that human CD34 - cells exist and are likely to be the precursors of the CD34 + cells. Anyhow, the CD34 + enriched populations have already been proved to show long-term recons... More works documented recently indicated that human CD34 - cells exist and are likely to be the precursors of the CD34 + cells. Anyhow, the CD34 + enriched populations have already been proved to show long-term reconstitution of hematopoiesis in animals and patients worldwidely. It still remains uncertain whether cells lack of CD34 and Lineage markers are the very best stem cells or maybe the residual embryonic stem cells keeping quiescent in the adult tissues are capable of transfer into hematopoietic stem cells when activated. Since just a negative selection technique is used to collect the CD34 - cells everywhere for the time being, no final conclusion is convincing about the characterization of CD34 - cells till a highly purified cell population of CD34 -/Lin - is available. Clinical analysis shows that the most critical factor predicting the stem cell engraftment is the number of the cells infused. The number of nucleated cells in umbilical cord blood to be infused and required to obtain a successful engraftment is superior to 3.7×10 7/kg. However, large dose of T-cell-depleted and purified CD34 + cells as more than 5×10 6/kg or even a ’megadose’ of CD34 + cells of 10 7/kg is recommended for allotransplant of mobilized peripheral blood to achieve a high rate of successful engraftment. The delayed engraftment and the relapse of malignancy after cord blood transplantation are major problems. However, CBT is still the best choice of stem cell transplant for the baby patients with non-malignancies. At present, the HLA typing for class I antigens is still achieved with serology in most laboratories. As HLA typing is increasingly defined to higher degree of resolution by DNA probes, it is recommended to check with genotyping when there is a ’match’ by the serological phenotyping especially for the unrelated donor/recipient couples. Improvements in DNA-based methods for the detection of numerous HLA alleles have provided the opportunity to investigate the relationship between HLA disparity and transplant complications. About 80% (or even more) of patients in China who might benefit from stem cell transplantation still fail to find suitable donors. It is worthy to adopt the unrelated donors matched or mismatched for those high-risk acute leukemia patients who do not have related matched donors but urgently need transplant. The advanced experience of unrelated mismatched transplant will no doubt be certain to carry weight and be disseminated in China. A great leap forward of the clinical practice and biological study on hematopoietic stem/progenitor cells is expected in the new century to accept the challenge from the world outside China. 展开更多
关键词 造血干细胞 造血祖细胞 cd34细胞 脐带血移植
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乙醛脱氢酶在检测脐带血造血干/祖细胞中的应用 被引量:2
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作者 李莉 赵英新 +4 位作者 孟恒星 刘兰婷 何祎 李茜 韩俊领 《生物医学工程与临床》 CAS 2009年第4期324-327,共4页
目的通过比较乙醛脱氢酶(ALDH)与CD34、CD133及粒单核细胞集落形成单位(CFU-GM)在脐带血中含量的差异,探讨ALDH作为脐带血造血干/祖细胞(HSPC)检测指标的有用性。方法采集新鲜脐带血标本28份,用荧光底物法标记ALDH,流式细胞仪检测脐带... 目的通过比较乙醛脱氢酶(ALDH)与CD34、CD133及粒单核细胞集落形成单位(CFU-GM)在脐带血中含量的差异,探讨ALDH作为脐带血造血干/祖细胞(HSPC)检测指标的有用性。方法采集新鲜脐带血标本28份,用荧光底物法标记ALDH,流式细胞仪检测脐带血中低侧向角高表达ALDH活性(SSCloALDHbr)细胞、CD34+和CD133+含量,并进行CFU-GM的培养。结果脐带血SSCloALDHbr细胞表达率在ALDH反应后直接上机检测组(ALDH组)及在ALDH反应后进一步标记抗体再检测组(ALDH+抗体组)分别为(0.32±0.16)%和(0.30±0.17)%,两组相比差异无统计学意义(P>0.05)。脐带血CD34+表达率在抗体组和ALDH+抗体组分别为(0.40±0.26)%和(0.36±0.19)%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);脐带血CD133+表达率在抗体组和ALDH+抗体组分别为(0.18±0.16)%和(0.17±0.10)%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。脐带血SSCloALDHbr细胞表达率和CD34+表达率、CD133+表达率及CFU-GM产率均呈正相关(r分别为0.87、0.69和0.54,P均<0.01)。结论ALDH反应后进一步标记抗体不影响脐带血SSCloALDHbr细胞的检测结果,ALDH反应亦不影响进一步标记抗体的检测结果;脐带血SSCloALDHbr细胞表达率和CD34+表达率、CD133+表达率及CFU-GM产率均呈正相关;ALDH活性检测可以作为检测脐带血HSPC的一个有用指标。 展开更多
关键词 脐带血 干/祖细胞 SSC^loALDH^br细胞 cd34^+ CD133^+
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脐带血AC133^+细胞体外扩增及生物学特性的研究 被引量:2
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作者 闫凤英 李茜 +3 位作者 韩俊领 李新 邱录贵 韩忠朝 《生物医学工程与临床》 CAS 2004年第3期173-176,共4页
目的研究脐带血穴UCB雪AC133+细胞体外扩增及其生物学特性,动态观察AC133+细胞的免疫表型变化,以了解AC133+抗原与CD34抗原的关系。方法将从新鲜UCB标本中纯化的AC133+细胞接种于无血清无基质的悬浮体系,分别于培养0、7、10、14天检测... 目的研究脐带血穴UCB雪AC133+细胞体外扩增及其生物学特性,动态观察AC133+细胞的免疫表型变化,以了解AC133+抗原与CD34抗原的关系。方法将从新鲜UCB标本中纯化的AC133+细胞接种于无血清无基质的悬浮体系,分别于培养0、7、10、14天检测扩增潜能、免疫表型和集落形成等指标。结果①自早期的AC133+CD34-、AC133+CD34+、CFC-HPP、CFU-GEMM、AC133+及CD34+细胞群至各系定向祖细胞等各阶段造血干/祖细胞穴HSPC雪均得到持续显著的扩增;②AC133+和CD34+细胞的比例随培养时间的延长而迅速降低,AC133+细胞在CD34+细胞中的比例亦明显下降穴从99%降至50%雪,但同一时点AC133/CD34亚群比例均呈现出AC133+CD34-<AC133+CD34+<AC133-CD34+<AC133-CD34-的趋势。结论我们建立的短期培养体系能够有效支持UCB各阶段HSPC的有效扩增;AC133是较CD34更为原始的HSPC抗原标记。 展开更多
关键词 脐带血 体外扩增 免疫表型 生物学特性 造血干细胞
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