脐血血浆对K562细胞增殖抑制作用研究

目的 研究脐血血浆 (CBP)对人红白血病细胞株K5 6 2增殖影响及可能机制。方法 台盼蓝拒染法绘制生长曲线 ;MTT法检测CBP对K5 6 2细胞的抑制作用 ;流式细胞术分析细胞周期变化 ;免疫细胞化学方法检测增殖相关核抗原 (PCNA ,Ki 6 7)表达。结果 细胞生长曲线可见CBP作用 2 4h即观察到抑制作用 ,随时间增加 ,抑制作用更加明显 ,有非常显著性差异 (P <0 .0 1 )。MTT法结果与生长曲线结果相符。CBP作用 3d后 ,S期细胞数减少 ,G0 /G1 期细胞增多 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,并出现G0 /G1 期凋亡细胞。CBP作用后 ,K5 6 2细胞增殖相关核抗原PCNA、Ki 6 7表达阳性程度降低 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 CBP对K5 6 2细胞增殖有明显抑制作用 ,与浓度、时间正相关 ;其机制可能与诱导凋亡、下调PCNA、Ki 6 7表达 。

脐血血浆支持造血祖细胞体外集落培养的研究

10份去血小板的脐血血浆混合后用于研究其对造血细胞培养的支持作用。发现按10％的终浓度加入粒-巨噬细胞集落(CFU-GM)琼脂培养体系时,集落产率稍高于用GM-CSF作刺激因子组。当按30％终浓度加入含EPO的甲基纤维素培养体系时,可支持CFU-GM、爆式红系集落(BFU-E)、巨核细胞集落(CFU-Meg),粗-巨噬细胞与红系细胞混合的集落(CFU-GEM),粒-巨噬细胞与红细胞、巨核细胞混合的集落(CFU-GEMM)生长,而混合成人血浆则无此作用。植物血凝素刺激的单个核细胞条件液(PHA-MNCCM)对大部分集落有促进作用,但均无统计学意义。国产IL-3可提高CFU-GEM产率,但似乎不利于含巨核细胞的集落生长。研究结果提示,脐血血浆含有丰富的造血刺激活性,利用脐血血浆进行造血祖细胞体外集落培养可能为简化并推广体外造血细胞培养提供新的途径。

脐血输注合并血浆置换治疗慢性重型肝炎的疗效初探

目的 :探讨脐血输注 (UCBT)合并血浆置换 (PE)治疗重型病毒性肝炎的效果。方法 :将 117例慢性重肝病人分为 4组 ,分别应用成人鲜血或冰冻新鲜血浆 (对照组 ) ,UCBT ,PE和UCBT +PE治疗 ,观察病人治疗前后部分肝功能指标及免疫功能指标的变化。结果 :各治疗组病人降低血胆红素、升高白蛋白、凝血酶原活动度、活性T淋巴细胞、CD4细胞、白细胞介素 2及膜白细胞介素 2受体的效果均优于对照组 ,其中UCBT +PE组的效果又优于其它各组。结论 :UCBT合并PE治疗能提高重型肝炎的治疗效果。

母血、脐血中脂联素水平与胎儿体重之间关系的研究

目的：研究母血和脐血中脂联素水平与胎儿体重之间的关系. 方法：随机选取102例无母儿合并症、并发症的足月单活胎病例. 按新生儿出生体重分为3 组：〈3000 g组、3000~3999 g组和≥4000 g组. 分析比较各组的临床指标及母血、脐血脂联素水平. 结果：脐血中脂联素浓度比母血高2 . 90倍,脐血和母血脂联素浓度无相关性（ r=0. 132,P=0. 199）. 3组的母血脂联素浓度比较,差异无统计学意义（P=0. 074）;脐血脂联素浓度比较,差异有统计学意义（P=0. 011）;母血脂联素浓度与新生儿出生体重无相关性（r=0. 015,P=0. 883）;脐血浓度与新生儿出生体重有关（r=0. 263,P=0. 008）. 不同性别新生儿病例的母血脂联素水平比较,差异无统计学意义（P〉0. 05）. 母血脂联素浓度与孕产妇孕周呈正相关（r=0. 201,P=0. 045）,脐血脂联素浓度与孕妇孕前体重指数呈正相关（r=0. 227,P=0. 026）,女性围产儿脐血脂联素浓度高于男性（P=0. 020）. 结论：母血和脐血脂联素浓度无明显相关性;脐血脂联素可能参与了胎儿体重的调节.

脐血浆造血活性的研究

目的 研究脐血浆刺激造血细胞体外生长的作用及脐血浆造血因子的水平。方法 以ELISA法检测 33例脐血浆GM -CSF ,IL - 3和IL - 6水平 ,RIA法检测EPO水平 ,液体培养和甲基纤维素半固体培养方法检测脐血浆对外周造血干细胞 (PBSC)造血刺激活性 ,并分析二者的相关性。结果 ①脐血浆造血因子中位数和全距水平分别为 :GM-CSF为 0ng/L和 0～44ng/L ,IL - 3为 3ng/L和 0～ 35ng/L,IL - 6为 3ng/L和 0～ 2 1ng/L ,EPO为 1 6U/L和 5～ 72U/L ;②脐血浆刺激下PBSC半固体培养造血祖细胞集落数为 (1 3± 1 1 ) / 1× 1 0 5细胞 ,胎牛血清刺激下的集落数为 0 ,二者差异有显著性 (P <0 .0 1 )。脐血浆或胎牛血清刺激下PBSC液体培养有核细胞数分别为 (1 .0 8± 0 .2 0 )× 1 0 6 /ml与 (0 .72±0 .0 5)×1 0 6 /ml,二者差异有显著性 (P <0 .0 5) ;③脐血浆刺激下PBSC体外培养集落数和有核细胞数均与脐血浆IL -3水平成正相关 ,相关系数分别为 0 .660和 0 .397,与IL - 6和EPO则不相关。结论 脐血浆含有多种造血因子 ,在体外具有刺激造血细胞生长的作用。脐血浆刺激造血活性与其所含有的造血因子有关 ,造血活性的高低与IL - 3浓度成正相关。IL - 6和EPO所起的作用则相对较小。

脐血移植临床应用研究

脐血移植在临床上的应用,主要依赖于对脐血造血细胞的基础研究工作,包括脐血的生物学活性、采集、保存和输注等。近年来,单份和多份脐血移植、体外扩增后脐血移植、非清髓脐血移植、脐血血浆输注等多方面的应用研究已经取得了长足的进步。但目前仍有许多问题尚待解决。随着脐血移植新手段的涌现和技术的不断完善、脐血库规模的扩大、相关体系的逐步规范化以及现存问题的最终解决,脐血作为造血干细胞移植的重要来源,将展示广阔的临床应用前景。

酶联免疫吸附法检测血清舒芬太尼血药浓度的应用价值

目的探讨应用酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测人血清舒芬太尼浓度及其在产妇镇痛分娩、婴儿脐带血血药浓度监测中的应用价值。方法应用ELISA两步法定量检测舒芬太尼浓度,拟合标准曲线,测定检测限,并检测自控椎管内镇痛分娩产妇和婴儿脐带血血清样本各48份,分别检测用药1、3、5h和脐带血的血药浓度。结果此方法绘制的舒芬太尼标准曲线为:Y=420.375 X+32.043,1h血清舒芬太尼浓度为(0.087±0.013)μg/mL,3h舒芬太尼浓度为(0.026±0.011)μg/mL,5h舒芬太尼浓度为(0.011±0.050)μg/mL,脐带血血药浓度为(0.040±0.029)μg/mL。结论 ELISA方法测定人血舒芬太尼简便、快捷,血药浓度1h达峰值,分娩镇痛效果理想,可用于临床药动学研究。婴儿脐带血药物浓度极低,未见药物不良反应。

混合脐血血浆用于CD3AK细胞培养的研究

目的 :观察比较混合脐血血浆和成人 AB血清在 CD3AK细胞培养中的作用效果。方法 :分别用混合脐血血浆和成人 AB血清培养 CD3AK细胞 ,检测两组细胞的增殖特性、杀伤活性及免疫表型。结果 :混合脐血血浆组的增殖倍数略低于血清组 ,对 K5 6 2、HL - 6 0的杀伤活性则稍高于血清组 ,但差异均无显著性意义 (均为 P >0 .0 5 ) ;两组的免疫表型都以 CD3+、CD8+为主 ,亦无显著性差异 ( P >0 .0 5 )。结论 :混合脐血血浆在 CD3AK等免疫效应细胞的培养中可能和成人

脐血来源富血小板血浆对脐血间充质干细胞增殖的影响

目的：初步探讨脐血来源富血小板血浆促进脐血间充质干细胞增殖及增殖最佳浓度。方法：收集足月健康剖宫产新生儿脐带血,采用组织块培养法进行脐血间充质干细胞的分离培养;采用二次离心法提取脐血富血小板血浆。用ELISA方法检测富血小板血浆中转化生长因子（transforming growth factor,TGF）-β1。富血小板血浆联合10%胎牛血清培养脐血间充质干细胞,根据富血小板血浆中的TGF-β1浓度将实验分为6组：2 000 pg/ml组、1 000pg/ml组、750 pg/ml组、500 pg/ml组、250 pg/ml组、10%胎牛血清组。脐血间充质干细胞接种在96孔板,连续培养7d,分别在1、3、5、7 d用CCK8试剂盒测定不同浓度富血小板血浆对脐血间充质干细胞的增殖影响,统计分析,选出最佳浓度。结果：不同浓度富血小板血浆联合10%胎牛血清培养脐血间充质干细胞呈现不同的增殖速度,500~1 000pg/ml组明显优于其他浓度组,第5天开始差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：富血小板血浆可提高脐血间充质干细胞的增殖活性,且呈剂量依赖性。

脐血血浆化疗增敏作用的实验研究

目的:研究脐血血浆(CBP)对急性髓细胞性白血病(AML)细胞的体外化疗增敏作用。方法:以AML细胞株HL鄄60细胞为实验对象,培养体系中分别加入CBP或人重组粒鄄巨噬细胞集落刺激因子(rhGM鄄CSF)作为实验组或阳性对照组,不加CBP和rhGM鄄CSF的HL鄄60细胞作为阴性对照组。培养48h后进行细胞周期动力学检测;各组细胞再加入阿糖胞苷(Ara鄄C)培养,24h后进行细胞增殖测定。结果:经过48h孵育,CBP组S期细胞比例明显增高,再与Ara鄄C作用,细胞的生长较阴性对照组明显受抑。实验组和阳性对照组之间无明显差异。结论:CBP与rhGM鄄CSF相似,可通过促进HL鄄60细胞进入S期增强对Ara鄄C的敏感性。

新鲜脐血及其不同温度保存下凝血因子活性的动态测定

目的了解输注脐血凝血因子的活性。方法采集 １０份新鲜脐血，对保存前及其在４℃、－２０℃保存２４ｈ、４８ｈ后各凝血因子活性进行了动态检测。结果①脐血处于相对低凝状态；②脐血在４℃、－２０℃保存２４ｈ、４８ｈ后其纤维蛋白原、因子Ⅴ、Ⅷ都呈现不同程度的衰减，且４℃和－２０℃保存效果无显著差异，而其余因子则储存稳定。结论新鲜脐血中各凝血因子含量较低，且随保存时间的延长活性下降。

脐血浆对正常骨髓造血刺激活性的研究

为探讨脐血浆中造血活性物质的作用,用半固体培养法对混合脐血浆、重组人造血生长因子及正常成人混合血清在体外对正常骨髓造血祖细胞集落形成的情况进行了比较.结果显示,成人混合血清对粒单祖细胞及红系祖细胞的集落形成无明显的刺激活性,而混合脐血浆对粒单祖细胞及红系祖细胞的集落形成具有较高水平的刺激活性,其作用与小牛血清加人重组GM-CSF相当(P>005,差异无显著性).

脐血血浆、rhGM-CSF增强急性髓性白血病细胞对Ara-C敏感性的研究

研究了脐血血浆（ＣＢＰ）、基因重组人粒－单细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）对２０例急性髓性白血病（ＡＭＬ）细胞体外对阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）敏感性的影响。采用ＭＴＴ法测定Ａｒａ－Ｃ的细胞毒作用，发现，ＣＢＰ及ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可显著增强Ａｒａ－Ｃ对耐药ＡＭＬ细胞的毒性作用，与对照组相比，Ｐ＜０．０５；另采用台盼蓝拒染法测定细胞的存活能力，发现：ＣＢＰ虽然可增加耐药ＡＭＬ细胞的存活能力，但当Ａｒａ－Ｃ与ＣＢＰ或ｒｈＧＭ－ＣＳＦ合用时，ＡＭＬ活细胞总数反而下降，与对照组相比，Ｐ＜０．０５。由此认为：ＣＢＰ及ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可通过促进耐药ＡＭＬ细胞进入增殖周期，从而增强耐药ＡＭＬ细胞对Ａｒａ－Ｃ的敏感性，预示着ＣＢＰ、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ与Ａｒａ－Ｃ联合应用治疗耐药ＡＭＬ的潜在价值。

103例早发型重度子痫前期患者血压、血浆D-二聚体、脐血流改变对母婴结局的影响

目的探讨早发型重度子痫前期患者保守治疗过程中血压、血浆D-二聚体和脐血流的改变及其对母婴结局的影响。方法对我院产科收治的早发型重度子痫前期患者103例,其中并发胎盘早剥24例(早剥组),并发死胎20例(死胎组),无其他并发症59例(对照组),对各组的血压、D-二聚体及脐血流的变化对母婴结局的影响作回顾性分析。结果早剥组血浆D-二聚体、收缩压高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。死胎组(删除胎盘早剥者)脐动脉S/D值高于对照组,血压低于对照组(P值均<0.01)。结论早发型重度子痫前期患者保守治疗过程中血浆D-二聚体增高、脐动脉S/D值出现持续增高或断流、不能控制的高血压或血压下降过低,应结合临床表现及其他辅助检查结果 ,及时终止妊娠或调整治疗方案。

早产儿脐血GM-CSF与生后24h内外周血细胞的分析

目的 测定早产儿、足月儿脐血GM -CSF的浓度及外周血细胞计数 ,探讨脐血GM -CSF的浓度与生后 2 4h内外周血细胞的关系。方法 5 4例早产儿、13例足月儿出生时采脐血 ,用ELISA法测定GM -CSF的浓度 ,生后 2 4h内检测外周血细胞 ,应用SPSS统计软件包进行分析。结果 早产儿组及足月儿组脐血GM -CSF的浓度与外周血细胞计数无明显差异 ;孕妇的高危因素和早产儿并发症不影响脐血GM -CSF的浓度 ;早产儿脐血GM -CSF的浓度与白细胞计数呈正相关 ;与中性粒细胞淋巴细胞、中值细胞、红细胞和血小板均无相关性。结论 早产儿与足月儿外周血白细胞数量和脐血GM -CSF的浓度无明显差异 ;早产儿脐血GM -CSF的浓度与生后2

混合脐血血浆对植物血凝集素诱导的脐血源性T淋巴细胞增殖、分化的影响

目的:探讨混合脐血血浆(CBP)在植物血凝集素(PHA)诱导脐血源性T淋巴细胞中的作用。方法:收集脐血血浆和脐血单个核细胞;将脐血单个核细胞分为CBP+PHA和PHA两组,检测两组细胞增殖率及免疫表型。结果:CBP+PHA组细胞增殖指数低于PHA组,但无统计学意义;两组细胞表型都以CD3+、CD4+为主,两组差异无统计学意义。结论:混合脐血血浆对脐血源性T淋巴细胞增殖、分化影响不明显,可能与RPMI1640培养体系具有相似的效果。

脐带血血浆分离培养脐带间充质干细胞及体外扩增人脐血CD34^+细胞的研究

目的:探讨以脐带血血浆替代胎牛血清体外分离培养脐带间充质干细胞(UCMSC)的可行性,并观察其作为滋养层细胞对脐血CD34+细胞体外扩增的支持作用。方法:收集符合广州脐血库供者合格筛选标准的脐带血,在脐带血干细胞制备过程中去除的血浆,经病原学及微生物检测合格,多份混合用于细胞培养。采用酶消化法从健康足月分娩新生儿的脐带组织分离获得UCMSC,将其分为3组。培养第1和第2组以DMEM/F12为基础培养液,分别添加胎牛血清(FBS)和混合脐带血血浆(UCP),第3组为商品化无血清培养液(Stem ProM SC SFM CTSTM)。经培养扩增后,采用流式细胞仪检测细胞免疫表型,并进行MSC成骨、成脂分化鉴定。取冻存复苏后的3组细胞,标记为UCM SCFBS、UCMSCUCP及UCMSCSFM,分别建立滋养层。应用免疫磁珠分选系统(MACS)分选人脐带血CD34+细胞,在添加造血因子组合(Stem SpanCC100)的CD34+无血清培养液(Stem Pro-34SFM)中培养,并根据滋养层的不同,分为4组:A组CD34+细胞(CD34+cells)为空白对照组;B组为FBS滋养层组(UCM SCFBS+CD34+cells),C组为UCP滋养层组(UCM SCUCP+CD34+cells),D组为SF滋养层组(UCM SCSFM+CD34+cells)。于培养第0天和第7天计数各组的有核细胞数(NC)、流式细胞仪检测CD34+比例,并进行造血祖细胞集落培养,评估扩增效率。结果:在3种培养体系下的UCMSC均呈现典型的梭形漩涡状生长,MSC表面标记的表达谱系基本无差异,均具有向成脂、成骨分化的能力,但在UCP培养条件下细胞的扩增能力显著高于其他2组(P<0.05)。经过7 d与脐带血CD34+细胞的共培养,虽然4组的CD34+细胞比例均下降,但NC及CD34+细胞数均得到显著扩增,其中UCMSCUCP滋养层组和UCMSCSFM滋养层组均大于UCMSCFBS滋养层组和空白对照组(P<0.05)。与第0天的集落形成能力比较,UCM SCUCP滋养层组与UCMSCSFM滋养层组的集落扩增倍数无差异,但前者的扩增倍数高于UCMSCFBS及空白对照组。结论:UCP可作为一种较为理想的无动物源性的血清补充物,用于UCM SC的分离培养并维持其生长、增殖、分化,是临床级M SC大量扩增培养体系较为安全的选择。

胎盘间充质干细胞脐血血浆培养体系的建立

目的建立并优化适用于临床级胎盘源间充质干细胞的脐血血浆体外培养体系。方法采用酶消化法分离胎盘间充质干细胞,分为胎牛血清组(10%胎牛血清+DMEM/F12)、脐血血浆组(10%脐血血浆+DMEM/F12+1 000 IU/L肝素)和无血清组(Stem ProMSC SFM CTSTM);经培养扩增后,采用流式细胞术检测间充质干细胞表面标志,并诱导细胞向成脂肪、成骨分化,比较3组培养扩增所得间充质干细胞的差异。结果 3组细胞的增殖速度并无明显差异;脐血血浆组、胎牛血清组及无血清组培养扩增所得的细胞均表达CD90、CD29、CD44、CD49e、CD105、CD73,不表达CD34、HLA-DR、CD45;而且均具有向成脂、成骨分化的能力。结论脐血血浆可取代胎牛血清或无血清培养基用于胎盘间充质干细胞的培养扩增,以此获取可供临床应用的胎盘间充质干细胞。

脐血血浆替代胎牛血清培养脐带间充质干细胞及冷冻保存

背景:采用胎牛血清扩增培养及冷冻保存的间充质干细胞,在临床应用中存在一定的风险。目的:探讨以脐血血浆替代胎牛血清体外分离培养、扩增及冷冻保存脐带间充质干细胞的可行性。方法:选择符合广州脐血库供者合格性筛选标准的脐血,收集脐血干细胞制备过程中去除的血浆,经病原学及微生物检测合格,多份混合用于细胞培养。采用酶消化法从健康足月分娩新生儿的脐带组织分离获得脐带间充质干细胞,分为两组,分别以DMEM/F12为基础培养基,添加胎牛血清或混合脐血血浆,经培养扩增后,采用流式细胞仪检测细胞免疫表型,并进行间充质干细胞成骨、成脂分化鉴定。在含有10%二甲基亚砜的DMEM/F12培养基中,分别添加体积分数为20%的胎牛血清或混合脐血血浆作为冷冻保存液,对扩增至第3代的细胞冷冻保存至6个月以上,观察复苏后细胞的活率、贴壁情况、增殖、免疫表型及向成骨细胞分化的能力。结果与结论:两种培养体系下的脐带间充质干细胞均呈现典型的梭形漩涡状生长,间充质干细胞免疫表型的表达谱系基本无差异,均具有成骨、成脂分化的能力,但脐血血浆培养条件下细胞的增殖速度显著高于胎牛血清。冻存复苏后的细胞可正常贴壁,且具有向成骨细胞分化的能力,采用脐血血浆冻存的细胞具有更高的贴壁效率及扩增能力。上述结果表明,脐血血浆可以替代胎牛血清用于脐带间充质干细胞的扩增培养及冷冻保存,并维持了间充质干细胞的基本生物学特性,是大量扩增间充质干细胞用于临床治疗较为安全的选择。

非血缘脐血移植后兼有温冷双抗体Evans综合征1例并文献复习

Evans综合征国内外报道较为少见,兼有温冷双抗体Evans综合征更为罕见。文章报道了1例重型再生障碍性贫血患者行首次非血缘脐血移植后发生植入失败,再次输入非血缘脐血植入后病毒感染下引发兼有温冷双抗体Evans综合征,给予利妥昔单抗联合血浆置换治疗后患者各项指标均明显好转。笔者建议对于移植后早期并发Evans综合征的患者在给予传统方案治疗效果差时,应尽早考虑血浆置换和利妥昔单抗的联合和序贯应用。