雷帕霉素滴眼液抑制大鼠角膜移植的免疫排斥反应

目的:研究雷帕霉素滴眼液眼局部应用对大鼠角膜移植免疫排斥反应的作用。方法:建立大鼠穿透性角膜移植动物模型,以SD大鼠为受体,Wistar大鼠为供体,分为A,B,C,D,E5组。手术后2d起分别以滴眼液基质、0.5g/L雷帕霉素滴眼液、1g/L雷帕霉素滴眼液、2g/L雷帕霉素滴眼液、10g/L环孢霉素A滴眼液滴眼,每次100μL,4次/d,用药至排斥反应发生。对角膜植片进行临床观察,以混浊、水肿和新生血管3项指标作为临床评估标准,并进行组织学检查。结果:角膜植片5组的存活时间分别为11.00±1.85d,19.71±3.86d,22.17±4.07d,31.71±8.44d及25.00±8.85d,各用药组与对照组比较差异有显著性(P<0.01);各浓度雷帕霉素组与环孢霉素A组比较差异无显著性(P>0.01)。组织学发现,术后14d各药物治疗组炎细胞浸润、新生血管形成及水肿程度均明显轻于对照组。结论:0.5,1及2g/L的雷帕霉素滴眼液均能显著延长角膜植片的存活时间,对大鼠穿透性角膜移植排斥反应具有抑制作用,随着药物浓度的增大抗排斥作用增强。

雷帕霉素抑制大鼠角膜移植免疫排斥反应的实验研究△

目的研究雷帕霉素对大鼠角膜移植免疫排斥反应的抑制作用。方法建立大鼠穿透性角膜移植动物模型,以SD大鼠为受体,Wistar大鼠为供体,分为4组,手术当日起分别腹腔注射0.5%羧甲基纤维素、雷帕霉素(2.5mg·kg-1·d-1)、环孢霉素A(10mg·kg-1·d-1)、雷帕霉素+环孢霉素A(RPM1.5mg·kg-1·d-1+CsA5mg·kg-1·d-1),共12d。对角膜植片进行临床观察,以混浊、水肿和新生血管3项指标作为临床评估标准。结果4组角膜植片的存活时间分别为11.29d±1.50d、20.57d±2.37d、20.86d±2·12d及22.57d±1.99d,各用药组与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论雷帕霉素能显著延长角膜植片的存活时间,对大鼠穿透性角膜移植排斥反应具有抑制作用,联合用药具有协同作用。

冬虫夏草抑制穿透性角膜移植排斥反应的临床研究

目的：探讨冬虫夏草对穿透性角膜移植的影响，方法：对ｉ９９０年１月至１９９５年５月施行穿透性角膜移植２１８例患者中６８例随机分为激素组和冬虫夏草组进行比较。结果：植片透明率虫草组为９１％（３１／３４），激素组为７０．５％（２４／３４）。两组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。虫草组排斥反应发生率为１７．５％（６／３４），激素组为３５％（１２／３４）（Ｐ＜０．０１）。视力０．３以上者虫草组７６％（２６／３４），激素组为５３％（１８／３４）（Ｐ＜０．０５）。用药后Ｔ淋巴细胞总数、Ｔ辅助细胞及Ｔ抑制细胞比用药前显著降低（Ｐ＜０．０５）。结论：冬虫夏草有较强的免疫抑制作用，与激素联合应用能强化免疫抑制作用。

高危角膜移植的围手术期治疗

目的 探讨高危角膜移植患者围手术期的处理措施 ,以降低术后免疫排斥反应率。方法 对 6 80例有完整随访记录的穿透性角膜移植中的 12 4例 (137眼 )高危角膜移植患者 ,分别在围手术期 (术前、术中、术后早期 )进行相应处理。结果 经围手术期处理后 ,本组 137眼高危患者穿透性角膜移植后的免疫排斥率为 37% ,植片透明率为 80 .1% .结论 重视高危角膜移植围手术期的处理 。

三种感染性角膜溃疡穿透性角膜移植术后免疫排斥反应的比较

目的 比较不同病原菌感染性角膜溃疡行穿透性角膜移植术 (PKP)后免疫排斥反应发生的情况。方法 3组 ( 2 87例 )不同致病微生物感染的角膜溃疡行PKP术后随访 8～ 48个月 ,观察比较其免疫排斥发生率及首次排斥反应发生时间。结果 真菌性角膜溃疡术后排斥反应发生率高于细菌感染和单纯疱疹性角膜炎 (HSK)组 (P <0 0 5 ) ,细菌感染和HSK组间无显著性差异 ,真菌性角膜溃疡术后首次排斥反应发生时间集中于术后 3个月 ,较其它 2组提前。结论 持续严重的炎症反应 ,植片较大及术后早期应用免疫抑制剂受限是真菌性角膜溃疡PKP术后排斥反应发生率较高和反应时间较早的原因。建议对真菌性角膜溃疡PKP术后应仔细观察 ,发现已无真菌复发的危险时 ,要抓住时机及早抗排斥治疗。

两种深板层角膜移植术治疗圆锥角膜的比较研究

目的对比仅保留后弹力层和内皮细胞层植床的改良Anwar技术深板层角膜移植术(deep anterior lamellar keratoplasty performed with the modified Anwar technique,DALKa)和保留少量角膜基质的手工分离深板层角膜移植术(deep anterior lamellar keratoplasty performed with the manual technique,DALKm)治疗圆锥角膜的临床效果。方法对我院临床诊断明确的中晚期圆锥角膜40例42眼进行手术治疗,其中行DALKa者18眼为DALKa组,行DALKm者24眼为DALKm组。术后随访2a,对比分析术后最佳矫正视力、屈光状态和并发症情况。结果术后2a,最佳矫正视力≥0.5者DALKa组占94.4%(17/18),DALKm占54.2%(13/24),差异有统计学意义(P<0.05);两组最佳矫正视力≥1.0者分别占50.0%和25.0%,差异无统计学意义(P>0.05)。术后1a,DALKa组的近视度数和散光度数分别为(-3.08±1.13)D和(-3.00±1.02)D,DALKm组分别为(-2.63±1.02)D和(-3.33±1.17)D;术后2a,DALKa组近视度数和散光度数分别为(-3.97±1.07)D和(-2.09±1.15)D,DALKm组分别为(-2.10±0.98)D和(-3.05±1.20)D;术后1a、2a两组近视度数和散光度数差异均无统计数意义(均为P>0.05)。DALKa组术中发生后弹力层穿孔2眼,术后后弹力层皱褶4眼;DALKm组出现后弹力层皱褶、角膜炎、上皮病变及再次角膜移植者各3眼。结论相对DALKm,DALKa成功率更高,术后并发症更少,矫正视力更好,是治疗圆锥角膜的更好的术式。

药物防治角膜移植术后免疫排斥的研究进展

应用药物治疗角膜移植术后免疫排斥,一直是眼科角膜病专业研究的重点内容之一。许多新型的免疫抑制剂得到了比较深入的研究,正在逐步应用到角膜移植术后免疫排斥的治疗中去。我们回顾了免疫抑制剂的发展和临床应用情况,分析了传统免疫抑制剂的作用效果和副作用,并介绍了目前一些新型免疫抑制剂的研究进展情况。

局部应用环孢霉素A的实验研究及初步临床应用

应用异种角膜移植作动物模型,研究局部应用环孢霉素A(Cyclosporin A,CsA)对免疫排斥反应的影响,在应用1%CsA橄榄油滴剂和2%CsA眼膏的治疗组中,8只实验兔有6只植片透明,在观察期内(28天)没有发生排斥反应;对照组5只实验兔全部产生了排斥反应,组织病理学检查有明显的炎性细胞浸润。临床观察与动物实验结果一致。提示:CsA在抑制角膜移植术后的排斥反应和延长植片的存活上是一种强有力的免疫抑制剂。同时发现局部应用2%CsA眼膏对春季角结膜炎有较好疗效。

甘草次酸抑制大鼠新生血管化角膜穿透性移植术后排斥反应的免疫病理研究

目的 观察角膜移植术后的免疫排斥反应病理改变及甘草次酸对大鼠新生血管化角膜模型行穿透性移植术后免疫抑制的影响。方法 利用缝线诱发大鼠角膜新生血管。在角膜新生血管形成 1周后将 48只大鼠分成甘草次酸加地塞米松组、地塞米松组、甘草次酸组和对照组。各组均行同种异体穿透性角膜移植术。用免疫组织化学染色方法检测各组角膜植片中CD4+细胞、CD8+细胞、巨噬细胞、白细胞介素 -α受体、Ⅱ类主要组织兼容性抗原、细胞间粘附分子-1及淋巴细胞功能相关抗原 -1的表达。结果 排斥的角膜组织大量表达上述免疫细胞和分子 ,甘草次酸可以对这些细胞和分子产生明显抑制作用。结论 甘草次酸抑制T淋巴细胞和巨噬细胞的活化、增殖 ,延长角膜移植物的存活时间 。

局部联合应用雷帕霉素及环孢霉素A在大鼠角膜移植排斥反应中的作用(英文)

目的:评价雷帕霉素滴眼液与环孢霉素A滴眼液联合应用对大鼠角膜移植免疫排斥反应的抑制作用。方法:建立大鼠穿透性角膜移植动物模型,以SD大鼠为受体,Wistar大鼠为供体,分为A,B,C,D4组。手术后2d术眼分别滴用滴眼液基质100μL,2g/L雷帕霉素滴眼液100μL,10g/L环孢霉素A滴眼液100μL,2g/L雷帕霉素滴眼液50μL+10g/L环孢霉素A滴眼液50μL,4次/d,连续用药至排斥反应发生。对角膜植片进行临床观察,记录植片存活时间,并进行组织学检查。结果:各治疗组显著延长角膜植片存活时间(P<0.01),联合用药的D组效果更佳,优于各单药物治疗组B组和C组(P<0.05,P<0.01)。组织学发现,术后14d各治疗组炎细胞浸润、新生血管形成及水肿程度明显轻于对照组。结论:局部联合应用雷帕霉素滴眼液与环孢霉素A滴眼液能显著延长角膜植片存活时间,抑制大鼠角膜移植排斥反应,具有协同作用。

TGF-β_1对大鼠高危角膜移植排斥反应及超微结构的影响

目的探讨重组腺相关病毒介导的转化生长因子-β1(recombinant adeno-associated virus mediated transforming growth factor-β,rAAV-TGF-β)抑制大鼠高危角膜移植术后免疫排斥反应的作用及对植片超微结构的影响。方法构建rAAV-TGF-β真核表达质粒载体。碱烧伤的方法建立角膜新生血管化动物模型,52只角膜新生血管化的SD大鼠接受穿透性角膜移植手术,分为2组,实验组(26只)Wistar大鼠角膜植片浸泡在含rAAV-TGF-β1(10×1012v.g..L-1)的DMEM/F12培养液中,37℃孵育30min,移植到SD大鼠角膜植床上;对照组(26只)Wistar大鼠角膜植片浸泡在DMEM/F12培养液中,37℃孵育30min,移植到SD大鼠角膜植床上。术后裂隙灯显微镜观察植片排斥情况,比较2组角膜植片的平均存活时间和各时间点排斥反应指数。术后9d、14d角膜植片行超微结构检查,免疫组织化学方法检测角膜组织中IFN-γ、TGF-β1的表达。结果对照组角膜植片平均存活时间为(10.75±1.91)d,实验组为(22.85±3.48)d,2组比较差异有显著统计学意义(P<0.01);实验组术后各时间点角膜植片排斥反应指数均明显低于对照组,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。术后9d、14d角膜植片超微结构检查显示,实验组角膜植片基质层成纤维细胞凋亡与坏死明显减轻;免疫组织化学分析显示,实验组植片内IFN-γ表达低于对照组,TGF-β1表达高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论rAAV-TGF-β1能显著延长角膜植片存活时间,抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应,改变植片的超微结构。

器官培养法保存大鼠角膜移植术后Thl／Th2细胞因子和T细胞亚群表达的研究

背景免疫排斥反应是导致角膜移植手术失败的重要原因。器官培养法保存角膜可以逐渐降低植片的免疫原性，有利于减轻排斥反应。但目前对于器官培养法保存角膜植片行角膜移植术后确切的免疫排斥机制研究较少。目的探讨器官培养法保存大鼠角膜植片行角膜移植后，部分Thl／Th2细胞因子和T细胞亚群在眼局部和／或全身的表达变化。方法以36只Wistar大鼠为供体，72只SD大鼠为受体，行穿透角膜移植术。受体大鼠按随机数字表法分为器官培养植片组和新鲜植片组，每组36只；另选6只SD大鼠作为正常对照组。术后裂隙灯下观察植片存活时间和排斥情况，ELISA法检测房水中自细胞介素2（IL-2）、干扰素1（IFN-1）、IL4和肿瘤坏死因子α（TNF-α）质量浓度的变化，免疫组织化学法检测植片内CD25的表达，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测植片内TNF-dmRNA、IFN-1mRNA、IL4mRNA和CD25mRNA的表达，流式细胞术检测外周血中CD28亚群的表达。结果器官培养植片组的术后植片存活时间达13．78d，长于新鲜植片组的10．56d，差异有统计学意义（t=14．945，P=0．000）。术后6、13、24d时，两手术组房水中IL-2、IFN-1、IL-4和TNF-α的质量浓度均高于正常对照组，于13d时达最高水平，新鲜植片组质量浓度最高（F=324．891、416．416、240．661、364．533，P=0．000）。术后13d时，植片内CD25表达较弱，两组间区别不明显；新鲜植片组中TNF-dmRNA和IFN-1mRNA的表达强于器官培养植片组（t=2．464，P=0．039；t=5．438，P=0．001），两组IL4mRNA和CD25mRNA的表达水平比较差异均无统计学意义（t=-0．782，P=0．457；t=0．712，P=0．497），正常角膜则无表达；3组大鼠外周血淋巴细胞中CD28亚群百分比差异有统计学意义（F=70．489，P=0．000），两手术组显著升高，但器官培养植片组水平低于新鲜植片组（P=0．016）。结论Thl／Th2因子平衡调节机制和CD28亚群可能在器官培养法保存角膜植片行角膜移植术后的排斥反应中发挥重要的调节作用。

局部应用雷帕霉素对大鼠角膜移植术后细胞因子的影响

目的研究局部应用雷帕霉素(RAPA)滴眼液对大鼠角膜移植术后角膜白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素γ(IFN-γ)和穿孔素(PFP)mRNA表达的影响。方法建立大鼠穿透角膜移植动物模型,以SD大鼠为受体,Wistar大鼠为供体,随机分为4组。手术后第2d起分别以滴眼液基质、1%环孢素A(CsA)滴眼液、0.2%RAPA滴眼液、0.2%RAPA与1%CsA滴眼液联合滴眼,4次/d,连续用药至排斥反应发生。未发生排斥反应的动物模型,用药至术后42d终止实验。术后14d检测术眼角膜组织IL-1β、IFN-γ和PFPmRNA表达。结果各用药组角膜植片的存活率显著高于对照组(P<0.01);联合用药产生协同作用优于单独用药各组,角膜IL-1β、IFN-γ及PFP的mRNA表达均明显下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论0.2%RAPA滴眼液显著延长了大鼠角膜植片的存活时间,联合用药产生协同作用,显著抑制角膜组织IL-1β、IFN-γ及PFPmRNA的表达,是抑制角膜移植排斥反应的作用机制之一。

复方倍他米松对异种角膜板层移植术后免疫排斥反应的影响

目的:观察结膜下注射复方倍他米松对鸵鸟-兔眼板层角膜移植术后免疫排斥反应的缓释治疗作用。方法:16只6周龄健康新西兰白兔角膜(单眼)行板层角膜移植术,植片应用鸵鸟脱细胞的角膜基质,术后分成两组,实验组术毕及术后结膜下注射复方倍他米松注射液(每隔7d一次),对照组术毕及术后结膜下注射地塞米松磷酸钠注射液(每隔7d一次)。分别于术后1、2wk,1、2mo取兔角膜组织做石蜡包埋切片,进行HE染色观察组织特点,同时进行间接免疫荧光法检测CD4^+、CD8^+T淋巴细胞的变化。结果:术后2mo,实验组角膜植片在位,并保持透明,新生血管极少,组织切片HE染色和间接免疫荧光染色结果显示,仅见少许中性粒细胞浸润,未见CD4^+、CD8^+T淋巴细胞;对照组炎症反应明显,角膜植片混浊,组织切片HE染色和间接免疫荧光染色结果显示,炎性反应以中性粒细胞浸润为主,可见CD4^+、CD8^+T淋巴细胞。结论:复方倍他米松作为长效缓释剂可有效抑制鸵鸟-兔板层角膜移植术后免疫排斥反应,延长植片的存活时间。

羟基喜树碱对大鼠角膜移植后CD4、CD8、CD25表达的影响

目的研究羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin,HCPT)对大鼠角膜移植术后CD4、CD8、CD25表达的影响。方法以成年雌性Wistar大鼠为供体,雄性SD大鼠为受体建立穿透性角膜移植模型,受体大鼠随机分为3组,每组6只,分别为对照组、环孢霉素A(CsA)组和HCPT组,3组在移植术后第1天开始每天腹腔分别注射生理盐水2mL·kg-1、5g·L-1CsA溶液10mg·kg-1和1g·L-1HCPT溶液2.0mg·kg-1,至术后第12天。在术后第14天,应用免疫组织化学方法检测各组角膜植片中CD4、CD8、CD25的表达。结果术后第14天,CD4、CD8、CD25阳性细胞计数对照组分别为22.170±2.639、16.500±1.517、21.670±3.204,CSA组分别为7.330±1.033、5.170±1.329、6.670±0.816,HCPT组分别为4.770±1.577、3.830±0.983、3.670±1.033,两用药组角膜植片中表达CD4、CD8、CD25阳性细胞计数均较对照组明显减少(均为P<0.01),HCPT组CD4、CD25表达少于CsA组(P<0.05)。结论 HCPT能够抑制大鼠角膜植片CD4、CD8及CD25的表达。