HBV病毒复制机制及慢性乙型肝炎药物靶点

乙型肝炎病毒(HBV)感染是一种严重影响公共卫生与人体健康的全球性流行性疾病,尽管乙肝防治已有很大提高,但仍缺乏高效的药物与手段。研究表明,肝损伤、肝衰竭程度与HBV及宿主免疫系统相互作用存在复杂关系。因而详细地探明HBV生命周期和感染过程,为研究HBV药物靶点和制定新的抗病毒策略提供前期坚实的基础,意义重大。该文详细介绍HBV病毒复制机制,并系统地阐述近年来新发现的和潜在的药物靶点,为制备新型的抗HBV药物提供参考。

湖南省新冠肺炎新版成人预防方干预新型冠状病毒肺炎的网络药理学研究

目的采用网络药理学及分子对接技术研究湖南省新冠肺炎新版成人预防方干预新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)的药物成分、作用靶点及潜在通路。方法利用TCMSP、BATMAN-TCM数据库筛选湖南省新冠肺炎新版成人预防方的活性成分及药物作用靶点,应用GeneCards等平台检索COVID-19的疾病靶点,采用Cytoscape 3.8.0软件构建“药物-成分-靶点”网络图,运行STRING数据库进行靶蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)分析,使用R语言数据包进行基因本体功能富集(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomics,KEGG)富集分析,预测其潜在机制,运用AutoDock Vina 1.5.6和PyMol 2.4.0软件对湖南省新冠肺炎新版成人预防方中的关键活性成分与PPI中的核心蛋白进行分子对接验证。结果经过筛选,得到湖南省新冠肺炎新版成人预防方的有效成分198种,涉及靶标175个,“药物-成分-靶点”图中筛选出94个交集基因。PPI网络显示,湖南省新冠肺炎新版成人预防方干预COVID-19主要涉及PTSG2、HSP90AA1、ESR1等核心蛋白,共有靶标的GO及KEGG富集分析结果主要涉及炎症-免疫调节、胞内信号转导、细胞凋亡、基因调控等多种生物学途径以及IL-17、TNF、HIF-1、AGE-RAGE等相关通路。分子对接验证提示槲皮素与核心靶蛋白MAPK3结合情况最佳,MAPK3为与关键化学成分结合活性最优的靶蛋白。结论湖南省新冠肺炎新版成人预防方中主要化学成分可能作用于MAPK3、MAPK1、TP53、AP-1、p38等多种核心靶蛋白,激活/抑制IL-17、TNF等信号通路,介导炎症-免疫调节等生物学过程,从而发挥干预COVID-19的作用。

LHRH介导的TAT蛋白核心肽PTD的制备及跨膜研究

为了研究促黄体激素释放激素(LHRH)介导的TAT蛋白核心肽PTD的跨膜作用,测定目的蛋白的转导效率,试验以pET28a—PTD—GFP质粒为模板,设计含LHRH基因序列的特异性PER引物,经PCR扩增后双酶切,并克隆到原核表达载体pET28a中,构建重组质粒并在E.coli BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,超声破碎后进行硫酸铵梯度沉淀,取上清液用Phenyl—HP疏水层析柱和Q阴离子交换层析柱纯化,将纯化后的目的蛋白加到体外培养的HeLa细胞中,观察转导情况,分析目的蛋白浓度对转导效率的影响。结果表明:PER扩增得到目的基因LHRH—PTD-GFP,并成功构建出重组质粒pET28a—LHRH—PTD-GFP,在E.coli BL21(DE3)感受态细胞中成功诱导表达出目的蛋白,经Phenyl—HP疏水层析柱和Q阴离子交换层析柱成功纯化出目的蛋白,在荧光显微镜下HeLa细胞内显现明显的绿色荧光,经分析转导效率与目的蛋白浓度之间呈正相关,回归系数为0.096 6,决定系数(R^2)为0.937 8。说明LHRH介导的TAT蛋白核心肽PTD具有很好的跨膜特性,转导效率对目的蛋白浓度具有依赖性,在一定浓度范围内随着目的蛋白浓度的增加转导效率增大。