超低温冷冻对长鳍篮子鱼精子中几种酶活性的影响

研究超低温冷冻保存(-196℃)对长鳍篮子鱼(Siganus canaliculatus)精子内总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻前后长鳍篮子鱼精子内几种酶活性的变化。结果表明,经过超低温冷冻保存后,精子内GR活性显著升高(P<0.05),酶活性从冻前的163.54U/L±17.14U/L上升到239.33U/L±22.24U/L;其余7种酶的活性均显著下降(P<0.05),超低温冷冻对长鳍篮子鱼精子内不同酶活性和精子活力均有较大影响。

简易法深低温保存角膜的实验和临床评价

自1986年3月以来,用自制的“QL生物降温仪”对简易法深低温保存角膜进行了系统研究,应用光镜、电镜、酶组织化学、动物实验和临床穿透性角膜移植及非接触式角膜内皮显微镜检测结果证明,深低温保存角膜组织结构完整、功能良好、临床移植效果满意。

超低温冷冻对俄罗斯鲟精子抗氧化酶活性的影响

为了探讨超低温(-196℃)对精子的损伤机理,采用试剂盒测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性。结果表明,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,添加抗冻保护液冷冻后的精浆中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著升高(P<0.05),较未添加保护液组显著降低(P<0.05),GR的活性则显著低于鲜精组(P<0.05),但显著高于未添加保护液组(P<0.05);添加抗冻保护液冷冻后的精子中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著降低(P<0.05),较未添加保护液组显著升高(P<0.05),GR活性则显著高于鲜精组(P<0.05),但显著低于未添加保护液组(P<0.05)。这说明超低温冷冻对俄罗斯鲟精子的抗氧化系统产生了较大影响,成为影响精子活力的一个重要原因。

超低温冷冻对日本鳗鲡精子酶活性的影响

研究超低温冷冻保存(-196℃)对日本鳗鲡精子内总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻前后日本鳗鲡精子内酶活性的变化。结果表明,经过超低温冷冻保存后,日本鳗鲡精子的活力下降,精子内GR活性显著升高(P<0.05),酶活性从冻前的358.52±45.65 U/L上升到646.30±70.30 U/L;其它几种酶的活性均显著下降(P<0.05),总ATP酶、CK和SDH的活性分别从冻前的3.14±0.61 U/ml、17.10±3.51 U/ml和32±5.94 U/ml下降到1.83±0.43 U/ml、7.33±1.74 U/ml和21±1.41 U/ml,LDH、SOD和CAT活性分别从冻前的2 266.67±313.25 U/L、220.47±32.94 U/ml和48.51±5.94U/ml下降到1 195.91±198.51 U/L、84.16±22.11 U/ml和21.8±4.14 U/ml。超低温冷冻对日本鳗鲡精子酶活性和精子活力均有较大影响。

超低温冷冻保存对大黄鱼精子酶活性的影响

研究超低温(-196℃)冷冻保存对大黄鱼(Pseudosiaena crocea)精子内总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻前后大黄鱼精子内酶活性的变化。结果表明,经过超低温冷冻保存后,大黄鱼精子的活力下降,精子内GR活性从(4.42±0.29)U·L-1增加到(58.93±2.26)U·L-1(P<0.05);其它几种酶的活性均显著下降(P<0.05),总ATP酶、CK、SDH的活性分别从冻前的(60.16±5.88)U·mL-1、(11.91±0.76)U·mL-1和(51±2.16)U·mL-1下降到(3.54±0.37)U·mL-1、(10.22±0.32)U·mL-1和(31.5±2.08)U·mL-1;LDH、SOD和CAT活性从冻前的(7 806.44±110.11)U·L-1、(42.65±1.56)U·mL-1和(119.91±8.10)U·mL-1下降到(2 654.13±70.06)U·L-1、(31.99±1.57)U·mL-1和(55.87±2.32)U·mL-1。超低温冷冻保存对大黄鱼精子活力和精子酶活性均有显著影响。

冷却与低温保存对小麦酯酶活性的影响

为研究小麦酯酶作为检测农药残留量生物传感器的生物敏感元件的可行性,研究了小麦酯酶在室温(20℃)和4℃保存时、在经历低温后及在液氮中保存后酶活性的变化情况。研究显示,小麦酯酶在室温和4℃保存时,其活性衰退较快,有必要对其进行低温保存;在液氮中停留20min或保存34h后,小麦酶活性仍能维持很高;在液氮中保存8天,活性仍有97.5％。

超低温保存对罗氏沼虾胚胎几种酶活性的影响

研究了超低温冷冻保存(-196℃)对罗氏沼虾胚胎内总三磷酸腺苷酶(ATPase)、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻前后罗氏沼虾胚胎内酶活性的变化。结果表明,经过超低温冷冻保存后,胚胎内7种酶的活性均显著下降(P<0.05),其中总ATPase、CK、LDH和SDH的活性分别从冻前的1.322±0.162 U/mg prot、0.404±0.015 U/mg prot、352.225±23.214 U/gprot和2.067±0.139 U/mg prot下降到0.087±0.003 U/mg prot、0.010±0.002 U/mg prot、5.890±0.658 U/gprot和0.552±0.138 U/mg prot;SOD、CAT和GSH-Px的活性分别从冻前的19.217±0.677 U/mg prot、3.587±0.233 U/mg prot和7.626±1.106 U/(min.mg)下降至3.579±0.234 U/mg prot、1.773±0.227 U/mg prot和1.524±0.096 U/(min.mg);MDA的活性从1.015±0.038 n mol/mg prot上升到20.937±0.320 n mol/mgprot,超低温冷冻对罗氏沼虾胚胎酶活性有显著性影响。

超低温冷冻对俄罗斯鲟精浆和精子酶活性的影响

研究了超低温冷冻保存(-196℃)对俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti)精浆和精子中总三磷酸腺苷酶(AT-Pase)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)等酶活性的影响,并分别测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中酶的活性。结果显示,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,精子内各酶活性均显著降低,添加冷冻保护液组精子中总ATPase、SDH、LDH和CK的活性分别从(198.47±14.43)U/mL、(30.00±2.65)U/mL、(6 982.29±24.32)U/L和(1.94±0.05)U/mL下降至(110.19±2.32)U/mL、(16.33±2.08)U/mL、(5 122.93±195.07)U/L和(1.49±0.14)U/mL。未添加抗冻剂组则分别下降至(2.25±0.33)U/mL、(11.67±0.58)U/mL、(4 488.04±78.33)U/L和(1.16±0.02)U/mL;精浆中酶的活性均显著升高,添加冷冻保护液组精浆总ATPase、SDH、LDH和CK活性分别从(12.70±0.57)U/mL、(7.50±0.71)U/mL、(2017.26±116.81)U/L和(2.93±0.59)U/mL升高至(92.49±5.18)U/mL、(13.33±0.58)U/mL、(3 688.97±172.67)U/L和(4.39±0.24)U/mL,未添加抗冻剂组则分别上升至(200.27±12.97)U/mL、(24.67±3.06)U/mL、(6 124.40±329.14)U/L和(5.20±0.16)U/mL。结果表明,超低温冷冻对俄罗斯鲟精浆和精子中酶活性及精子活力均有较大影响。

超低温冷冻对斑尾刺虾虎鱼卵中酶活性的影响

研究了超低温冷冻保存(-196℃)对斑尾刺虾虎鱼成熟卵中总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)等酶活性的影响。结果表明,经过冷冻保存后,总ATP酶、CK、SDH和LDH的活性显著下降(P<0.05),同时可见添加抗冻剂组比未添加抗冻剂组下降幅度更大(P<0.05);SOD、CAT和GSH-PX的活性也显著下降(P<0.05),未添加抗冻剂组比添加抗冻剂组下降更明显(P<0.05);MDA的活性显著升高,且未添加抗冻剂组显著高于添加抗冻剂组(P<0.05)。超低温冷冻和是否添加抗冻剂都对斑尾刺虾虎鱼卵中酶活性有显著性影响。

LN_2保存锥栗种子的生理生化特性研究

运用LN2 ( - 196℃ )保存手段 ,结合添加和不添加防冻剂预处理 ,通过对锥栗种子LN2 保存前后种子质量特性和胚酶活性的分析 ,对其长期保存的可行性进行研究 ,结果表明 :含水量是影响锥栗种子和离体胚LN2 保存的重要因素 ,LN2 保存应进行适度脱水。当无防冻剂预处理时 ,LN2 保存宜采用 15 %～ 2 0 %含水量区间 ,冷解冻方式采用MF MT。当有防冻剂预处理时 ,各种酶活性的保存要比无预处理的要好 ,LN2 保存宜采用2 0 %～ 2 5 %含水量区间 ,冷解冻方式采用MF ST。

SARS-CoVS蛋白功能性受体ACE2在人角膜、结膜中的表达

目的检测人角膜、结膜中血管紧张素转化酶2(ACE 2)的表达,由此来初步推断重症急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒由眼部入侵的可能.方法取成人眼球破裂伤摘除的眼角膜和结膜组织及4～6个月中期引产胎儿的眼角膜、结膜、心、肺组织,分别采用RT-PCR和免疫组化方法检测组织中ACE 2的表达.取成人尸体解剖的心、肺组织作为对照.结果在上述各种组织中均检测到了ACE.2的表达.结论眼角膜、结膜是人体暴露于SARS冠状病毒的一个重要部位,研究结果从mRNA和蛋白质水平证实了眼部组织存在SARS冠状病毒S蛋白的功能性受体ACE 2,由此初步推断SARS-CoV存在由眼部入侵的可能,为临床进一步研究SARS的防护和致病机制提供了线索.

深低温长期保存角膜穿透性角膜移植术临床报告

目的 评价深低温长期保存角膜在穿透性角膜移植术中的应有价值。方法 应用深低温长期保存２１ ～１ ２３０ｄ 的供眼角膜行穿透性角膜移植术３４ 例（３５ 眼） 。结果 术后随访２ ～３０（ 平均７３ ±４０） ｍｏ ，角膜植片透明率达８２９ ％ ，部分患者视力改善，角膜植片内皮细胞密度达９０３ ～３ ０８３７ 个·ｍ ｍ －２（ 平均１ ６４１８ ±５９９３ 个·ｍ ｍ － ２） 。

卵形鲳鲹碱性磷酸酶和酸性磷酸酶的分布及其低温保存

测定了卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)的碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)在不同器官和肌肉中的活性;将样品分别置于4℃、-20℃和-80℃下保存3 d、7 d、15 d和30 d,研究不同保存温度和保存时间对样品中AKP和ACP酶活性的影响。结果表明,在卵形鲳鲹胃中未检测到AKP活性,其他器官中均检测到AKP活性,AKP活性大小顺序依次为后肠>幽门盲囊>肾>中肠>肝>前肠>心>肌肉;ACP在卵形鲳鲹体内分布较广,所测器官中均有ACP活性,其活性大小顺序为肝>肌肉>后肠>中肠>幽门盲囊>肾>心>前肠>胃。低温保存试验结果表明,AKP和ACP在4℃和-20℃下保存,时间越长,活力越低;在-80℃下保存,AKP和ACP活力在30 d内基本稳定,只有幽门盲囊的AKP和ACP在长时间保存后活力明显下降。

透明质酸钠在甘油冷冻保存角膜中的应用

目的评价甘油冷冻保存角膜的效果以及透明质酸钠对保存角膜内皮细胞(CEC)的保护作用。方法20只兔眼角膜片随机分为两组。对照组角膜直接放入纯甘油中,-25℃保存,实验组则在内皮面均匀黏附透明质酸钠后再放入甘油中低温保存。保存2个月后两组均接受CEC锥蓝-茜素红活性染色检查、电镜检查以及穿透性角膜移植(PKP)实验,以检验保存效果。结果两组CEC均能保持细胞活性,实验组的保存效果要好于对照组,其CEC密度为3067·9±127·6/mm2,死亡率为4·2%±3·4%,且行PKP较对照组有更高的成功率和CEC密度。结论甘油冷冻能够保持CEC的活性,透明质酸钠能进一步增进保存效果,改良后的甘油冷冻保存方法有希望成为一种方便、经济、有效的角膜保存方法。

SARS-CoVS蛋白功能性受体ACE2在人、兔角膜、结膜中的表达

目的 SARS冠状病毒 (SARS CoV)的S蛋白介导了病毒与宿主细胞的结合 ,最近已鉴定出SARS CoVS蛋白的功能性受体是血管紧张素转化酶 2 (angiotensin convertingenzyme 2 ,ACE2 )。本研究检测了ACE2在人、兔眼结膜、角膜中的表达 ,由此来初步推断SARS CoV由眼部入侵的可能。方法 分别采取 :(1)成人眼球破裂伤摘除的眼角膜和结膜组织 ;(2 ) 4～ 6月中期引产胎儿的眼角膜、结膜、心、肺组织 ;(3)兔眼角膜、结膜、心、肺组织 ;(4 )培养的人结膜成纤维细胞和兔角膜上皮细胞。分别采用RT PCR和免疫组化方法检测各组织、细胞中ACE2的表达。取尸体解剖的成人心、肺组织作为对照。结果 RT PCR法在上述各种组织和细胞中均检测到ACE2的扩增条带 ,其中胎儿、成人和兔的角膜、结膜扩增条带较心、肺稍弱 ,兔各组织的扩增条带亮度与对应的人体组织的扩增条带亮度相近。ACE2免疫组化反应产物主要位于胞浆和胞膜 ,呈棕黄色或棕褐色。角膜和结膜的上皮细胞及角膜内皮细胞呈明显的阳性表达 ,角膜和结膜的成纤维细胞呈弱阳性表达 ,培养的人结膜成纤维细胞和兔角膜上皮细胞亦可见阳性表达。兔组织中的ACE2表达强度及组织定位与人相近。结论 本研究从mRNA和蛋白质水平证实了眼组织存在SARS冠状病毒S蛋白的功能性受体ACE2 ,由?

深低温保存角膜内皮细胞的酶组织化学观察

对深低温(-196℃)保存40和140天的兔角膜及26天到611天的人角膜内皮细臌的酶活性做了测定。发现琥珀酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶和乳酸脱氢酶活性较强,酸性磷酸酶活性中等,ATP酶和5′-核苷酸酶活性较低,均与对照组相似。未测到碱性磷酸酶、磷酸化酶和葡萄糖-6-磷酸酶。

甘油干燥保存角膜内皮细胞活性的研究

采用锥蓝 -茜素红联合染色和酶组织化学染色技术 ,对经过甘油干燥保存 1、3、6个月的猫角膜内皮细胞进行活性检测。结果显示保存不同时期的角膜内皮细胞经锥蓝 -茜素红联合染色后 ,细胞核均深度蓝染 ,蓝染率10 0 % ,细胞边界不清晰。经组织培养 7天后 ,细胞核蓝染率仍为 10 0 %。ACP、ATPase、SDH和苹果酸脱氢酶在各时期保存角膜内皮细胞中均可检测到。保存 1、3个月角膜中 ,四种酶与正常对比无明显差异 (P>0 .0 5 )。而保存6个月组 ,除 ATPase外 ,其余三种酶反应程度降低 (P<0 .0 5 )。干燥保存角膜培养 7天后 ,内皮细胞中均未再检测到酶活性 ,认为经甘油干燥保存的角膜内皮细胞不再具有活性。

超低温冷冻对黄鳝精子中几种酶活性的影响

黄鳝（Monopterus albus）又名鳝鱼、蛇鱼、田鳗等,属硬骨鱼纲（Osteichthyes）、合鳃目（Synbranchiformes）、合鳃科（Synranchidae）、黄鳝属（Monopeterus）。黄鳝只限于东经90°—150°和北纬43°以南的亚热带地区繁衍,在我国除西部高原外各水域均有分布,其中安徽、江苏、浙江等地产量最多。

组织玻璃化冻存技术:优势与尚未完全解决的问题

背景:玻璃化冷冻保存是一种应用前途广阔的低温冷冻方法,通过使用高浓度的玻璃化冻存试剂将生物材料进行玻璃态转变,从而实现活性保存。目的:就玻璃化冻存的生物学原理及玻璃化冻存试剂的分类,卵巢、皮肤与角膜等医学组织标本的玻璃化冻存进行综述。方法:以“tissue;vitrification;cryopreservation”为英文检索词;“组织;玻璃化;冷冻保存”为中文检索词,检索1994年1月至2019年10月PubMed数据库及万方医学网相关文献。按照纳入与排除标准筛选后,对最终纳入的45篇文献进行归纳总结。结果与结论:玻璃化冻存可以防止细胞内外冰晶形成,避免了冰晶给细胞带来的多种损伤,有效保留了细胞的生物活性与基本功能。玻璃化冻存试剂主要分为渗透性和非渗透性2种,其操作简便、高效,唯一的缺点是高浓度的冻存试剂对细胞具有一定的毒性损伤。为了降低对组织整体损伤风险,可以混合使用多种低毒冻存试剂。目前玻璃化冻存技术已经成功应用于多种细胞,但组织冻存的技术难题尚未完全解决。

应用酶组织细胞化学技术对真空冷冻干燥保存兔角膜内皮细胞的研究

目的 :探讨真空冷冻干燥保存法对于兔角膜内皮细胞活性的影响。方法 :将冷冻及冻干保存兔角膜片分别复水及复温后 ,与新鲜角膜同时行内皮细胞三磷酸腺苷酶 (ATPase)、琥珀酸脱氢酶 (SDH)的酶组织细胞化学染色 ,观察 3组酶活性的差异。结果 :3组样本ATPase及SDH酶组化染色均呈阳性反应。实验组与对照组间AT Pase和SDH酶的平均积分光密度值 (IOD)差异具有统计学意义 (P <0 .0 1 )。结论 :真空冷冻干燥保存法可使离体角膜组织保持一定的活性。与新鲜及冷冻角膜相比 。