中药桑叶中主要成分的含量测定的研究进展

桑叶作为我国传统药食同源的中药品种之一,具有抗氧化、降血脂、降低心肌耗氧量、降血糖、抗肿瘤和提高免疫等药理作用。近年来桑叶的产地与采收时间、药效物质群等相关内容及含量测定方法学逐渐被学者广泛研究。本文较为系统地综述了桑叶中的黄酮类、生物碱类、酚酸类、香豆素类、氨基酸类和多糖类含量测定的研究进展,为桑叶质量控制、质量评价指标及品种开发提供文献依据和参考。

定点突变法确定人体CYP2A6和CYP2A13香豆素代谢的关键氨基酸

【目的】通过比较人体主要尼古丁代谢酶CYP2A6和CYP2A13野生型及突变体酶蛋白对香豆素7-羥化反应的催化动力学特征,确定影响两者催化活性差异的关键氨基酸残基,提供建立评估人群尼古丁代谢酶基因多态性与吸烟行为及癌症易感性生物标记的依据。【方法】运用定点突变和Sf9昆虫杆状病毒蛋白表达体系产生CYP2A6和CYP2A13在300,301以及369位点氨基酸互换的突变体蛋白质,测定系列香豆素浓度下的各个酶蛋白对香豆素7-羥化的催化反应活性,获得动力学参数并与野生型酶蛋白进行比较分析。【结果】与野生型CYP2A6相比较,其Ile300→Phe突变体催化效率(Kcat=Vmax/Km)显著下降而Gly301→Ala突变体催化效率显著上升(1.64和8.02相对于野生型3.56,P<0.01)。与之相对应,CYP2A13的Phe300→Ile突变体催化效率则明显上升而Ala301→Gly突变体催化效率显著下降(1.03和0.06相对于野生型的0.27,P<0.05)。这些酶催化特性的改变,主要是由于Vmax的改变所致。369位的氨基酸残基,无论是Ser还是Gly对CYP2A6或CYP2A13的香豆素7-羥化反应催化活性均无明显的影响。【结论】300和301位的氨基酸是影响CYP2A6及CYP2A13对香豆素7-羥化反应催化活性的关键残基,而369位氨基酸不影响此活性。

新型香豆素酰胺类化合物的合成及光学性能

以水杨醛、氰基乙酸乙酯、3-氨基-4-羟基苯甲酸为原料,合成2-（2-羰基-2H-1-苯并吡喃-3-基）苯并口恶唑-5-羧酸,再经酰氯化和N-酰化反应合成8个新型香豆素酰胺类化合物,收率为41%~65%。用核磁共振谱、质谱和红外光谱对其结构进行了表征,并用UV-Vis和荧光光谱研究了其光学性能。结果表明：其π-π＊跃迁特征峰在250~255 nm;其最大吸收波长在345~360 nm;最大发射波长λem约为440 nm,Stokes位移约为90 nm,荧光量子产率约为0.05。其摩尔吸光系数达到了10^5L/（mol·cm）的数量级,是一类潜在的荧光材料。

3-苯甲酰香豆素的合成及对谷氨酸和多肽的检测

以水杨醛和苯甲酰乙酸乙酯为原料,哌啶作催化剂,利用Knoevenagel反应合成了3-苯甲酰基香豆素,为该类化合物的合成提供了一种新的方法。与常规方法相比,利用此反应可以得到较高产率的3-取代香豆素,并且该反应反应条件温和,反应时间较短,产物后处理简单。3-苯甲酰基香豆素可以作为荧光探针对谷氨酸和谷胱甘肽进行检测,研究结果表明,3-苯甲酰基香豆素与谷氨酸和谷胱甘肽作用后,发生了明显的荧光减弱现象和荧光红移现象,这对于识别谷氨酸和谷胱甘肽具有很好的使用价值。

新型含氨基酸官能团的香豆素衍生物的合成

以L-苯丙氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸和组氨酸为原料,在Me3Si Cl-Me OH(Ⅲ)体系中反应合成了相应的甲酯盐酸盐(2a^2d);以7-羟基香豆素为原料,经两步反应制得7-(乙酸氧基)香豆素(6);6与3a经酰胺化反应合成了一种新型的香豆素衍生物——N-乙酰基-(氧-7-香豆素)-3-苯基-2-氨基-丙酸甲酯,其结构经1H NMR,13C NMR和FT-IR表征。

L-7-羟基香豆素氨基酸衍生物的合成及其性能

以保护L-谷氨酸(2)为原料,与N,N'-羰基二咪唑反应制得化合物3;3与丙二酸单乙酯镁盐反应制得β-酮酯(4);4分别与4-氟间苯二酚和4-氯间苯二酚进行Pechmann缩合后,在酸中脱除保护基合成了L-7-羟基香豆素氨基酸(1a)及其两个衍生物(1b,35.3%和1c,40.6%),其结构经1H NMR,13C NMR和HR-MS(ESI)确证。采用UV-Vis研究了1b和1c的p Ka。结果表明:1b和1c的p Ka分别为6.21和6.14。两个衍生物的荧光性能与pH密切相关。

一种巯基氨基酸响应荧光探针的合成及检测应用

目的:以7-羟基香豆素为原料合成的化合物SP作为荧光探针应用于巯基氨基酸的检测。方法:7-羟基香豆素和2,4-二硝基氟苯反应合成得到化合物SP,通过荧光增强实现巯基氨基酸的灵敏检测。结果:在探针SP的溶液中加入巯基氨基酸后(谷胱甘肽、半胱氨酸、高半胱氨酸),探针荧光逐渐增强,此探针响应时间较短,20 min达到荧光平台区;且加入其它种类氨基酸或常见离子,探针荧光强度未呈现明显变化。结论:合成的探针SP能够实现巯基氨基酸的检测,且具有良好的选择性。