真菌六胺银染色技术的优化

目的探索真菌六胺银染色的优化方案,寻求染色效果佳且环保简便的染色试剂。方法选取已知真菌感染的阳性病理组织,分别制作成蜡块,通过对比试验,比较不同氧化剂、六胺银染液不同配制方法、不同衬染试剂对六胺银染色质量的影响。结果真菌感染组织切片使用2%高碘酸水溶液氧化,染色步骤较使用三氧化铬溶液氧化简便,且三氧化铬为高毒致癌物,高碘酸毒性较低,故选择2%高碘酸溶液作为氧化剂更优;六胺银改良配制重复利用法配制六胺银液较传统配制法简便,对染液的利用率高,可以重复回收使用,较节约成本;1%亮绿染液与苏木素染液均是教材推荐的衬染剂,但亮绿染液的染色效果显著优于苏木素染液。结论真菌感染组织切片使用2%高碘酸水溶液作为氧化剂、六胺银改良配制重复利用法配制的六胺银液染色、1%亮绿染液衬染为较佳方案。

土壤细菌荧光原位杂交对比染色技术的构建

荧光原位杂交技术(FISH)已经成为研究海洋、湖泊及河流沉积物微生物特征的重要手段,但对土壤的应用尚存在局限性。研究以土壤和堆肥为材料,筛选了FISH对比染色荧光剂,并对其染色条件进行了分析。研究结果表明,1/200稀释SYBR Green(ISGI)可用于FISH的对比染色。其染色时间为1 min,封片试剂为无荧光浸镜油。

空间环境对恶性黑色素瘤血管生成拟态的影响

观察空间诱变后恶性黑色素瘤B16细胞株的在小鼠体内肿瘤组织中血管生成拟态数目的改变,并探讨可能的机理。应用细胞低温长期生存系统,将B16细胞株搭载于中国第20号返回式卫星,返地后单克隆化,从得到的110株单克隆空间诱变B16细胞株中随机选取7株,编号为38#～44#,常规培养6代后和对照细胞株在荧光倒置显微镜下观察肿瘤细胞的形态;同时采用MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,又称噻唑蓝)法,检测细胞增殖情况,将增殖差异较大的39#和44#细胞株接皮下种于C57BL/6J小鼠,两周后颈椎脱臼法处死小鼠,取出瘤体,经福尔马林固定后,采用CD31和PAS套染的方法观测肿瘤组织血管生成拟态的情况,并推测其与肿瘤生长速度和转移可能关系。

分析苏木素复染对组织切片免疫组化检测结果的影响

目的探讨苏木素复染对组织切片免疫组化(IHC)检测结果的影响效果。方法选择本院2016年1月至2018年6月收治的肺癌患者25例作为研究对象,均抽取患者的肺癌组织进行切片后免疫组化定量分析,根据是否采取苏木素复染分为复染组与非复染组,主要测定组织切片中的CK与Ki-67表达情况,利用数码相机与采图软件于显微镜下观察组织显色反应图片,并进一步分析CK与Ki-67蛋白表达阳性单位,即PU值,采取统计学分析二者之间的差异。结果复染组与非复染组肺癌组织切片图像显示CK与Ki-67蛋白表达有着一定的差异;复染组肺癌组织切片CK蛋白表达阳性单位、Ki-67蛋白表达阳性单位与非复染组比较差异均有统计学意义(P<0.05),复染组二者均高于非复染组。结论苏木素复染对组织切片免疫组化检测结果有明显影响,会造成浆定位与核定位蛋白阳性强度显著提高,存在明显偏差,从而影响组织切片定量分析,按照这样的结果提出为了尽量组织切片免疫组化定量检测结果的准确性,不宜实施苏木素复染。

溃变纤维Fink-Heimer Ⅱ法镀银染色后漂白复染技术

Fink-Heiller Ⅱ法能较好地分辨溃变纤维和溃变终末,广泛它用于神经束略的追踪。但该法常因正常组织中有许多金属银颗粒不能全部去除而造成切片背景不清,又固不能区分溃变来末梢周围的细胞构筑关系而致评价溃变终末的范围造成困难。本实验将Fink-Heimer Ⅱ法染色后的切片作漂白处理,而后作焦油紫复染。结果表明,经漂白处理的切片正常组织完全漂白而使背景清晰,而黑色的溃变纤维不受影响,完全保留。经复染的切片,复染的神经细胞显示较佳,能很好地反映出溃变终末的分布范围。因而是一种较为理想的溃变染色技术。

苏木素复染对组织切片免疫组化定量分析的影响

目的定量分析苏木素复染对组织切片免疫组化检测结果的影响。方法取肺癌组织30例,分为苏木素复染组和非复染组,采用免疫组化法检测切片中CK、Ki-67的表达。在Nikon显微镜下通过Canon数码相机和Zoom Browser Ex采图软件在阳性区域随机截取组织显色反应图片,用Image-pro Plus图像分析软件分别测试复染与非复染组切片中CK和Ki-67蛋白表达的阳性单位(PU值),比较复染组和非复染组PU值的差异,分析其相对偏差大小。结果苏木素复染组CK蛋白在肺癌细胞浆中表达的PU值大于非复染组,差异具有统计学意义(P=0.002),二者相对偏差为34.4%;复染后Ki-67在肺癌细胞核中表达的PU值也大于非复染组,差异也具有统计学意义(P=0.000),相对偏差为38.6%。结论组织切片免疫组化染色经苏木素复染会导致浆定位和核定位蛋白的阳性强度系统性增高,相对偏差明显增大,显著影响定量分析结果。因此,提示苏木素复染是影响组织标本免疫组化定量检测结果准确性的重要因素之一,不宜复染。关键词:阳性单位;复染;定量;

用Nissl法复染Golgi法镀染的树鼠脑切片

Ｇｏｌｇｉ染色法由于能充分显示神经元胞体及其突起而成为神经解剖学研究的重要手段之一，但此法镀染的神经元很少，不能定位。本实验用焦油紫对Ｇｏｌｇｉ法染色的树脑切片进行复染。结果表明，Ｎｉｓｓｌ法复染既能保留原来被镀染神经元及其树突的形态结构完整性，又可显示出原脑组织的细胞构筑特点及被镀染神经无所坚心的层次，克服了Ｇｏｌｇｉ法不能定位的弱点。复杂的切片透明和反差效果好，不易褪色。

苏木素复染对免疫组化显色强度定量分析的影响

目的探讨苏木素复染是否影响免疫组化显色反应强度,为免疫组化定量分析的质量控制提供科学依据。方法用免疫组织化学方法检测GLC-82肺腺癌细胞株细胞蜡块中Ki67、Tiam1的表达,检测分为复染组和非复染组;在Nikon显微镜下通过Canon数码像机和Zoom Browser Ex采图软件随机截取样品显色反应细胞图像,用Imagepro Plus图像分析软件,分别测试苏木素复染与不复染时GLC-82细胞Tiam1、Ki67蛋白表达的阳性单位(PU值),每组各测试100个细胞。结果苏木素复染后GLC-82细胞Tiam1的PU值为(36.76±5.12),大于未复染Tiam1的PU值(26.64±5.09,t=9.906,P=0.000),相对偏差为38%。苏木素复染后GLC-82细胞Ki67的PU值为(21.74±4.59),大于未复染Ki67的PU值(14.37±4.65,t=7.985,P=0.000),相对偏差为51%。结论经苏木素复染,Tiam1、Ki67的PU值均明显增大,且核表达抗原Ki67的相对偏差明显大于浆表达抗原Tiam1的相对偏差。因此,对免疫组化结果定量分析时,为保证测试结果的可靠性,不应进行苏木素复染。

陈旧褪色病理H.E.染色组织切片重新利用技术的探讨

在家畜病理学教学中和一些病理诊断中,常规H.E.染色切片质量的好坏直接影响病理评判结果。一些切片由于保存时间长久会逐渐褪色,使得显微镜下结构模糊、失真,影响病理疾病诊断的准确性。为了有效利用陈旧褪色病理H.E.染色组织切片,探讨陈旧褪色病理H.E.染色组织切片重新利用技术,采用4种方法(酸性高锰酸钾氧化-草酸漂白法、盐酸乙醇脱色法、氨水脱色法和常规H.E.染色法)对塔里木大学动物科学学院基础兽医实验室陈旧褪色的病理组织切片进行复染。结果表明:酸性高锰酸钾氧化-草酸漂白法复染的组织切片显微镜下细胞核呈蓝紫色,细胞质呈粉红色,复染效果最好;复染过程中酸性高锰酸钾氧化-草酸漂白法的掉片数最少,显著低于其他3种方法(P<0.05);4种复染方法间组织完整率差异不显著(P>0.05)。说明4种复染方法中酸性高锰酸钾氧化-草酸漂白法的复染效果最好。