CP7菌株的抗菌活性及菌种鉴定

经分离、筛选获得一株高效分泌抗菌物质的CP7菌株,从该菌株中提取的抗菌产物,对大肠杆菌标准株、金黄色葡萄球菌标准株、苏云金杆菌等细菌;瓜类炭疽病菌、水稻纹枯病菌等真菌有较好的抑菌作用。用16S rDNA序列分析法进行生物分子的分类,该菌株16S rDNA序列与类芽孢杆菌属的34个细菌的同源性为96%~99%,与多粘类芽孢杆菌的同源性为99%。用传统细菌学的方法对CP7菌株进行鉴定,其形态特征、生理生化特性与多粘类芽孢杆菌的特征特性相一致。表明CP7菌株属于多粘类芽孢杆菌。

CP7菌株抗菌蛋白粗提物对家蚕黑胸败血菌的抑杀作用

利用分子生物学方法和电镜技术,从多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)的一个新菌株CP7的发酵培养液中提取出抗菌蛋白,研究其抑制家蚕黑胸败血菌(Bacillussp.)的活性作用和杀菌机制。抗菌蛋白粗提液作用于黑胸败血菌后,引起菌体和芽孢变形、凹陷、空瘪等形态上的异常;对菌体细胞组织产生损伤作用,出现细胞壁皱缩、细胞膜受损、细胞器消溶、胞内物质(磷和DNA)外泄等现象;对菌体和芽孢的呼吸代谢产生影响,耗氧量在短时间内急剧增加,氧呼吸作用的持续时间缩短,最终耗氧量减小。分析认为:CP7抗菌蛋白对黑胸败血菌菌体和芽孢会产生直接的损伤作用,细胞壁和细胞膜的结构遭到破坏,严重时会导致细胞质消溶与外泄,并通过影响呼吸代谢的途径而协同起到抑菌、杀菌的作用。

CP7菌株抗菌物质对真菌的活性及其作用机制研究

旨在研究多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CP7菌株分泌的抗菌物质对玉米大斑菌和白色念珠菌的活性作用。结果显示,CP7菌抗菌物质对玉米大斑菌和白色念珠菌的菌丝、孢子生长有强烈的抑制作用,CP7菌抗菌物质处理后,玉米大斑菌的菌丝出现畸形、扭曲,细胞外壁皱缩,原生质发生凝聚,产生空泡,细胞器消溶,核区出现核固缩等现象;白色念珠菌的细胞壁和细胞膜模糊,原生质有凝聚现象,细胞器消溶,细胞核变形。推测CP7菌株抗菌物质是破坏真菌的细胞壁和细胞膜结构,形成通道,引起内容物外渗,破坏细胞内部结构,使原生质凝聚,细胞核固缩,最终使菌体死亡。

培养条件对粉被虫草菌株产虫草多糖及虫草酸的影响

【目的】探寻粉被虫草无性型粉被玛利娅霉cp菌株产虫草多糖和虫草酸的影响因子。【方法】采用静置培养实验方法,测定虫草多糖和虫草酸的产量。【结果】:最佳培养基为查氏培养基,最佳碳源、氮源和无机盐分别为蔗糖、蛋白胨和K_2HPO_4;最佳的氨基酸添加物为谷氨酸,最佳初始pH为7.0,最佳装液量50%,最佳接种量2.5%,26℃下最佳静置培养时间为40 d。

1株蚕沙高温腐熟菌的筛选及应用

为寻找高效的高温腐熟菌用于蚕沙的无害化处理,从蚕沙倾倒地筛选到1株菌株CP2,该菌株纤维素酶活性达到136.67 U/mL。将该菌株接种到蚕沙中进行堆肥试验,通过检测堆肥过程中堆体的温度、含水率、pH值、有机质含量、全氮含量、碳氮比及种子发芽指数等指标评价菌株CP2的应用效果。结果表明,试验组较对照组更能提高堆体温度、延长高温期、降低堆体含水量、促进有机质分解、降低碳氮比;试验组种子发芽指数在腐熟25 d时已达到88%,高出对照组15百分点;以上结果说明,加入CP2菌株进行堆肥,可加快蚕沙腐熟并提高堆肥品质。

粉被虫草静置发酵产N^6-(2-羟乙基)腺苷培养基组分及前体物的筛选

在静置培养条件下,对粉被虫草cp菌株产N6‐(2‐羟乙基)腺苷(简称HEA)的培养基及其组分进行优化。采用单因素实验方法,以HPLC法对cp菌丝体中HEA进行检测,以HEA的产量为指标,结果表明查氏培养基有利于cp菌株产HEA,其产量是沙氏和PD培养基的3.7倍和4.48倍。以查氏培养基为基础培养基,进行碳、氮源的筛选中,最有利于cp菌株产HEA的是蔗糖和硝酸钠;在无机盐的筛选中,K2HPO4是促进cp菌株累积HEA最主要的无机盐,其HEA产量较CK增长了5 822.37%(提高了58.2倍);在查氏培养基上添加不同前体物和氨基酸,发现其结构类似物腺苷、次黄嘌呤和腺嘌呤都有促进cp菌株累积HEA的能力,其中腺苷和次黄嘌呤能提高其产量60%以上;而组氨酸是最有利于cp菌株累积HEA的氨基酸,产量达到(45.56±2.8)mg/L,较CK提高HEA产量251.68%,其次是L‐谷氨酸增产184.19%。

不同培养条件对粉被虫草产N6-(2-羟乙基)腺苷的影响

N6-(2-羟乙基)腺苷[N6-(2-hydroxyethyl)-Adenosine,HEA],又名茧草菌素,是一种钙离子拮抗剂,具有抗紫外辐射、抗血小板凝结和镇痛等效用,是集医药保健、化妆品等多项开发潜力于一身的生物资源,也是衡量虫草制品质量的一个重要生物活性物质指标。该研究采用高效液相色谱法对菌丝体中HEA进行检测,以HEA的产量为指标,考察不同培养方法、培养基及其组分、前体物和氨基酸对粉被虫草(Cordyceps pruinosaPetch)cp菌株产HEA的影响。结果表明:在沙氏培养基上,静置培养120 d,cp菌株HEA的产量明显优于摇床培养20 d和发酵罐培养3 d的产量,说明随培养时间的延长,cp菌株中HEA的累积会逐步增加。在静置培养条件下,cp菌株在查氏培养基上HEA的产量明显优于沙氏培养基和PD培养基,HEA的产量是沙氏培养基的3.7倍,是PD培养基的4.48倍。以查氏培养基为基础培养基,静置培养120 d进行碳、氮源的筛选中,最有利于cp菌株产HEA的是蔗糖和硝酸钠;在无机盐的筛选中,K2HPO4是促进cp菌株累积HEA最主要的无机盐,其HEA产量较对照(不添加无机盐的查氏培养基)提高了58.2倍;在查氏培养基上添加不同前体物和氨基酸,发现其结构类似物腺苷、次黄嘌呤和腺嘌呤都有促进cp菌株累积HEA的能力,其中腺苷和次黄嘌呤的效果最好,能提高HEA产量60%以上;添加的14种氨基酸中有组氨酸、L-谷氨酸、甘氨酸、天门冬酰胺、丝氨酸、亮氨酸、L-丙氨酸、赖氨酸和精氨酸等9种氨基酸能促进cp菌株产HEA的能力,其中组氨酸是最有利于cp菌株累积HEA的氨基酸,其HEA产量较ck(查氏培养基)提高251.68%,HEA产量达到(45.56±2.8)mg/L,菌丝体中HEA含量达到(4 633.10±65.65)μg/g。