麻疯树cpSSR标记技术的建立与体系优化研究

[目的]建立麻疯树cpSSR-PCR反应的最佳反应体系。[方法]对影响麻疯树cpSSR-PCR反应体系的5个因素(TaqDNA聚合酶、DNA模板、Mg2+、dNTP、引物)进行优化试验,筛选各反应因素的最佳水平。[结果]20μl反应体系各组分的最合适浓度分别为10×Buffer、2.00mmol/LMg2+、2U/μlTaqDNA聚合酶、0.2mmol/LdNTP、0.2μmol/L引物、35ng/μlDNA模板。[结论]最佳的退火温度为52℃;该反应体系的稳定性和可重复性均较好。

濒危藏药桃儿七cpSSR-PCR引物开发与反应体系优化

利用桃儿七叶绿体全基因组开发cpSSR引物,使用正交设计试验,对桃儿七cpSSR-PCR反应体系中的5种主要因素(模板DNA,Mg^(2+),Taq DNA酶,dNTPs及ISSR引物)进行筛选优化来研究桃儿七遗传多样性。选取甘肃碌曲县则岔石林桃儿七居群样本及13个不同桃儿七居群验证该反应体系。正交试验表明:各因素显著性为Mg^(2+)>引物>Taw酶>DNA浓度>dNTPs,桃儿七cuss-PCR反应的最佳体系为(25μL):DNA20 ng/μL,Mg^(2+)1.5 mmol/L,dNTPs 2.0 mmol/L,Taq DNA酶0.5 U,引物1.0μmol/L,2.5μL 10×Buffer。该体系具有很高的稳定性和重复性,并为野生桃儿七遗传多样性及保护策略研究提供了技术支持。