circ-CPA4调节miR-140-3p/SGK1轴对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨环状RNA羧肽酶A4(circ-CPA4)调节miR-140-3p/血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶-1(SGK1)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:将H1299细胞分为5组:Ct组、si-NC组、si-circ-CPA4组、si-circ-CPA4+inhibitor-NC组、si-circ-CPA4+miR-140-3p inhibitor组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circ-CPA4、miR-140-3p表达;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;免疫印迹检测SGK1、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测circ-CPA4与miR-140-3p、miR-140-3p与SGK1的靶向关系。将上述5组细胞悬液分别皮下注射到裸鼠体内,30天后,处死裸鼠并分离肿瘤,称量肿瘤质量。结果:在NSCLC组织和细胞中circ-CPA4、SGK1蛋白高表达,miR-140-3p低表达。si-circ-CPA4组与Ct组、si-NC组比较,circ-CPA4、划痕愈合率、OD_(450)值、侵袭细胞数、SGK1、CyclinD1、MMP-2蛋白表达及裸鼠体内肿瘤质量显著降低,miR-140-3p表达、细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与si-circ-CPA4+inhibitor-NC组比较,si-circ-CPA4+miR-140-3p inhibitor组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);沉默circ-CPA4可靶向下调miR-140-3p表达,下调miR-140-3p可靶向促进SGK1蛋白表达。结论:沉默circ-CPA4通过上调miR-140-3p来抑制SGK1蛋白表达,从而抑制NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭,并促进细胞凋亡。

草鱼羧肽酶A4基因部分序列多态性及生长性状关联分析

【目的】筛选出更多与草鱼生长相关的SNP位点标记,为草鱼分子育种研究提供理论依据。【方法】根据草鱼EST数据库中属于消化酶的羧肽酶A4基因的cDNA序列设计引物,采用PCR产物直接测序法,对含预计SNP位点的cDNA序列进行扩增、测序,并寻找新的SNP位点。【结果】cDNA上预计的SNP位点不存在,但在内含子3上检测到两个SNP位点,分别位于内含子的第40、241个碱基处,命名为A40G位点和G241T位点。经创造酶切位点的限制性片段长度多态检测(CRS-RFLP),发现A40G位点AA型占50.3%、AG型占23.8%、GG型占25.9%,G241T位点的GG型占48.6%、GT型占47.9%、TT型占3.5%。利用一般线性模型(GLM)将两个SNP位点与草鱼6个生长性状进行关联分析,结果表明,A40G位点的GG型个体在体重、体长、体高均高于AA型和AG型,但差异不显著(P>0.05);G241T位点TT型个体最重,GG型最轻,但差异不显著(P>0.05);A40G和G241T两个位点组成的7种双倍型个体的体重、体长、体高、尾柄高等重要生长性状差异也不显著(P>0.05)。【结论】在草鱼羧肽酶A4基因的内含子3上发现两个SNP位点(A40G位点和G241T位点),每个SNP位点都可分为3种基因型,但两个SNP位点的不同基因型以及由其组成的双倍型与草鱼的重要生长指标均不存在显著相关。

羧肽酶A4促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT进程的机制及其相关意义

目的:探究羧肽酶A4(CPA4)促进非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程的机制及其临床意义。方法:通过IHC和WB法检测2012年2月至2015年12月济南市中心医院收治的105例晚期或转移性NSCLC患者的癌组织及其癌旁组织标本,以及NSCLC细胞中CPA4的表达;χ2检验分析CPA4表达与患者临床病理特征之间的关联,Kaplan-Meier法分析CPA4表达与患者OS之间的关系。采用细胞转染的方法分别构建稳定过表达和低表达CPA4的H1299与A549 NSCLC细胞,利用CCK-8法、细胞集落形成实验、划痕愈合实验和Transwell小室实验检测过表达或敲减CPA4后细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。建立裸鼠细胞移植瘤模型和尾静脉-肺转移肿瘤模型,检测过表达CPA4和敲减CPA4表达对在裸鼠体内成瘤和转移的影响,通过WB和IHC法检测移植瘤组织中上皮间质转化(EMT)相关标志物的变化。结果:与癌旁组织和正常肺上皮细胞比较,CPA4在NSCLC组织和细胞中均呈高表达(均P<0.05);CPA4高表达NSCLC患者的OS显著短于低表达患者(P<0.05),CPA4的高表达更多见于分化差、N2~N3淋巴结受累和TNMⅣ期(P<0.05或P<0.01)。过表达CPA4促进H1299细胞而敲减CPA4表达则抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭;过表达CPA4促进裸鼠H1299细胞移植瘤生长和肺的转移;过表达CPA4促进H1299细胞的EMT进程相关分子的变化。结论:NSCLC组织和细胞中CPA4均呈高表达,过表达CPA4可诱导EMT进程促进NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭且与肿瘤进展和预后有关,CPA4是一个预测NSCLC复发、预后及可用于靶向治疗的潜在标志物。

叶绿体分裂突变体cpd4中突变基因ARC5的鉴定与分析

cpd4是一个以Col为背景的拟南芥叶绿体分裂突变体,其突变表型与以Ler为背景的突变体arc5-1表型相似,即叶绿体数量明显减少,体积明显增大且形状常呈哑铃型。该突变未能对叶绿素含量造成明显影响。遗传分析显示其突变表型受隐性单基因控制。通过图位克隆的方法确定其突变性状是由ARC5基因突变引起的。该突变影响了ARC5基因mRNA的正常剪切,对mRNA的稳定性也造成严重影响。该工作为进一步研究ARC5在叶绿体分裂中的作用提供了有用的材料和信息。