猪链球菌9型cps9G基因的克隆与序列分析

根据GenBank中猪链球菌9型（SS9）基因的核酸序列，设计一对引物，采用PCR方法从确诊为猪链球菌的阳性样品中扩增cps9G基因片段，将其克隆到pMD18-T载体上，转化DH5a感受态细胞，提取重组质粒pMD18T-cps9G，经PCR和酶切鉴定后测序，并与GenBank上SS9相应序列进行同源性分析。结果表明，经PCR扩增，鉴定为SS9的有8株。序列分析发现，8株SS9的cps9G片段的核苷酸序列较稳定，该基因片段长度均为562bp，彼此间的核苷酸同源性达96．8％～99．8％，亲缘关系密切；与GenBank上已发表的SS9参考毒株的同源性介于96．0％～98．6％。

猪链球菌9型荚膜多糖cps9G基因的原核表达

本研究旨在克隆表达猪链球菌9型荚膜多糖部分抗原表位。设计1对引物,采用PCR法以猪链球菌9型河南分离株PY-2的基因组DNA为模板扩增出cps9G全基因序列。用限制性核酸内切酶BamHⅠ、XhoⅠ进行双酶切后,将其定向克隆到pET32a(+)中,构建重组表达质粒pET32a-cps9G,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,并优化表达条件。结果表明,经1.2mmol/L IPTG诱导4h后SDS-PAGE分析表明,重组菌株表达出了约50 700的融合蛋白条带,与预期一致。Western-blotting分析表明,该融合蛋白具有特异的生物学活性。这为以后建立快速、简便、特异的免疫学检测方法及制备单克隆抗体提供了较好的抗原,同时为研制猪链球菌亚单位疫苗和诊断试剂盒奠定了基础。