Crebanine N-oxide, a natural aporphine alkaloid isolated from Stephania hainanensis, induces apoptosis and autophagy in human gastric cancer SGC-7901 cells

Objective: To investigate the cytotoxic effects and the potential mechanisms of crebanine N-oxide in SGC-7901 gastric adenocarcinoma cells. Methods: The cytotoxicity of crebanine N-oxide was evaluated by 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide assay and cellular morphology was observed under a microscope. Cell apoptosis was determined by flow cytometry using propidium iodide staining. The expression levels of apoptotic-related proteins, cleaved caspase-3, cytochrome C, p53 and Bax, and autophagyrelated proteins p62, beclin1 and LC3 were detected by Western blotting assays. Results: Crebanine N-oxide treatment significantly inhibited the proliferation of SGC-7901 cells in a dose-dependent and timedependent manner via induction of G2-phase cell cycle arrest, apoptosis, and autophagy in SGC-7901 cells.Conclusions: Crebanine N-oxide could inhibit the growth of gastric cancer cells by promoting apoptosis and autophagy and could be used as a potential agent for treating gastric cancer.

Crebanine inhibits voltage-dependent Na～+ current in guinea-pig ventricular myocytes

AIM: To study the effects of crebanine on voltage-gated Na+ channels in cardiac tissues. METHODS: Single ventricular myocytes were enzymatically dissociated from adult guinea-pig heart. Voltage-dependent Na+ current was recorded using the whole cell voltage-clamp technique. RESULTS: Crebanine reversibly inhibited Na+ current with an IC50 value of 0.283 mmol?L-1(95% confidence range: 0.248-0.318 mmol?L-1). Crebanine at 0.262 mmol?L-1 caused a negative shift(about 12 mV) in the voltage-dependence of steady-state inactivation of Na+ current, and retarded its recovery from inactivation, but did not affect its activation curve. CONCLUSION: In addition to blocking other voltage-gated ion channels, crebanine blocked Na+ channels in guinea-pig ventricular myocytes. Crebanine acted as an inactivation stabilizer of Na+ channels in cardiac tissues.

两种克班宁长循环纳米粒的急性毒性与抗心律失常作用研究

目的对两种经PEG修饰载体材料(PELGE、PLGA)制备的克班宁(Crebanine,Cre)长循环纳米粒(PELGE-Cre-NPs、PLGA-Cre-NPs)进行急性毒性试验与抗心律失常作用研究,探讨其增效减毒的效果。方法采用Bliss法对PELGE-Cre-NPs与PLGA-Cre-NPs进行小鼠急性毒性试验,求半数致死量(LD_(50));采用氯仿诱发小鼠心室纤颤模型、氯化钡(BaCl_(2))及乌头碱致心律失常大鼠模型对两种纳米粒进行药效作用考察。结果PLGA-Cre-NPs与PELGE-Cre-NPs静脉注射的LD_(50)分别为13.619 mg·kg^(-1)与14.839 mg·kg^(-1),均比克班宁静脉注射的LD_(50)(9.382 mg·kg^(-1))明显增加。与模型对照组比较,两种纳米粒均能明显对抗氯仿诱发的小鼠心室纤颤、对抗氯化钡诱导的大鼠心律失常,明显提高乌头碱诱发大鼠室性早搏(VPB)、室性心动过速(VT)、心室纤颤(VF)及心脏停搏(CA)的阈剂量(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。与克班宁(5 mg·kg^(-1))实验组比较,PELGE-Cre-NPs高剂量(5 mg·kg^(-1))组恢复窦性心律维持时间≥5 min的鼠数量明显增多(P<0.05),心脏停搏乌头碱阈剂量明显提高(P<0.05)。结论两种材料纳米粒PLGA-Cre-NPs与PELGE-Cre-NPs的毒性较克班宁小,并具有较明显的抗心律失常活性,且作用效果强于游离克班宁,达到增效减毒作用。

克班宁通过DUSP5/ERK信号通路抑制胰腺癌细胞生长

目的:研究克班宁对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其潜在的作用机制。方法:采用CCK8、克隆形成实验和EdU染色检测克班宁对人胰腺癌细胞Panc-1和Patu-8988增殖的影响;采用流式细胞术和TUNEL染色检测克班宁对细胞凋亡的影响;采用Western blot实验检测克班宁对DUSP5蛋白,增殖相关蛋白Ki67,凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax,以及p-ERK1/2蛋白的影响。结果:克班宁处理24 h后的胰腺癌细胞增殖能力显著降低(P<0.05),而凋亡率明显升高(P<0.05);同时,DUSP5的表达上调(P<0.05),p-ERK1/2的表达下降(P<0.05)。敲低DUSP5能够有效逆转克班宁对胰腺癌细胞的抑增殖和促凋亡作用(均P<0.05),还能部分恢复克班宁降低的p-ERK1/2的蛋白水平(P<0.05)。结论:克班宁能够抑制胰腺癌细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制是促进DUSP5的表达进而抑制ERK1/2的激活。

克班宁对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究异喹啉生物碱克班宁对肝癌细胞株Huh7的生长抑制作用及促凋亡作用。方法用不同浓度的克班宁作用于Huh7细胞后,按照CCK-8法检测克班宁对肝癌细胞增殖的影响,并据此将后面的实验分为对照组和给药组(36、48、60μg·mL^(-1));利用形态学实验观察克班宁对肝癌细胞生长和状态的影响,平板克隆实验观察细胞克隆形成能力;Hoechst 33258实验和流式细胞术检测细胞凋亡状态和水平;Western blot检测细胞中BAX、Bcl-2、PARP凋亡相关蛋白及AKT、p-AKT、FoxO3a、p-FoxO3a的表达情况。结果 与对照组相比,克班宁可明显抑制Huh7细胞的增殖能力,抑制作用呈剂量和时间依赖性;且可诱导Huh7细胞出现明显的形态学变化;并在长时间内影响其克隆形成能力;同时还显著促进细胞凋亡,上调PARP、BAX蛋白的表达,下调Bcl-2、p-AKT、p-FoxO3a蛋白的表达。结论 克班宁不仅能抑制肝癌细胞株Huh7的增殖,还能促进细胞凋亡,且其促凋亡作用有可能是通过抑制AKT/FoxO3a信号通路产生的。

克班宁的抗心律失常作用

静注克班宁5mg/kg能使BaCl_2引起的大鼠心律失常迅速转为窦性节律;可明显提高乌头碱引起大鼠室颤和死亡的用量;能减少CaCl_2所致大鼠和氯仿所致小鼠的室颤发生率和死亡率;但不能提高豚鼠心脏哇巴因中毒的耐受量。

克班宁注射剂在家兔体内的药动学研究

目的:建立血清中克班宁(crebanine,Cre)浓度的高效液相测定方法,探讨克班宁注射剂在家兔体内的药动学过程。方法:家兔按2.0 mg.kg-1量耳缘静脉注射克班宁后5,10,20,30,50,70,90,110 m in采血,用HPLC测定血清中克班宁浓度,以DAS软件拟合药动学参数。结果:克班宁平均回收率分别为(89.4±2.5)%,(105.4±4.1)%,(102.7±5.8)%;精密度分别为日内RSD 2.8%,3.9%,5.6%;日间RSD分别为8.2%,6.8%,7.2%。克班宁注射剂在家兔体内成二室模型,雌、雄兔体内的药动学参数经t检验差异无显著性意义。主要药动学参数为:t1/2α=(3.246±0.222)m in,t1/2β=(36.675±5.525)m in,Cm ax=(1.401±0.063)mg.L-1,Vd=(5.928±0.877)L.kg-1,C l=(0.051±0.003)L.m in-1.kg-1。结论:克班宁静注在家兔体内为超速处置类(t1/2<1 h)药物,其在体内的分布迅速、广泛。

克班宁急性毒性与抗心律失常活性的初步研究

目的研究克班宁(crebanine,Cre)的急性毒性与抗心律失常作用.方法以改良寇氏法考察小鼠静注LD50,以BaCl2致大鼠心律失常模型观察Cre的治疗与预防作用.结果LD50为9.382mg/kg,95%可信限为8.314～10.600mg/kg;治疗组与预防组iv Cie2.5mg/kg可使大鼠恢复窦律,与对照(生理盐水)组相比,差异有显著性意义.结论Cre有一定的毒性,对大鼠实验性心律失常具有治疗与预防作用.

克班宁对豚鼠胆囊和胆道口括约肌的作用研究

在豚鼠离体胆囊和胆道括约肌制备上，克班宁（Ｃｒｅ）明显拮抗组织胺，Ｃａ￣（２＋），Ｋ￣＋引起的收缩、呈现非竞争性拮抗；并能抑制胆囊肌依赖细胞内Ｃａ￣（２＋）所致的收缩。在离体胆道口括约肌，有节律性的自发收缩及高Ｋ￣＋（４０ｍｍｏｌ／Ｌ）引起的时相收缩及持久收缩，Ｃｒｅ均可产生明显的抑制。

克班宁的镇痛作用部位及作用机制探讨

以探究克班宁的镇痛作用部位并初步明确其镇痛机制为目的。采用小鼠足趾注射甲醛法、热板法及腹腔注射醋酸(扭体法)所致疼痛模型,探讨克班宁的镇痛作用;以小鼠输精管经壁电刺激法,了解克班宁对吗啡受体的影响。结果发现克班宁在3.2 mg/kg时对三种疼痛模型均显示明显的抑制作用,并能明显抑制小鼠输精管经壁电刺激所引起的收缩,且该收缩不能被纳络酮所拮抗。因此,克班宁可能具有中枢样镇痛作用,但作用机制与吗啡受体无关。

克班宁灌胃给药抗心律失常作用的研究

目的研究克班宁灌胃给药抗心律失常的作用。方法分别采用氯仿致小鼠心律失常和氯化钡、乌头碱致大鼠心律失常2种动物模型,以BL-420生物机能实验系统地观察心电图的相关指标,记录并分析心电图曲线。观察不同剂量的克班宁对小鼠、大鼠心律失常的保护作用。结果与空白组比较,克班宁各剂量组能明显拮抗氯仿所致的室颤发生率(P<0.05),能推迟氯化钡诱发的心律失常发生时间并缩短心律失常持续时间(P<0.01,P<0.05),延长乌头碱诱发的各种室性心律失常出现时间(P<0.05)。结论克班宁灌胃给药可对抗氯仿、氯化钡和乌头碱诱发的实验性心律失常。

药用异喹啉生物碱的研究——Ⅱ.白线薯生物碱

从白线薯(Stephania brachyandra Diels)的块根中分得四种生物碱,经UV,IR,~1H-NMR,^(13)C-NMR,MS等方法鉴定为:清风藤碱(Sino-acutine,Ⅰ),克斑宁(Crebanine,Ⅱ),荷包牡丹碱(Dicentrine,Ⅲ),千金藤碱(Stephanine,Ⅳ)。其中,清风藤碱和克斑宁系首次从该植物中获得,收率分别高达1.02％和1.39％。清风藤碱的碘甲烷衍生物有一定的松弛横纹肌作用。

云南含克班宁的千金藤属植物资源调查研究

目的 :了解含克班宁 (Crebanine,Cre)的千金藤属植物 (山乌龟 )在云南的资源状况 ;筛选克班宁含量高的品种。方法 :对云南省的部分县、市进行实地调查与采集样品 ,采用形态性状鉴别、薄层色谱鉴别以及提取分离等法比较克班宁含量与提取率。结果 :克班宁含量高的品种集中分布于临沧及其周边地区 ,且枝叶多有红色汁液。结论 :含克班宁的千金藤属植物资源在云南中、南部较丰富 ,可合理开发利用。

克班宁对耐药细胞K562/HHT逆转作用的研究

目的 对克班宁 (CRE)逆转白血病耐药细胞系K5 6 2 /HHT的耐药性进行研究。方法 细胞毒试验采用MTT法 ,细胞内柔红霉素 (DNR)积累采用荧光分光光度法测定。结果 克班宁 5 μmol·L-1时显著增加高三尖杉酯碱(HHT)对K5 6 2 /HHT的细胞毒 ,细胞毒作用增强 13 0倍 ,同等条件下 8μmol·L-1维拉帕米为 19 4倍。克班宁能显著增加K5 6 2 /HHT细胞内DNR浓度。

克班宁注射剂制备工艺的初步研究

目的制备性质稳定的克班宁注射剂,优选最佳制备工艺。方法采用正交试验法,以可见分光光度法对其色泽变化进行考察。结果配制0.25%克班宁注射剂的最佳工艺为:以盐酸为成盐用酸,pH为4.4,NaHSO3为抗氧剂,熔封通CO2且避光保存。以该法配制的克班宁注射剂沸水加热6h,强光照射12h,色泽无变化。结论按上述方法配制的克班宁注射剂稳定性较好。

克班宁注射剂原料药的质量标准研究

建立克班宁(crebanine)注射剂原料药的质量控制方法.方法:采用TLC进行定性鉴别.以RP-HPLC法Zirchrom ODS柱(250 mm×4.6 mm,15 μm)定量测定,流动相为甲醇-水-三乙胺(88:12:0.05),流速:1.0 mL·min-1,检测波长282 nm.结果:供试品与对照品在薄层板相同位置上显相同斑点;克班宁的峰面积与浓度呈线性关系,线性范围为0.9～10.8μg,r=0.999 7,平均加样回收率为99.4%～102.7%,RSD为1.3%～1.9%,10批样品含量均大于90%.结论:本法简便、准确、可靠,可作为该原料药的质量控制方法.

HPLC测定克班宁注射液中原料药的有关物质

目的分析克班宁注射液原料药中的有关物质。方法应用HPLC法测定不同来源的10批克班宁原料药样品。采用Zirchrom ODS柱（250mm×4．6mm），以流动相A和B作梯度洗脱[（A为甲醇-水-10％三乙胺（50：50：0．5），B为甲醇-10％三乙胺（100：0．5）]；流速1．0ml·min^-1，检测波长282nm，分析时间45min。结果10批原料药中有两个有关物质共有峰，其中5批有6个有关物质共有峰，有关物质峰占总峰面积的3．04％～23．94％。结论所建分析方法灵敏、重复性好，为克班宁原料药的质量控制提供了依据。

HPLC测定盐酸克班宁注射液中盐酸克班宁的含量

目的：用高效液相色谱法测定盐酸克班宁注射剂中盐酸克班宁的含量。方法：以Agilent Eclipse XDB—C18柱为色谱柱；流动相为甲醇-水（70：30），流速1mL／min；检测波长为282nm。结果：浓度在2.2-26．4μg／mL范围内呈线性关系，回归方程为：y=39．627x＋1．992，r=99999；平均回收率为99．80％：目内稳定性RSD为0．60％，日间稳定性RSD为1．28％；高、中、低3种浓度，其日内精密度RSD在0．92％～2．88％，目问精密度RSD在0．41％～1．80％．结论：HPLC法简便、准确、快速，适用于盐酸克班宁注射剂的质量检验分析。

盐酸克班宁氰基丙烯酸正丁酯毫微粒的制备工艺研究

目的:优选盐酸克班宁毫微粒的制备最佳工艺。方法:以氰基丙烯酸正丁酯为聚合材料,采用乳化聚合法制备盐酸克班宁毫微粒Cre-PBCA-NP;以包封率为评价指标,通过均匀设计法,优化制备工艺。结果:按优化工艺条件,制得载药毫微粒,包封率80%.结论:经过优化筛选出的工艺,为盐酸克班宁聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒的最佳制备工艺。